核酸均一化方法及其试剂盒和应用技术

本发明专利技术提供一种核酸均一化方法及其试剂盒和应用，所述方法至少包括以下步骤：将核酸饱和吸附量相同的核酸吸附材料分别加入到若干份核酸溶液中，并保证每份核酸溶液中加入的核酸吸附材料都能达到核酸吸附饱和状态；分离饱和吸附核酸的核酸吸附材料；从分离获得的核酸吸附材料中分别洗脱核酸。本发明专利技术所公开的核酸均一化方法，操作简单，该方法可实现核酸、PCR产物或高通量测序文库浓度的快速、稳定等比例稀释。

Homogenization of nucleic acid and its kit and Application

The invention provides a nucleic acid homogenization method and its kit and application. The method comprises at least the following steps: adding nucleic acid adsorbing materials with the same saturated adsorption capacity into several parts of nucleic acid solution, ensuring that the nucleic acid adsorbing materials added in each part of nucleic acid solution can reach the saturated state of nucleic acid adsorption; separating the nucleic acid adsorbing materials saturated with nucleic acid adsorbing; The nucleic acid adsorbents were separately eluted. The method of nucleic acid homogenization disclosed by the invention has simple operation, and can realize rapid and stable proportional dilution of nucleic acid, PCR products or high throughput sequencing library concentration.

【技术实现步骤摘要】
核酸均一化方法及其试剂盒和应用
本专利技术属于高通量测序领域，具体涉及一种核酸均一化方法及其试剂盒和应用，该方法可实现核酸、PCR产物或高通量测序文库浓度的快速、稳定等比例稀释，为其实现规模化应用奠定了基础。
技术介绍
核酸的筛查或诊断，已被广泛应用于临床、疾病防控、食品安全检测、进出口检疫检测等多种场景中。对于某些应用场景，如高通量测序，为了连续平行分析、增加实验检测量、降低测序成本，通常会将不同样品标记好后混合在一起进行测序，这需要保证不同的样品混样前浓度基本一致，最终不同样品可产生同样的数据量。核酸均一化是指将若干份核酸制成每份核酸含量相等的过程。传统的核酸浓度的等比例稀释通常采用定量后连续稀释来实现，定量通常采用吸光度或荧光染料、荧光探针的方法，若采用吸光度定量则通常会受到其他物质(蛋白、多糖、非目的片段核酸和其他杂质)的显著影响，造成目的产物定量的较大偏差；采用荧光染料法或荧光探针法定量结果准确，但对多样品的连续稀释操作，则操作复杂，费时费力，尤其特殊的荧光定量仪器(如Qubit或各种荧光定量PCR仪)和对应试剂的引入，会极大的增加核酸样品等比例稀释的成本。另外，大量样品的自动等比例稀释操作也几乎不可能实现，这对临床、疾控等时效性要求高的应用场景局限性极大。磁珠，作为纳米微球的一种，被广泛的应用于核酸的提取。核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下，其中的DNA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”，形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下，复合物即分离出来。最后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后，即得到欲提取的核酸物质。如何利用磁珠或者其他核酸吸附材料实现对核酸的均一化处理，尚未有文献报道。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种核酸均一化方法及其试剂盒和应用，用于解决现有技术中核酸均一化方法繁琐，偏差大，无法实现自动化等的缺陷。为实现上述目的及其他相关目的本专利技术提供一种核酸均一化方法，至少包括以下步骤：(1)将核酸饱和吸附量相同的核酸吸附材料分别加入到若干份核酸溶液中，并保证每份核酸溶液中加入的核酸吸附材料都能达到核酸吸附饱和状态；(2)分离饱和吸附核酸的核酸吸附材料；(3)从分离获得的核酸吸附材料中分别洗脱核酸。优选地，所述核酸吸附材料可选择性地包被羧基、氨基、羟基或者硅基任意一种或几种。优选地，各所述核酸溶液加入的核酸吸附材料相同且等量。优选地，所述核酸吸附材料是纳米微球或玻璃颗粒。优选地，所述核酸吸附材料为单分散纳米微球或单分散玻璃颗粒。优选地，所述纳米微球可被磁性吸附。优选地，所述纳米微球是采用油酸包被Fe3O4形成的。优选地，所述纳米微球的平均粒径是0.5～2微米。优选地，还包括步骤(4)向核酸中加入溶剂。进一步地，还包括步骤(4)向核酸中加入溶剂。所述溶剂是指用于纯化、分散核酸的常用溶剂。本专利技术的另一个方面还提供了试剂盒，所述试剂盒中包含核酸吸附材料，所述颗粒材料包被羧基、氨基、羟基或者硅基任意一种或几种。优选地，所核酸吸附材料是纳米微球或玻璃颗粒。更优选地，所述核酸吸附材料是单分散纳米微球或单分散玻璃颗粒。更优选地，所述纳米微球可被磁性吸附。更优选地，所述纳米微球是采用油酸包被Fe3O4形成的。优选地，所述颗粒材料的直径是0.5～2微米。优选地，所述颗粒材料是单分散性。优选地，所述试剂盒中还包括体积分数70～85％乙醇、水或Tris-HCL缓冲液中的至少一种。优选地，所述Tris-HCL缓冲液pH是7.0～8.5。本专利技术的另一方面提供了上述试剂盒用于核酸均一化方法的用途。如上所述，本专利技术的核酸均一化方法，具有以下有益效果：采用本专利技术所述的方法，可以快速实现对核酸的均一化，尤其是对多个核酸的等比例稀释，可以十分快捷的实现，而且偏差小，特别适用于核酸的高通量测定。附图说明图1显示为实施例中第二组自动化等比例稀释饱和吸附曲线图具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。此外应理解，本专利技术中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；还应理解，本专利技术中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥在所述组合设备/装置前后还可以存在其他设备/装置或在这些明确提到的两个设备/装置之间还可以插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。在本专利技术说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego，1999；和METHODSINMOLECULARBIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)HumanaPress，Totow本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸均一化方法，其特征在于，至少包括以下步骤：(1)将核酸饱和吸附量相同的核酸吸附材料分别加入到若干份核酸溶液中，并保证每份核酸溶液中加入的核酸吸附材料都能达到核酸吸附饱和状态；(2)分离饱和吸附核酸的核酸吸附材料；(3)从分离获得的核酸吸附材料中分别洗脱核酸。

【技术特征摘要】
1.一种核酸均一化方法，其特征在于，至少包括以下步骤：(1)将核酸饱和吸附量相同的核酸吸附材料分别加入到若干份核酸溶液中，并保证每份核酸溶液中加入的核酸吸附材料都能达到核酸吸附饱和状态；(2)分离饱和吸附核酸的核酸吸附材料；(3)从分离获得的核酸吸附材料中分别洗脱核酸。2.根据权利要求1所述的核酸均一化方法，其特征在于：所述核酸吸附材料可选择性地包被羧基、氨基、羟基或者硅基任意一种或几种。3.根据权利要求1所述的核酸均一化方法，其特征在于，各所述核酸溶液加入的核酸吸附材料相同且等量。4.根据权利要求3所述的核酸均一化方法，其特征在于，所述核酸吸附材料是纳米微球或玻璃颗粒。5.根据权利要求4所述的核酸均一化方法，其特征在于，所述核酸吸附材料为单分散纳米微球或单分散玻璃颗粒。6.根据权利要求3所述的核酸均一化方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张捷，李强，王凯，王宁，倪晶奕，卢忠鹰，邵俊斌，
申请(专利权)人：上海之江生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31