The invention discloses a method for detecting activated T cells by single-cell sequencing, which includes the following steps: (1) obtaining tumor-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) induced and amplified by heterologous gene hybridization cells; (2) isolating single cells and splitting them; (3) reverse transcription of the sample's RNA to obtain the DNA; (4) PCR using the DNA as template. Amplification, product purification, Tagmentation reaction, complete the construction of the DNA sequencing library; (5) High throughput sequencing of the constructed DNA library; (6) Bioinformatics analysis of the sequencing results to detect the activation of T cells.
【技术实现步骤摘要】
一种单细胞测序检测活化T细胞的方法
本专利技术属于生物医学领域，尤其是涉及一种单细胞测序检测活化T细胞的方法。
技术介绍
T细胞是淋巴细胞的一种，在免疫反应中扮演着重要的角色。T细胞在胸腺内分化成熟，成熟后移居于周围淋巴组织中。T细胞主要用以抵抗外来入侵物且具有多样的生物学功能。T细胞治疗是细胞免疫治疗的核心手段，被认为最具前景、最有希望消灭肿瘤的方法。然而，目前使用的T细胞存在活性不强、数量不足、不能向肿瘤部位聚集、无有效的疗效监测手段等难题。因此，围绕这些关键科学技术问题，我们前期通过解除T细胞抑制因子PD-1，构建活性T细胞；以异源基因杂交细胞扩增T细胞并赋予其抗癌特性，从而获得数量更多、活性更强的CTLs，发挥更理想的高效抗癌效应。然而，利用传统的方法（流式细胞仪检测细胞表面活化分子、细胞杀伤试验、ELISA检测细胞活化后分泌的细胞因子等）在体外对所诱生的CTLs的活化程度进行检测，存在检测结果受时间和空间影响较大的问题。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不完全相同的，单细胞测序技术可以在单细胞水平对全转录组进行扩增与测序，在整体水平上...
【技术保护点】
1.一种单细胞测序检测活化T细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）获取经异源基因杂交细胞诱导扩增的肿瘤特异性CTLs；2）分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2）获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；4）以cDNA为模板进行PCR扩增，构建测序文库，进行测序：使用美国Illumina公司的NexteraXT试剂盒，对上述步骤3）得到的逆转录产物进行扩增和纯化，构建高通量测序文库；完成后将文库送...
【技术特征摘要】
1.一种单细胞测序检测活化T细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）获取经异源基因杂交细胞诱导扩增的肿瘤特异性CTLs；2）分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2）获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；4）以cDNA为模板进...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，薛志刚，阳诺，钟莉娉，何坚，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西,45
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。