一种构建杂交捕获测序文库的方法及应用技术

本发明专利技术属于基因检测领域，具体涉及一种基因组DNA直接杂交的策略和DNA文库构建的方法，及其在核酸检测领域的应用。其步骤如下：将基因组DNA片段化并且磷酸化；片段化的基因组DNA与捕获探针杂交；杂交完成后洗脱捕获得到的单链DNA；单链DNA与接头连接得到连接产物；以连接产物为模板进行PCR扩增，得到扩增产物，对扩增产物进行纯化获得测序文库。本发明专利技术提供了采用片段化基因组DNA直接杂交的方法，普遍适用于固相芯片捕获杂交系统与液相捕获杂交系统，极大的提升了捕获效率与均衡性。同时，本发明专利技术进一步提供了一种DNA文库构建方法，具有方法简单，成本低廉，适用性广等特点，可用于DNA或RNA的高通量测序文库的构建。

【技术实现步骤摘要】
一种构建杂交捕获测序文库的方法及应用
本专利技术属于基因检测领域，具体涉及一种基因组DNA直接杂交的策略和DNA文库构建的方法，及其在核酸检测领域的应用。
技术介绍
基于二代测序的目标区域捕获方法在科研和临床基因检测领域已被广泛应用。捕获测序技术由于需要很少的测序数据量，因此不仅降低了检测成本，而且降低了数据分析过程中的计算量与计算时间。目前，已有大量的捕获测序方法被开发，主要是基于PCR的捕获技术与基于杂交的捕获技术。基于杂交的捕获技术分为芯片杂交和液相杂交两种。芯片杂交捕获技术是一种将探针合成在芯片上，与DNA文库杂交结合，不能结合的非特异性DNA文库片段从芯片上洗去，而靶向富集的DNA文库稍后被洗脱下来用于测序。液相探针捕获技术是通过体外转录固相探针产生生物素标记的RNA探针，也可以直接通过合成产生DNA探针，在溶液中进行杂交富集的技术。基因组DNA经过文库构建过程，形成DNA文库后，再与探针杂交，经过捕获与洗脱后，获得捕获的DNA文库，再一次进行文库富集后，进行测序。液相探针捕获技术是几种捕获技术中应用最为广泛的一种，该方法特别适用于多基因的捕获测序。在杂交捕获过程中，由于现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建杂交捕获测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：将基因组DNA片段化并且磷酸化；片段化的基因组DNA与捕获探针杂交；杂交完成后洗脱捕获得到的单链DNA；单链DNA与接头连接得到连接产物；以连接产物为模板进行PCR扩增，得到扩增产物，对扩增产物进行纯化获得测序文库。

【技术特征摘要】
1.一种构建杂交捕获测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：将基因组DNA片段化并且磷酸化；片段化的基因组DNA与捕获探针杂交；杂交完成后洗脱捕获得到的单链DNA；单链DNA与接头连接得到连接产物；以连接产物为模板进行PCR扩增，得到扩增产物，对扩增产物进行纯化获得测序文库。2.根据权利要求1所述的一种构建杂交捕获测序文库的方法，其特征在于，所述的片段化的基因组DNA为经过机械打断的基因组DNA、经过酶切法打断的基因组DNA、外周血游离DNA、肿瘤游离DNA或自然降解的基因组DNA。3.根据权利要求1所述的一种构建杂交捕获测序文库的方法，其特征在于，所述接头为5’接头和3’接头；所述PCR扩增采用测序平台兼容的接头引物进行PCR扩增。4.根据权利要求1所述的一种构建杂交捕获测序文库的方法，其特征在于，所述PCR扩增的退火温度为62℃-72℃。5.根据权利要求3所述的一种构建杂交捕获测序文库的方法，其特征在于，所述5’接头和3’接头的一对序列包含正向序列F与反向序列R；所述反向序列R包含随机碱基N区域和反向互补区域，其中，所述随机碱基N的个数为3-6个，且反向序列R...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢文翔，朱淼，白云飞，朱毅华，顾万君，郑卫国，
申请(专利权)人：南京迪康金诺生物技术有限公司，无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32