制备制造技术

本发明专利技术涉及生产铅‑

Preparation

The present invention relates to the production of lead.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备212Pb标记的单克隆抗体
本专利技术涉及用于治疗用途的铅-212的生产。尤其地，本专利技术的实施方式涉及基于铅-212的放射性标记的蛋白质的生产方法，例如放射性免疫共轭物。
技术介绍
铅-212(212Pb)是一种很有前景的治疗性放射性核素，因为它通过短寿命的α发射子体衰变，每一212Pb衰变平均导致一个α粒子。212Pb的半衰期是10.6个小时，这限制了对其的使用，因此需要快速、安全地生产和纯化工艺。目前，在针对腹膜癌的临床试验中，基于铅-212的放射性免疫共轭物使用在阳离子交换柱中从224Ra分离的以及在无机酸中洗脱的212Pb，所述无机酸必须在放射性标记之前重构。目前的方法由于低于定量洗脱输出，以及洗脱与标记之间的时间而导致损失。因此，需要将这些问题考虑在内的新方法。
技术实现思路
本专利技术涉及一种生产放射性核素标记的蛋白质的方法，所述方法包括：a)提供一种含有224Ra和212Pb的水溶液，以及含有一与螯合剂共轭的蛋白质的水溶液或易溶解制剂，b)混合并孵化a)中提供的溶液以提供一含有放射性核素标记的蛋白质的反应溶液，c)通过凝胶过滤色谱法纯化反应溶液，以及d)从步骤c)的纯化中回收放射性核素标记的蛋白质。所述蛋白质可以选自由单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、合成蛋白质和肽组成的组。在步骤d)中回收的放射性核素标记的蛋白质可以包括212Bi和212Pb。在本专利技术的一个实施例中，在步骤a)中含有224Ra和212Pb的溶液具有由224Ra和212Pb产生的1至10000MBq的放射性活度，例如50至1000MBq，1kB1至1GBq，例如10kBq至100MBq，例如100kBq至10Mbq，例如10MBq至200MBq。在本专利技术的另一个实施例中，在步骤a)的水溶液中212Pb比224Ra的以MBq表示的活度比为0.5-2，例如0.8-1.5，或者例如0.8-1.3，或者优选例如0.9-1.15。在本专利技术的另一个实施例中，与在步骤d)中回收的与螯合剂共轭的蛋白质以0.01-50mg的量存在，例如0.1-25mg，例如0.5-10mg，例如1-5mg。在本专利技术的另一个实施例中，在步骤a)中溶液的量为10μL至1000mL，例如500μL至100mL，例如1mL至10mL。在本专利技术的另一个实施例中，在步骤a)中含有与螯合剂共轭的蛋白质的溶液具有浓度为0.1至4mg/ml的与螯合剂共轭的抗体，例如0.25至2mg/ml，例如0.5至1.5mg/ml，例如0.1至10mg/ml。在本专利技术的另一个实施例中，在步骤b)中的混合和孵化进行1-180分钟，例如5-120分钟，例如15-60分钟，例如20-40分钟，例如30-60分钟。在本专利技术的另一个实施例中，在步骤c)中的所述凝胶过滤色谱法选自由脱盐纯化、脱盐和缓冲液交换和脱盐凝胶排阻分离构成的组中。在本专利技术的另一个实施例中，反复进行脱盐以增加纯度。在本专利技术的另一个实施例中，向待纯化的原液中加入螯合剂以络合未络合的放射性核素以进一步增加在脱盐步骤中回收的最终放射性共轭物的纯度。在本专利技术的另一个实施例中，步骤c)中的纯化由离心驱动、压力驱动、真空驱动或重力驱动组成的方法中的一种来驱动。在本专利技术的另一个实施例中，所述螯合剂是TCMC。在本专利技术的另一个实施例中，抗体选自由曲妥单抗、利妥昔单抗、HH1、西妥昔单抗、贝伐单抗、达雷木单抗、阿仑单抗、派姆单抗、依帕珠单抗、L19、F8、F16、加利昔单抗、托西珠单抗、阿仑单抗、奥法木单抗、维妥珠单抗、阿夫土珠单抗、托西莫单抗、瑞妥昔和替伊莫单抗构成的组的一种或多种。在本专利技术的另一个实施例中，所述抗体对选自CD19、CD20、CD22、CD33、CD37、CD38、CD45、CD74、CD138、PSMA、HER-2、EGFR、MUC-1、MUC-18、CEA、FBP、NG2、EPCAM、粘结合蛋白多糖-1、Ca-125、LK-26、HMFG、CS-1和BCMA构成的组中的抗原具有特异性。本专利技术的另一个方面涉及通过本专利技术的方法回收的放射性核素标记的蛋白质。本专利技术的另一个方面涉及用于生产放射性核素标记的蛋白质的试剂盒，所述放射性核素标记的蛋白质包括含有224Ra和212Pb的水溶液以及含有与螯合剂共轭的蛋白质的水溶液，用于凝胶过滤色谱法的装置，以及可选地生产放射性核素标记的蛋白质的说明书。具体实施方式目前用于生产224Ra标记的蛋白质，例如一抗体的方法，由于小于定量的洗脱输出以及洗脱和标记之间的时间会导致损失。本专利技术的目的在于提供一种可替代的新的且具有创造性的方法，其将上述问题考虑在内。一个解决方案是一种在224Ra溶液中用212Pb原位标记单克隆蛋白质(例如一抗体)，随后去除224Ra的方法作为制备基于212Pb的放射性标记的蛋白质(例如放射性免疫共轭物)的替代策略。在本专利技术的上下文中，放射性免疫共轭物定义为一种包括放射性核素、共轭物和诸如抗体等蛋白质的物质。其也同样表示放射性核素标记的蛋白质或放射性核素标记的抗体。本专利技术涉及一种生产放核素标记的蛋白质的方法，所述方法包括：a)提供一种含有224Ra和212Pb的水溶液，以及含有与一螯合剂共轭的蛋白质的水溶液或易溶解制剂，b)混合并孵化a)中提供的溶液以提供一含有放射性核素标记的蛋白质的反应溶液，c)通过凝胶过滤色谱法纯化反应溶液，以及d)从步骤c)的纯化中回收放射性核素标记的蛋白质。所述蛋白质可以选自由单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、合成蛋白质和肽组成的组。所述蛋白质也可以是一谷氨酸-尿素基序(Glu-ureamotif)。所述谷氨酸-尿素基序靶向PSMA。靶向PSMA的谷氨酸-尿素基序可以选自PSMA-617、PSMA-11、MIP-1427组成的组。所述蛋白质也可以选自由生物素或卵白素或类似物，以及叶酸和衍生物组成的组。由于本专利技术的尺寸排他性歧视，因此本专利技术的蛋白质尺寸是任何大于224Ra的尺寸。因此，蛋白质的尺寸以分子质量Mr表示是大于300。在一个本专利技术的实施例中，蛋白质的尺寸的分子量Mr为500-500.000。尺寸也可以是分子量Mr为40.000-200.000或500-5000。在本专利技术的一个优选实施例中，蛋白质为抗体。在本专利技术的一个实施例中，用于本专利技术的方法中的224Ra可以使用离子交换色谱法，耦合228Th的螯合剂树脂(例如Ac-树脂或TRU-树脂或ThO浆液)来制造。所述ThO浆液如美国专利US7,887,782中描述的。本专利技术的实例表明在224Ra与212Pb平衡的溶液中，以单克隆抗体为例的TCMC共轭的蛋白质可以由212Pb有效地标记。随后，使用例如脱盐凝胶排阻分离法可以将212Pb标记的共轭物从阳离子224Ra中分离。这意味着可以将随时可以使用的224Ra/212Pb溶液从集中供应商运输至终端用户。在溶液中使用224Ra有两个优点：1)避免了酸萃取步骤，节省了操作时间；2)省时省力，不需要蒸发酸等。产出率也更高。从在强直性脊柱炎的治疗中使用224Ra的研究可知，在不产生相当大的骨髓毒性的情况下可以将适量(通常少于10MBq)的224Ra施加于患者，这表明只要212Pb产物不产生高度的骨髓毒性，在基于212Pb的产物中1-2％的224Ra含量是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产放射性核素标记的蛋白质的方法，所述方法包括：a)提供一种包括224Ra和212Pb的水溶液，和一包括与一螯合剂共轭的蛋白质的水溶液；b)混合和孵化a)中提供的溶液以提供一含有放射性核素标记的蛋白质的反应溶液；c)通过凝胶过滤色谱法纯化反应溶液；以及d)从步骤c)的纯化中回收放射性核素标记的蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.24 EP 16176263.81.一种用于生产放射性核素标记的蛋白质的方法，所述方法包括：a)提供一种包括224Ra和212Pb的水溶液，和一包括与一螯合剂共轭的蛋白质的水溶液；b)混合和孵化a)中提供的溶液以提供一含有放射性核素标记的蛋白质的反应溶液；c)通过凝胶过滤色谱法纯化反应溶液；以及d)从步骤c)的纯化中回收放射性核素标记的蛋白质。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质选自由单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、合成蛋白质和肽构成的组中。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质具有500-500000道尔顿的尺寸。4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于，所述步骤a)中包括224Ra和212Pb的溶液具有由224Ra和212Pb产生的放射性活度1至10000MBq，例如50至1000MBq，1kB1至1GBq，例如10kBq至100MBq，例如100kBq至10Mbq，例如10MBq至200MBq。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤a)中的水溶液中的212Pb和224Ra之间以MBq为单位的活度比例为0.5至2，例如0.8-1.5、或例如0.8-1.3，或优选地例如0.9-1.15。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤d)中回收的与螯合剂共轭的抗体的存在量为0.05-50mg，例如0.1-25mg，例如0.5-10mg，例如1-5mg。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤a)中的溶液体积为100μL至1000mL，例如500μL至100mL，例如1mL至10mL。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述在步骤a)中含有与螯合剂共轭的抗体的溶液具有浓度为0.1至4mg/ml的螯合剂共轭的抗体，例如0.25至2mg/ml，例如0.5至1.5mg/ml，例如0.1至10mg/ml。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤b)中的混合和孵化进行1-180分钟，例如5-120分钟，例如15-60分钟，例如20-40分钟，例如30-60分钟。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述在步骤c)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伊·哈维克·拉森，
申请(专利权)人：塞控斯公司，
类型：发明
国别省市：挪威,NO