The embodiment of the present invention provides an antibody purification method. Animals immunized with M1 recombinant protein have better reactivity to the recombinant protein than natural protein, and can produce monoclonal antibodies with stable performance and high antigen titer. The CA_AS method has great advantages in antibody purification, such as antibody recovery rate, antibody activity and antibody purity, and the method is simple to operate and can be reused. The production cost is low.
【技术实现步骤摘要】
一种抗体纯化方法
本专利技术实施例涉及生物制药
，更具体地，涉及一种抗体纯化方法。
技术介绍
当代抗体药物的工艺研发是基于基因工程、细胞工程和发酵工程基础之上的，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞作为主要的哺乳动物细胞表达宿主细胞具有遗传背景清晰、具备翻译后加工能力等特点，成为了蛋白质生产的标准工业化细胞株，同样也适合于抗体蛋白的表达。随着细胞悬浮培养技术的发展，使得大规模培养成为可能，而无血清培养基的应用则使得蛋白纯化工艺更为简便，这一切都大大加速了抗体药物的产业化进程，为制备价廉质优的抗体药物奠定了基础。自首个单克隆抗体制备以来，在Koehler和Milstein的基础上经过近30年的蓬勃发展，单克隆抗体制备技术在生命科学研究以及医学实践方面做出了巨大的贡献，已成为了现代生物技术支柱产业之一。单克隆抗体药物因其靶向特异性，毒副作用低，治疗的高效性等明显优势在肿瘤自身免疫疾病、器官移植排斥及病毒感染等领域有重要的应用。抗体药物制造工艺从研发时期的细胞株构建、培养基优化、上游细胞培养、下游纯化到最后制剂这五个方面的任何一个环节都对抗体药物有很重要的影响，其中又以下游...
【技术保护点】
1.一种抗体纯化方法，其特征在于，包括：步骤一、在M1基因SEQ NO.2中插入表达载体pet32a，得到M1重组蛋白，以所述M1重组蛋白为抗原，免疫动物，再进行细胞融合和亚克隆；将上述亚克隆后的细胞扩大培养并注射至小鼠腹腔，7‑10日后抽取小鼠体内的腹水，将腹水在–20℃下保存；步骤二、将腹水置于4℃解冻过夜，取出后4℃条件下，10000×g离心10min，取上清，4℃保存；取腹水，用0.06mol/LpH4.4醋酸缓冲液稀释3倍，用1mol/L HCl调节pH至4.8；按每毫升稀释腹水加11μl辛酸的比例，室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，4℃静置2h；取出后...
【技术特征摘要】
1.一种抗体纯化方法，其特征在于，包括：步骤一、在M1基因SEQNO.2中插入表达载体pet32a，得到M1重组蛋白，以所述M1重组蛋白为抗原，免疫动物，再进行细胞融合和亚克隆；将上述亚克隆后的细胞扩大培养并注射至小鼠腹腔，7-10日后抽取小鼠体内的腹水，将腹水在–20℃下保存；步骤二、将腹水置于4℃解冻过夜，取出后4℃条件下，10000×g离心10min，取上清，4℃保存；取腹水，用0.06mol/LpH4.4醋酸缓冲液稀释3倍，用1mol/LHCl调节pH至4.8；按每毫升稀释腹水加11μl辛酸的比例，室温搅拌下逐滴加入辛酸，于30min内加完，4℃静置2h；取出后，4℃条件下，15000×g离心30min，取上清，加入1/10体积的0.01mol/LPBS，用1mol/LNaOH调pH至7.2，在冰面操作加入饱和硫酸铵至45％饱和度，静置30min；取出后，10000×g离心30min，弃上清，将沉淀4℃保存；步骤三、将步骤二中的沉淀淀以0.01mol/LpH7.2PB溶液A重溶，经SepharoseG-25除盐后，过DEAE阴离子层析柱；以含0.5mol/LNaCl...
【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，王长乐，
申请(专利权)人：武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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