甾体化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物技术

本发明专利技术公开了一种甾体化合物，甾体化合物的结构式如下；

Steroid Compounds and Their Preparation, Application and Antineoplastic Drugs

The invention discloses a steroid compound, whose structure formula is as follows.

【技术实现步骤摘要】
甾体化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物
本专利技术属于海洋微生物药物的应用领域，具体涉及甾体化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物。
技术介绍
肿瘤是人类健康和生命的巨大威胁，其治疗的关键是要找到能准确遏制肿瘤细胞生长的措施。肿瘤细胞的增殖、存活和分化，受到多种遗传和分子改变的影响。肿瘤的生长和存活所依赖的多种信号通路之间存在着交叉和代偿。这种复杂性使得仅作用于一个靶点不能完全杀灭肿瘤细胞。肿瘤细胞的这种特殊的生存机制也造成了现有抗肿瘤药物耐药性的频繁出现。因此，临床上需要能作用于多种受体或信号通路从而影响多个肿瘤生长重要环节的药物。这种需求也促使人们转向新的来源寻找机制新颖、活性独特的抗肿瘤活性物质。海洋具有高盐、高压、寡营养特点，因此海洋微生物具有独特的代谢途径，使之能产生一些不同于陆地微生物的次级代谢产物。近些年来，海洋微生物采集、培养等技术的突破，将海洋活性物质研发工作从近浅海拓展到了更广阔的深远海。相对于近浅海微生物，深海微生物次级代谢产物的结构更加复杂多样，活性也更显著。因此，从深海微生物中寻找低毒高效的抗肿瘤新药目的性强，成功率高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：充分利用深海微生物资源优势，提供一种甾体化合物。一种甾体化合物，甾体化合物的结构式如下；甾体化合物的结构式中R1为H时，R2为H；R1为OH时，R2为H或OH。本专利技术还提供一种甾体化合物的制备方法，包括以下步骤：S1、将粒状青霉菌在培养基中进行发酵培养，得到发酵产物；S2、将发酵产物进行萃取，得到萃取液；萃取液经分离纯化后，得到甾体化合物。优选的，培养基中甘露醇20ml/L、酵母提取粉3g/L、KH2PO40.5g/L、谷氨酸钠：10g/L、葡萄糖10g/L、MgSO4·7H2O0.3g/L、麦芽糖20g/L、玉米浆1mL/L。本专利技术提供的甾体化合物以及甾体化合物的盐类用于制备抗肿瘤的药物。优选的，抗肿瘤的药物用于治疗膀胱癌、肺癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、胶质瘤，宫颈癌。本专利技术还提供一种抗肿瘤的药物，包括甾体化合物和甾体化合物的盐中的至少一种以及药学上可以接受的载体。相对于现有技术而言，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术甾体化合物通过粒状青霉菌在特定的培养基中发酵产生，具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物，本专利技术为研发抗肿瘤药物提供了新的化合物来源，利用丰富的海洋微生物作为发酵原料发酵制备甾体化合物作为抗肿瘤活性物质，降低药物生产成本，对癌细胞有明显的抑制作用，具有良好的应用前景。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。甾体化合物的制备(1)将粒状青霉菌(可从中国海洋微生物菌种保藏管理中心购买得到，保藏编号：MCCC3A00475)，加入到含有培养基的三角瓶中发酵培养，最终得到发酵产物，培养基中甘露醇：20ml/L、酵母提取粉：3g/L、KH2PO4：0.5g/L、谷氨酸钠：10g/L、葡萄糖：10g/L、MgSO4·7H2O：0.3g/L、麦芽糖：20g/L、玉米浆1mL/L。将发酵产物进行离心，收集菌液和菌体；往菌体中加入甲醇进行萃取，往萃取液中再经石油醚及二氯甲烷除脂，最后低压浓缩，得到菌体发酵粗提物；(2)将步骤(1)中菌体发酵粗提物进行硅胶柱分离，采用二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂进行洗脱；梯度得到八个馏分(Fr.1-Fr.8)；(3)将步骤(2)中第二个馏分Fr.2，经凝胶SephadexLH-20色谱柱(2×160cm)纯甲醇洗脱，再经过正相柱层析(49×460mm，石油醚-乙酸乙酯，10：1)分离得到化合物3；(4)将步骤(2)中第五个馏分Fr.5，经凝胶SephadexLH-20色谱柱(2×160cm)纯甲醇洗脱分离，得到化合物2；(5)将步骤(2)中第六个馏分Fr.6，经凝胶SephadexLH-20色谱柱(2×180cm)纯甲醇洗脱分离后，使用半制备HPLC分离，采用甲醇-水溶液(20:80→80:20)梯度洗脱得到化合物1；(6)将步骤(2)中第七个馏分Fr.7，经凝胶SephadexLH-20色谱柱(2×160cm)纯甲醇洗脱后，进行半制备HPLC分离，采用甲醇-水溶液(30:70→70:30)梯度洗脱得到化合物6；(7)将步骤(2)中第八个馏分Fr.8，经凝胶SephadexLH-20色谱柱(3×180cm)纯甲醇洗脱分离，进行半制备HPLC分离，采用甲醇-水溶液(60:40→100:0)梯度洗脱，分别得到化合物4和5。将上述步骤中得到的化合物1-6用NMR及高分辨质谱等进行结构鉴定。化合物1通过高分辨质谱HRESIMS确定其分子式为C30H48O5。1H-NMR提示化合物1中含有7个甲基(δH0.83，0.83，0.87，1.09，1.15，1.33，1.98)，3个sp2次甲基氢(δH5.14,5.19,and5.19)，4个连氧的次甲基氢信号(δH3.41,3.76,4.27,5.01)。其中δc0.86(d)、0.87(d)、0.92(d)、0.91(s)、1.38(s)这5个甲基氢信号预示着这个化合物是一个甾体骨架。13CNMR一共显示有30个碳信号,包括7个甲基，5个亚甲基，14个次甲基及4个季碳(表1和表2)，化合物1的C-5、C-6位为一双键(δC146.0，125.5)，经HSQC、COSY、HMBC、NOESY解析，确定1为16β-acetoxy-3β,7β,11β-trihydroxyergost-5,22E-diene。化合物2的分子式通过HRESIMS确定为C30H48O4，其NMR数据与化合物1极其类似，唯一差别在于化合物2的C-7为亚甲基而非次甲基。根据HMBC相关，确定化合物2为16β-acetoxy-3β,7β-dihydroxyergost-5,22E-diene。表1化合物1–6的1HNMR数据(400MHz，CD3OD)表2化合物1～6的13CNMR数据(100MHz，CD3OD)化合物3的分子式通过HRESIMS确定为C30H48O3，其NMR数据与化合物2非常相似，差别仅在于为化合物2的C-11为亚甲基而非次甲基。经HMBC等2DNMR解析，确定化合物3为16β-acetoxy-3β-hydroxyergost-5,22E-diene。化合物4的分子式通过HRESIMS确定为C30H50O7，其NMR数据与化合物1非常相似，差别在于化合物4的C-5为次甲基，C-5位多了一个羟基，C-6为亚甲基，且乙酰基连在C-7位，而非C-16位。经详细的2DNMR解析，化合物4的结构最终确定为7β-acetoxy-3β,5α,6β,11β,16β-pentahydroxyergost-22E-ene。化合物5的分子式通过HRESIMS确定为C30H50O6，其1H和13C-NMR核磁数据与化合物4非常相似，差别仅在于化合物5的C-11位为亚甲基，而非4中连氧的次甲基，通过详细的2DNMR解析，最终确定化合物5为7β-acetoxy-3β,5α,6β,16β-tetrahydroxyergost-22E-ene。化合物6通过HRESIMS确定分子式为C30H50O5，其1H和13C-NMR核磁数据与化合物5非常相似，唯一区别在于化合物6的C-5位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甾体化合物，其特征在于，所述甾体化合物的结构式如下；

【技术特征摘要】
1.一种甾体化合物，其特征在于，所述甾体化合物的结构式如下；所述甾体化合物的结构式中R1为H时，R2为H；R1为OH时，R2为H或OH。2.一种如权利要求1所述甾体化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将粒状青霉菌在培养基中进行发酵培养，得到发酵产物；S2、将发酵产物进行萃取，得到萃取液；萃取液经分离纯化后，得到甾体化合物。3.根据权利要求2所述甾体化合物的制备方法，其特征在于，所述培养基中甘露醇20ml/L、酵母提取粉3g/L、KH2PO40.5g/L、谷...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨献文，谢春兰，夏金梅，李增鹏，邵宗泽，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35