一种检测伏马菌素B1的免疫层析试纸制造技术

本发明专利技术公开了一种检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，该试纸包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫、结合垫、层析膜及吸收垫，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗FB1单克隆抗体；所述的层析膜上设有用FB1人工抗原溶液印制的隐形检测印迹和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料、碳纳米材料、碳量子点荧光纳米颗粒。本发明专利技术的试纸条具有特异性强、灵敏度高、稳定性高、安全性好、简便、快速、结果显示形象、直观、适用范围广、携带方便及可定量的特点。在保障食品安全、保护消费者健康方面具有极其重要的意义，将具有明显的经济效益和社会效益。

【技术实现步骤摘要】
一种检测伏马菌素B1的免疫层析试纸
本专利技术涉及一种免疫层析试纸，特别是涉及一种检测伏马菌素B1(FB1)的免疫层析试纸。
技术介绍
伏马菌素B1(Fumonisin，FB1)主要由串珠镰刀菌和多育镰刀菌产生的毒素，该毒素广泛存在于各种粮食及其制品中，尤其是玉米。伏马毒素纯品为白色针状结晶，为一类相关的极性、水溶性代谢产物，为多氢醇和丙三羧酸的双酯化合物，对热很稳定，不易被蒸煮破坏，在多数粮食加工处理过程均比较稳定。伏马菌素对人、畜不仅是一种促癌物，而且是一种致癌物。动物试验和流行病学资料已表明，伏马菌素主要损害肝肾功能，能引起马脑白质软化症和猪肺水肿等，并与我国和南非部分地区高发的食道癌有关，现已引起世界范围的广泛注意。但目前国内对于伏马菌素对人体危害性具体情况还不清楚。目前国内外针对FB1的检测方法主要有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫分析法4大类。生物鉴定法的优点是待检样品不需很纯，缺点是灵敏度低、实验周期较长。化学分析法的优点是经济实用，但不能准确定量，且分析结果的可重复性和再现性差。仪器分析法具有高分离、高检测效能及快速分析能力等优势，但对样品的前处理和操作人员的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫(1)、结合垫(2)、层析膜(3)及吸收垫(4)，其特征在于，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗FB1单克隆抗体；所述的层析膜上设有用FB1人工抗原溶液印制的隐形检测印迹(5)和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹(6)；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料、碳纳米材料、碳量子点荧光纳米颗粒。

【技术特征摘要】
1.一种检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，包括支撑体和固定在支撑体上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫(1)、结合垫(2)、层析膜(3)及吸收垫(4)，其特征在于，所述的结合垫上吸附有纳米材料标记的抗FB1单克隆抗体；所述的层析膜上设有用FB1人工抗原溶液印制的隐形检测印迹(5)和用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的隐形对照印迹(6)；所述的纳米材料为氮掺杂碳纳米材料、碳纳米材料、碳量子点荧光纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，其特征在于，所述的支撑体包括设置在吸附层底面的底层(7)和设置在吸附层顶面的面层(8)。3.根据权利要求1所述的检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，其特征在于，所述的氮掺杂碳纳米材料N-CDs是以壳聚糖为碳源，乙二胺为氮掺杂剂，采用水热法制备而成，具体方法为：将壳聚糖2.5g溶于5mL超纯水中，加入5mL乙二胺，混匀后置于高压反应釜的聚四氟乙烯内胆中，180℃反应2h，反应结束后将产物抽滤，双蒸水洗涤2次，60℃烘箱干燥得到N-CDs。4.根据权利要求1-3任一项所述的检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，其特征在于，所述的氮掺杂碳纳米材料标记的抗FB1单克隆抗体的制备方法为：(1)表面羧基化SiO2纳米颗粒的制备采用反相微乳法合成SiO2纳米颗粒：按体积比10:30:10:1比例取TtitonX-100、环己烷、正己醇、超纯水搅拌形成5.1mL微乳液，加入200μL氨水搅匀后，再加入80μL正硅酸乙酯，室温避光反应24h；反应结束后6000rpm离心10min，乙醇洗涤4次后用1mL乙醇复溶，形成溶液A；将0.47g氯乙酸加入到2.5mL浓度为6mol/L的NaOH溶液中，形成溶液B；将溶液A加入到溶液B中，室温搅拌反应70min；反应结束后，6000rpm离心10min，将得到的沉淀用双蒸水洗涤4次后，氮吹干燥，4℃密封保存；(2)N-CDs-SiO2荧光探针的制备将2mg表面羧基化的SiO2纳米颗粒和2mgN,N'-羰基二咪唑加入到400μLN,N-二甲基甲酰胺中，室温下磁力搅拌反应3h；将其加入到1mL浓度为lmg/mLN-CDs溶液中，15min加完，室温避光搅拌反应4h后；再次加入20μL正硅酸乙酯，0.12g氯乙酸，0.25mgN-CDs颗粒，室温避光搅拌反应2h进行包壳，反复包壳3次，氮吹干燥，4℃密封保存；(3)FB1-mAb的标记取步骤(2)制备的荧光探针15mg溶于1.5mL二氧六环、1.5mLDMF、60μL三乙胺的混合溶液中，冰浴30min，搅拌加入20μL氯甲酸异丁酯，冰浴2h，得到标记溶液；将标记溶液滴加到500μL浓度为lmg/mL的单克隆抗体溶液中，室温搅拌反应过夜；4℃条件下，反应物用0.01mol/L、pH7.4的PBS缓冲溶液透析3d，得到N-CDs标记的FB1-mAb溶液，4℃保存。5.根据权利要求1所述的检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，其特征在于，所述的碳纳米材料是以柠檬酸为碳源、半胱胺盐酸盐为钝化剂，通过水热合成法制备而成：将1.5g柠檬酸和1.62g半胱胺盐酸盐溶于7.5mL超纯水中，充分溶解后转移溶液至50mL聚四氟乙烯内胆之中，再将内胆置于高压反应釜中，200℃反应3h，反应结束后将产物抽滤，乙醇洗涤2次，65℃烘箱干燥，得到碳纳米材料TPCA。6.根据权利要求1、2或5所述的检测伏马菌素B1的免疫层析试纸，其特征在于，所述的碳纳米材料标记的抗FB1单克隆抗体的制备方法为：(1)碳纳米材料TPCA的表面硅化将碳纳米材料TPCA分散在体积浓度为10％的乙醇溶液中，配制成浓度为1mg/mL的TPCA溶液；搅拌状态下将2mL氨水逐滴加入2mLTPCA溶液中，150rpm室温反应25min，然后加入80μL正硅酸乙酯，室温避光反应3h；反应结束后6000rpm离心10min，乙醇洗涤4次后，氮吹干燥，4℃密封保存；(2)碳纳米材料TPCA的表面羧基化将0.47g氯乙酸加入到2.5mL浓度为6mol/L的NaOH溶液中，形成溶液A；取200mg表面硅化的TPCA，加入到体积为2.5mL的乙醇中，形成溶液B；将溶液B加入到溶液A中，室温搅拌反应70min；反应结束后，6000rpm离心10min，将得到的沉淀用双蒸水洗涤4次后，氮吹干燥，4℃密封保存；(3)FB1-mAb的标记将2mg表面羧基化的TPCA和2mgN,N'-羰基二咪唑加入到400μLN,N-...

【专利技术属性】
技术研发人员：职爱民，贾国超，高松，赵国欣，孙勇，谢光辉，李小静，丁勇，王岚，郭林，李靖靖，
申请(专利权)人：郑州工程技术学院，
类型：发明
国别省市：河南,41