【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MTRNR1基因突变的测定本申请参考并要求2016年2月17日提交的新加坡专利申请No.10201601165V的优先权，依据PCT细则第4.18条，其内容通过引用并入本专利技术用于所有目的，包括不包含在本专利技术中的以及在PCT细则第20.5(a)条提及的说明书、权利要求或附图的任何元素或部分。
本专利技术总体上涉及用于检测人线粒体编码的12SRNA(MTRNR1)基因(SEQIDNO：1)中突变存在的方法和试剂盒。
技术介绍
遗传突变是儿童早期听力丧失的主要原因。已知人线粒体基因MTRNR1(12SrRNA)中的两种致病变体，即1555A>G和1494C>T，与暴露于氨基糖苷类引起的失聪密切相关。这种突变也是母性遗传的，从一个女人传给她所有的后代。氨基糖苷类，包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素和新霉素，是通常用于治疗细菌感染的抗生素。然而，众所周知，这些抗生素也是耳毒性的。如果将氨基糖苷类抗生素施用于携带mtDNA1555A>G或1494C>T突变的个体，即使药物水平在正常范围内，他们也可能会遭受进...
【技术保护点】
1.测定样品中人线粒体编码的12S RNA(MTRNR1)基因(SEQ ID NO：1)中突变存在的方法，其特征在于，所述突变选自由1555A>G和1494C>T组成的组，并且所述方法包括以下步骤：(a)在允许扩增产生PCR扩增产物(扩增子)的条件下，在聚合酶链式反应(PCR)中使用一对引物扩增至少部分MTRNR1基因，所述部分包含突变状态待分析的位置；(b)在允许寡核苷酸类似物探针和扩增子彼此杂交的条件下，将不同试管中的扩增子分别与对野生型或突变的扩增子特异的等离子体纳米探针接触，所述等离子体纳米探针包括等离子体纳米颗粒和与其共价偶联的非离子寡核苷酸类似物探针，所述寡核苷...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.17 SG 10201601165V1.测定样品中人线粒体编码的12SRNA(MTRNR1)基因(SEQIDNO：1)中突变存在的方法，其特征在于，所述突变选自由1555A>G和1494C>T组成的组，并且所述方法包括以下步骤：(a)在允许扩增产生PCR扩增产物(扩增子)的条件下，在聚合酶链式反应(PCR)中使用一对引物扩增至少部分MTRNR1基因，所述部分包含突变状态待分析的位置；(b)在允许寡核苷酸类似物探针和扩增子彼此杂交的条件下，将不同试管中的扩增子分别与对野生型或突变的扩增子特异的等离子体纳米探针接触，所述等离子体纳米探针包括等离子体纳米颗粒和与其共价偶联的非离子寡核苷酸类似物探针，所述寡核苷酸类似物探针包含与野生型或突变的扩增子互补的碱基序列，其中探针在与扩增子杂交时产生可检测信号，该信号可与未杂交探针的信号区分开；(c)基于测定纳米探针和扩增子的杂交体的解链温度Tm来确定突变的存在。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述方法的步骤(a)中使用的PCR是不对称PCR(aPCR)。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述方法的步骤(b)中使用的等离子体纳米探针包含的等离子体纳米颗粒是等离子体金纳米颗粒。4.如权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，在所述方法的步骤(b)中使用的等离子体纳米探针包含的非离子寡核苷酸类似物探针是吗啉代寡核苷酸(MOR)探针。5.如权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，在所述方法的步骤(b)中产生的可检测信号是测定溶液的颜色，其指示探针是否与扩增子杂交。6.如权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(c)中测定的所述解链温度由纳米探针解离和随后的聚集引起的颜色变化来指示。7.如权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在所述方法的步骤(a)之前从所述样品中分离基因组DNA。8.如权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括使用一种包含至少部分包含1555A>G和1494C>T突变的MRNR1基因的核酸分子作为阳性对照，和/或使用一种包含至少部分不含所述突变的MRNR1基因的核酸分子作为阴性对照。9.如权利要求1～8任一项所述的方法，其特征在于，在所述方法中使用的PCR引物具有核酸序列5'-GAGTGCTTAGTTGAACAGGGC-3'(SEQIDNO：2)和5'-GGGTTTGGGGCTAGGTTTAG-3'(SEQIDNO：3)，并且使用的寡核苷酸类似物探针是具有核酸序列5'-CGACTTGTCTCCTCTTTTTTTTTT...
【专利技术属性】
技术研发人员：祖延兵，应仪如，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG
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