多囊卵巢综合征的microRNA生物标记物和其应用制造技术

本发明专利技术提供了多囊卵巢综合征的microRNA生物标记物和其应用。本发明专利技术提供了miRNA‑141在用于制备研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置中的用途。本发明专利技术还提供了用于研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置，其中包括测量miRNA‑141的表达水平的试剂，例如实时荧光定量PCR试剂盒或基因芯片。本发明专利技术还提供了miRNA‑141在用于制备预测多囊卵巢综合征患者在接受辅助生殖技术后的优质胚胎率的试剂盒或装置中的用途，以及所述试剂盒或装置。

【技术实现步骤摘要】
多囊卵巢综合征的microRNA生物标记物和其应用
本专利技术涉及分子生物学和疾病基因研究和诊断领域。具体的，本专利技术涉及多囊卵巢综合征(PCOS)的microRNA生物标记物，以及所述microRNA在制备用于诊断或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或基因芯片的应用。
技术介绍
多囊卵巢综合征(Polycysticovarysyndrome，PCOS)影响6-8％的生殖年龄妇女，是最常见的内分泌疾病之一(Shi等，2012)。PCOS目前被定义为高雄激素性疾病，具有一定的体征和症状，其中必然包括排卵功能障碍(ovulatorydysfunction)和/或多囊卵巢形态(polycysticovarianmorphology)(Azziz等，2006)。PCOS也与代谢紊乱，包括胰岛素耐受，肥胖和糖尿病有关(Sam，2015)。虽然肥胖不是PCOS表型的一部分，但它加剧了葡萄糖耐受不良，血脂异常和妊娠并发症(Legro，2012)。据估计，30％-75％的PCOS患者超重或肥胖(Diamanti-Kandarakis，2007)，但超重感染和PCOS的关联仍然未知。因此，进一步了解PCOS病理生理学的分子机制可能有助于鉴定新的诊断和治疗靶点。基因表达取决于转录和翻译过程的调节(Sanchez等，2011)。微小RNA(MicroRNA，miRNA)是调节转录后的基因表达并影响许多细胞功能(包括葡萄糖和脂质代谢)的短(20-24个核苷酸)非编码RNA(Chen等，2013，Deiuliis，2016，Zhu等，2011)。miRNAs是mRNA表达的重要调节因子，并且具有控制多个靶标的能力，因此miRNA在许多生物过程中起着重要的调节作用(Bartel，2009)。miRNA的异常表达与一些代谢紊乱(包括肥胖，糖尿病和PCOS等)有关(Chen，Heneidi，Lee，Layman，Stepp，Gamboa，Chen，Chazenbalk和Azziz，2013，Fernandez-Valverde等，2011，Hulsmans等人，2011)，并且几项研究突出发现了miRNAs维持代谢体内平衡的功能(Redis和Calin，2017)。因此，miRNA是代谢过程的潜在调节因子，并且是调节PCOS和相关疾病相关复杂途径的有希望的靶标。除了miRNA在新陈代谢中的作用，最近的研究已经表明miRNA对于斑马鱼的胚胎发育是重要的(Wienholds等，2005)，以及在人类MII卵母细胞中存储的miRNA在卵母细胞成熟期间被表达(Battaglia等，2016)。miRNA-125家族也被证明在母性基因表达调控中发挥关键作用(Kim等，2016)。本领域需要一种对多囊卵巢综合征(PCOS)的诊断，特别是通过特异性相关miRNA的表达水平来对PCOS进行准确和快速的检测或预测的方法、试剂盒或基因芯片。
技术实现思路
本专利技术提供了表明多囊卵巢综合征(PCOS)的miRNA生物标记物。本专利技术提供了通过在样品，特别是颗粒细胞样品中检测所述生物标记物的miRNA的表达水平变化来检测或诊断PCOS的方法以及用于这些方法的试剂盒或基因芯片。在本专利技术的其中一个方面，本专利技术提供了miRNA-141在研究或检测多囊卵巢综合征中的用途。在本专利技术的其中又一个方面，提供了联合使用miRNA-141和与miRNA-200c在研究或检测多囊卵巢综合征中的用途。所述研究或检测通常是通过对细胞中的miRNA的表达分析来进行。优选的，所述研究或检测是在颗粒细胞样品中进行。在本专利技术的其中一个方面，本专利技术提供了miRNA-141单独或与miRNA-200c联合在用于制备研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置中的用途。所述研究或检测通常是通过对细胞中的miRNA的表达分析来进行。优选的，所述研究或检测是在颗粒细胞样品中进行。对多囊卵巢综合征的检测也包括对多囊卵巢综合征的诊断。在本专利技术的其中一个方面，所述试剂盒为用于通过实时荧光定量PCR方法研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒。在本专利技术的其中又一个方面，所述装置为用于研究或检测多囊卵巢综合征的基因芯片。本专利技术还提供了用于研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置，其中包括测量miRNA-141的表达水平的试剂。在本专利技术的另一个方面，所述试剂盒或装置还包括测量miRNA-200c的表达水平的试剂。优选的，所述试剂盒或装置用于在颗粒细胞样品中研究或检测多囊卵巢综合征。在本专利技术的其中一个方面，所述试剂盒为用于通过实时荧光定量PCR方法研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒。在本专利技术的其中又一个方面，所述有时装置为用于研究或检测多囊卵巢综合征的基因芯片。在本专利技术的其中一个方面，提供了miRNA-141在用于预测多囊卵巢综合征患者在接受辅助生殖技术(AssistedReproductiveTechnology，ART)后的优质胚胎率的方法。在本专利技术的其中一个方面，提供了miRNA-141在用于制备预测多囊卵巢综合征患者在接受辅助生殖技术后的优质胚胎率的试剂盒或装置中的用途。本专利技术还提供了用于制备预测多囊卵巢综合征患者在接受辅助生殖技术后的优质胚胎率的试剂盒或装置中的用途。本专利技术还提供了预测多囊卵巢综合征患者的优质胚胎率的试剂盒或装置，其中包括测量miRNA-141的表达水平的试剂。在本专利技术中，可以使用适用于检测生物样品中的RNA表达水平的任意技术，可以测量样品中miR基因产物的水平。用于测定生物样品(例如，细胞，组织)中RNA表达水平的合适技术(例如，RNA印迹分析，RT-PCR，原位杂交)是本领域技术人员已知的。在本专利技术中，对miRNA的表达水平的测量通过检测转录的多核苷酸或其部分的存在来进行，其中转录的多核苷酸包含miRNA的编码区。在本文中，术语“微小RNA”、“microRNA”、“miR基因产物”、“miR”和“miRNA”互换使用，是指来自miR基因的未加工的或加工过的RNA转录物。由于miR基因产物不翻译成蛋白，术语“miR基因产物”不包括蛋白。未加工的miR基因转录物也称作“miR前体”，通常包含长度为约70-100个核苷酸的RNA转录物。miR前体可以消化加工成有活性的19-25个核苷酸的RNA分子。该有活性的19-25个核苷酸的RNA分子也称作“加工过的miR基因转录物”或“成熟的miRNA”。本专利技术的miRNA主要是指哺乳动物的miRNA，特别是指人的miRNA。本专利技术的miRNA主要是指人的miRNA。例如，在本文中，“miR-141”也代表“hsa-miR-141”。在本专利技术中涉及的miRNA包括其miRNA家族，其家族成员和序列在例如http://www.mirbase.org/等网站公开。在本文中，蛋白符号不用斜体，并全部大写；基因符号使用斜体。但有时在本文中基因符号也不使用斜体。例如有时本文中的miRNA“miR-141”也写为“miR-141”。本专利技术中有关miRNA的序列如下：附图说明图1为来自对照(n＝57)，正常BMI的PCOS患者(n＝62)和超重PCOS患者(n＝54)的颗粒细胞中miRNA-200c和miRNA-141的表达。数据是平均值±SEM，并且各组与对照进行比较，one-way本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miRNA‑141在用于制备研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置中的用途。

【技术特征摘要】
1.miRNA-141在用于制备研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置中的用途。2.权利要求1的用途，其中将miRNA-141与miRNA-200c联合使用于制备研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置。3.权利要求1或2的用途，其中所述试剂盒或装置用于在颗粒细胞样品中研究或检测多囊卵巢综合征。4.权利要求1或2的用途，其中所述试剂盒为用于通过实时荧光定量PCR方法研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒，或者所述装置为用于研究或检测多囊卵巢综合征的基因芯片。5.用于研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒或装置，其中包括测量miRNA-141的表达水平的试剂。6.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈子江，马金龙，石玉华，刘洪彬，赵世刚，吕跃，路钢，
申请(专利权)人：山大生殖研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港,81