上皮性卵巢癌的生物标志物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了上皮性卵巢癌的生物标志物及其用途。本发明专利技术提供了下述miRNA的组合用于研究和检测上皮性卵巢癌的方法：hsa‑miR‑34b、hsa‑miR‑335、hsa‑miR‑136、hsa‑let‑7e、hsa‑miR‑1297、hsa‑miR‑374b和hsa‑miR‑891b。本发明专利技术还提供了用于所述研究和检测上皮性卵巢癌的方法的试剂盒和装置。

【技术实现步骤摘要】
上皮性卵巢癌的生物标志物及其用途
本专利技术涉及分子生物学和疾病诊断试剂制备领域。具体的，本专利技术涉及上皮性卵巢癌的miRNA和mRNA组群的生物标记物和其用于研究上皮性卵巢癌的方法，以及所述标记物在制备用于诊断或检测上皮性卵巢癌的试剂盒的应用。
技术介绍
上皮性卵巢癌(EOC)是女性最常见的妇科恶性肿瘤，占卵巢恶性肿瘤的近90％[1，2]。诊断时，大多数患者(75％)出现疾病的晚期，几乎所有的人都经历了肿瘤复发[3，4]。卵巢癌病例中约10％是由于家族性/遗传倾向，主要是由于在BRCA1和BRCA2中的错配修复基因的突变，但其遗传机制仍需进一步研究。几个全基因组关联研究(GWAS)已在卵巢癌中进行，已经发现了一些风险因子，如9p22.2上的rs3814113，2q31上的rs2072590对，3q25上的rs2665390，在8q24上的rs10088218，rs1516982，rs10098821，和在19p13上的rs2363956[6,7]。然而，这些风险变量的功能意义在很大程度上是未知的。微小RNA是通过与信使RNA(mRNA)靶杂交并引发对它的翻译抑制或较不常见地引起其降解来控制基因表达的一类小的非编码RNA。miRNA的发现和研究已揭示在生物发育和各种细胞过程例如细胞分化、细胞生长和细胞死亡中发挥重要作用的miRNA介导的基因调控机制。近年来的研究表明，特定miRNA的异常表达可参与人的疾病，例如神经障碍和癌症。microRNA(miRNA)的表达变化影响miRNA靶基因的表达，进而导致表型的差异，包括癌症的易感性[7]。对患者的miRNA和基因表达差异的分析的整合可以提高卵巢癌的风险等位基因的功能意义的理解，以及创新的分析方法来识别这些miRNA中代替传统的标准方差和回归分析中的应用将有可能提高分析的准确性。本领域已有发现hsa-miR-34b(miR-34b)是具有p53依赖性调节功能的肿瘤抑制因子[24,25]。以前的报道显示p53介导的miR-34b的上调和ING2的下调通过人成纤维细胞中的p53激活介导了由nutlin-3a诱导的细胞衰老(senescence)[25]。此外，miR-34b/34c的簇(cluster)是TP53的直接的转录靶因子，其在上皮癌起始中发生突变[26]。在卵巢癌中，miR-34b在Lynch综合征相关肿瘤中经常失活。与在偶发性细胞肿瘤中的情况相反，Lynch综合征相关肿瘤中缺乏异常p53，这支持miR-34b失活和异常p53表达在癌变中的作用[27]。本领域已有发现hsa-miR-335(miR-335)是卵巢癌中具有影响的miRNA[7]。在卵巢癌病人中，缺乏miR-335的表达诱导Bcl-w的异常积累和随后的失控的细胞浸润[35]。此外，miR-335与EOC患者的预后相关[36]。另外，本领域已有发现hsa-miR-136(miR-136)也可能是卵巢癌中具有影响的miRNA。miR-136靶向TGF-b/Smad信号的引发的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition)的启动子Smad2和Smad3，并抑制肺腺癌细胞转移相关性状[38]。在人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中发现miR-136的上调，其通过靶向PPP2R2A促进Erk1/2激活[39]。MiR-136也可能靶向肿瘤抑制基因PTEN并抑制乳腺癌中的PTEN翻译[40]。本领域已经采用分子生物学的方法来诊断或检测各种如癌症等各种疾病，包括采用分析基因表达的高通量芯片或用于较少量分子目标的PCR或非PCR方法的试剂盒，例如Taqman探针法试剂盒等。然而，上皮性卵巢癌相关特异性miRNA表达谱的筛选、检测方法及检测程序还存在很多需要解决的问题。因此本领域还需要一种更快速和有效的诊断或检测上皮性卵巢癌的方法和试剂盒或芯片。
技术实现思路
本专利技术研究和发现了miRNA，特别是hsa-miR-34b、hsa-miR-335、hsa-miR-136在上皮性卵巢癌的分子调控途径中的作用，以及这些miRNA在生化调控过程的上下游影响因子和作用关系。由此，本专利技术提供了一种用于研究上皮性卵巢癌的更快速和有效的方法。具体的，本专利技术提供了一种miRNA的组合在研究或诊断上皮性卵巢癌中的用途，在所述研究或诊断中还可包括mRNA的组合。本专利技术还提供了所述miRNA的组合和mRNA的组合用于制备研究或诊断上皮性卵巢癌中的试剂盒或装置的用途。本专利技术还提供了用于研究或诊断上皮性卵巢癌中的试剂盒或装置，例如用于在外周血淋巴细胞样品中研究或诊断上皮性卵巢癌的基因芯片。具体的，本专利技术提供了下述miRNA的组合用于研究或诊断上皮性卵巢癌的方法，所述miRNA组合为hsa-miR-34b、hsa-miR-335、hsa-miR-136、hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b。在本专利技术的其中又一个方面，前述研究或诊断上皮性卵巢癌的方法中还包括下述基因的mRNA的组合：TAOK1、MGEA5、ZBED5、MMP3、DNAJA1、KLHL28、PDCD7、LSM12、SLC9A6、ATG7、C1orf63。在本专利技术的其中又一个方面，在前述研究或诊断上皮性卵巢癌的方法中，所述miRNA分为以下两组：组(a)：hsa-miR-34b、Hsa-miR-335和hsa-miR-136；和组(b)：hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b。在本专利技术的研究或诊断上皮性卵巢癌的方法中，先在待测样品中检查作为核心miRNA的组(a)的miRNA，即hsa-miR-34b、hsa-miR-335和hsa-miR-136，然后再在待测样品中检查组(b)的miRNA，包括hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b。在本专利技术其中又一个方面，还包括在待测样品中检测下述基因的mRNA的表达：TAOK1、MGEA5、ZBED5、MMP3、DNAJA1、KLHL28、PDCD7、LSM12、SLC9A6、ATG7、C1orf63。在本专利技术的研究或诊断上皮性卵巢癌的方法中，先检查作为核心miRNA的组(a)的miRNA，即hsa-miR-34b、hsa-miR-335和hsa-miR-136的表达，然后再检查组(b)的miRNA，包括hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b的表达。在本专利技术的方法中，如果发现组(a)的miRNA的表达不符合预定的检测结果，例如hsa-miR-335的表达上升以及hsa-miR-34b和hsa-miR-136的表达下降，可以选择不继续接下来的步骤(2)，即检查组(b)的miRNA的表达。由此可以增加检测的效率。在本专利技术的研究或诊断上皮性卵巢癌的方法中，除了在待测样品中检测组(a)和组(b)的miRNA的表达，还可包括：(3)在待测样品中检测下述基因的mRNA的表达：TAOK1、MGEA5、ZBED5、MMP3、DNAJA1、KLHL28、PDCD7、LSM12、S本文档来自技高网...

【技术保护点】
下述miRNA的组合用于研究上皮性卵巢癌的方法，所述miRNA组合为hsa‑miR‑34b、hsa‑miR‑335、hsa‑miR‑136、hsa‑let‑7e、hsa‑miR‑1297、hsa‑miR‑374b和hsa‑miR‑891b。

【技术特征摘要】
1.下述miRNA的组合用于研究上皮性卵巢癌的方法，所述miRNA组合为hsa-miR-34b、hsa-miR-335、hsa-miR-136、hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b。2.权利要求1的方法，其中还包括下述基因的mRNA的组合：TAOK1、MGEA5、ZBED5、MMP3、DNAJA1、KLHL28、PDCD7、LSM12、SLC9A6、ATG7、C1orf63。3.权利要求1或2的方法，其特征在于，所述miRNA分为以下两组：组(a)：hsa-miR-34b、hsa-miR-335和hsa-miR-136；组(b)：hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b；在所述研究上皮性卵巢癌的方法中，包括以下步骤：(1)在待测样品中检测组(a)的miRNA的表达；(2)在待测样品中检测组(b)的miRNA的表达；(3)在待测样品中检测下述基因的mRNA的表达：TAOK1、MGEA5、ZBED5、MMP3、DNAJA1、KLHL28、PDCD7、LSM12、SLC9A6、ATG7、C1orf63。4.权利要求3的方法，其特征在于，所述待测样品为外周血淋巴细胞。5.下述miRNA的组合在用于制备研究或诊断上皮性卵巢癌中的试剂盒或装置的用途，所述miRNA组合为hsa-miR-34b、Hsa-miR-335、hsa-miR-136、hsa-let-7e、hsa-miR-1297、hsa-miR-374b和hsa-miR-891b。6.权利要求5的用途，其中在所述研究或诊断中还包括下述基因的mRNA的组合：TAOK1、MGEA5、ZBED5、MMP3、DNAJA1、KLHL28、PDCD7、LSM12、SLC9A6、ATG7、C1orf63。7.权利要求1或2的用途，其特征在于，所述miRNA分为以下两组：组(a)：hsa-miR-...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘洪彬，马金龙，耿玲，苏献伟，熊志强，路钢，
申请(专利权)人：山大生殖研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港,81