能够抑制外泌体中的遗传功能的复合物以及癌症增殖和/或转移抑制剂制造技术

本发明专利技术提供一种缀合物，其包含靶向外泌体表面抗原的抗体或抗体片段，以及基因或其表达产物的抑制剂，其中抗体或抗体片段和基因或其表达产物的抑制剂直接或经由连接基团共价结合或非共价结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】能够抑制外泌体中的遗传功能的复合物以及癌症增殖和/或转移抑制剂
本专利技术涉及能够抑制外泌体的遗传功能的缀合物、以及癌症增殖和/或转移抑制剂。
技术介绍
最近的研究发现了一种机制，其中包括T细胞、血小板、上皮细胞、免疫细胞或癌细胞的各种细胞释放具有40至100nm直径的称为外泌体的囊泡，从而将信息传递给远处细胞。具体地，已经提出了一种新的机制，其中癌细胞增殖和转移能力由包含在血液中分泌的外泌体中的基因(例如miRNA)的表达产物支配，并且该机制已经引起了极大的关注。为了抑制在外泌体中的miRNA的功能，通常使用采用具有与miRNA互补的序列的修饰核酸(反义核酸)的方法(非专利文献1至3)。然而，由于血液中的miRNA被包封在外泌体中，因此即使通过向血液中施用反义核酸也难以直接靶向miRNA。使用外泌体作为药物递送系统的许多方法是已知的(非专利文献3至5，以及专利文献1和2)。引文列表专利文献专利文献1：JP2010-285426A专利文献2：JP2014-185090A非专利文献非专利文献1：G.Hutvagner,M.J.Simard,C.C.MelloandP.D.Zamore,PLoSBiol.,2004,2,E98。非专利文献2：U.A.Orom,S.KauppinenandA.H.Lund,Gene,2006,372,137-141非专利文献3：S.Davis,B.Lollo,S,FreierandC.Esau,NucleicAcidsRes.,2006,34,2294-2304非专利文献4：LaiCP,MardiniO,EricssonM,PrabhakarS,MaguireCA,ChenJW,etal.AcsNano.2014；8(1):483-94非专利文献5：SmythT,PetrovaK,PaytonNM,PersaudI,RedzicJS,GranerMW,etal.BioconjugateChem.2014；25(10):1777-84。
技术实现思路
技术问题本专利技术的主要目的是提供一种抑制外泌体中所含的基因(如miRNA)或其表达产物的功能的新方法。技术问题本专利技术提供以下缀合物和/或癌症增殖和/或转移抑制剂。项1.一种缀合物，其包含靶向外泌体表面抗原的抗体或抗体片段，以及基因或其表达产物的抑制剂，其中抗体或抗体片段和基因或其表达产物的抑制剂直接或经由连接基团共价结合或非共价结合。项2.根据项1所述的缀合物，其中，外泌体表面抗原是CD9、CD63、CD81或CD147。项3.根据项1或2所述的缀合物，其中抗体或抗体片段用含有选自由半胱氨酸、精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸组成的组中的至少一种氨基酸的肽修饰，并且基因或其表达产物的抑制剂经由共价键(S-S键)、配位键或非共价键与肽结合。项4.根据项3所述的缀合物，其中，肽还包含甘氨酸或丙氨酸。项5.根据项3所述的缀合物，其中，肽为聚赖氨酸或聚精氨酸。项6.根据项5所述的缀合物，其中，肽为聚精氨酸。项7.根据项1至6中任一项所述的缀合物，其中，基因或其表达产物的抑制剂是抗miRNA核酸，并且抗miRNA核酸是通过与外泌体中含有的miRNA形成互补链来抑制miRNA功能的核酸。项8.根据项1所述的缀合物，其中抗体或抗体片段是抗CD63抗体。项9.根据项1所述的缀合物，其中，基因或其表达产物的抑制剂是外泌体中含有的miRNA或基因的抑制剂。项10.根据项1所述的缀合物，其中，基因或其表达产物的抑制剂是miRNA抑制剂。项11.根据项1所述的缀合物，其中抗体或抗体片段是单克隆抗体、单链抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv。项12.一种癌症增殖和/或转移抑制剂，包含项1至11中任一项所述的缀合物。本专利技术的有益效果本专利技术能够有效地抑制特别是参与癌症转移和增殖的外泌体中所含基因的功能。附图说明图1：本专利技术的缀合物的作用机理的示意图。图2：示出实施例1的荧光标记抗体的制备方案的示意图。图3：示出实施例1的结果的共聚焦激光显微镜图像。图4：示出实施例2的缀合物的制备方案的示意图。图5：示出实施例2和比较例1的结果的共聚焦激光显微镜图像。标题为“抗CD63IgG+RNA(Cy5)”的上排示出比较例1的结果，标题为“抗CD63IgG-9r+RNA(Cy5)”的下排示出实施例1的结果。鬼笔环肽是特异性结合至构成细胞骨架的聚合肌动蛋白(F-肌动蛋白)的寡肽，并用于细胞骨架的染色。图6：示出实施例3的制备方案的示意图。图7：将抗CD63抗体/抗miR缀合物的微小RNA功能抑制作用掺入细胞中。图8：外泌体miR21依赖的细胞增殖抑制。图9：抗CD63抗体/抗miR核酸缀合物在体内的作用。具体实施方式基因或其表达产物的抑制剂是外泌体中所含基因的功能的抑制剂。其实例包括低分子化合物、miRNA抑制剂、DNA抑制剂、mRNA抑制剂、tRNA抑制剂、rRNA抑制剂、piRNA抑制剂、非编码RNA抑制剂、适体、抗体、F(ab')2片段、单链抗体片段、Fv片段、单链Fv片段、亲合体、纳米抗体和选择性抗体支架(例如双抗体)。在本专利技术的一个优选实施方式中，基因或其表达产物的抑制剂的实例包括低分子化合物和抗miRNA核酸。低分子化合物的实例包括顺铂、5FU(5-氟尿嘧啶)、多柔比星、放线菌素、丝裂霉素、环磷酰胺、美法仑等。抗体或抗体片段的实例包括单克隆抗体、单链抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv。miRNA(微小RNA)是包含在外泌体中的RNA，具有约15至30个碱基，特别是约18至25个碱基。在本专利技术中，“外泌体”广泛地包括从哺乳动物细胞释放的囊泡。动物的实例包括人、猴、牛、绵羊、山羊、马、猪、兔、狗、猫、大鼠、小鼠、豚鼠等，特别优选人。哺乳动物细胞的实例尤其包括肿瘤细胞、树突细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞、血小板、网织红细胞、上皮细胞、成纤维细胞等，特别是肿瘤细胞。外泌体的直径为约30至200nm，优选约30至100nm。作为抗体或抗体片段的靶标的外泌体表面抗原的实例包括CD9、CD63、CD81和CD147。作为抗体或抗体片段的靶标的优选的外泌体表面抗原的实例包括CD9和CD63，更优选CD63。本专利技术的缀合物包含作为必需成分的靶向外泌体表面抗原的抗体或抗体片段，以及基因或其表达产物的抑制剂。靶向外泌体表面抗原的抗体或抗体片段的实例包括抗CD9抗体、抗CD63抗体、抗CD81抗体、抗CD147抗体和这些抗体的片段。优选的实例包括抗CD9抗体、抗CD63抗体及其抗体片段。进一步优选的实例包括抗CD63抗体及其抗体片段。通过具有与外泌体中包含的miRNA互补的序列，抗miRNA核酸与miRNA形成互补链，从而抑制miRNA的功能。抗miRNA核酸可以仅由与miRNA互补的序列组成，或者可以在与miRNA互补的序列的5'末端或3'末端添加任何序列。加入的序列中的碱基数为50或更少，优选40或更少，更优选20或更少，进一步优选10或更少，特别优选5或更少。最优选的抗miRNA核酸仅由与靶标miRNA互补的链组成。抗miRNA核酸是DNA、RNA或核酸衍生物，优选为RNA。核酸衍生物表示这样的衍生物，其中例如碱基部分、核糖部分、磷酸二酯键部分的原子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缀合物，包含靶向外泌体表面抗原的抗体或抗体片段，以及基因或其表达产物的抑制剂，其中所述抗体或抗体片段和所述基因或其表达产物的抑制剂直接或通过连接基团共价结合或非共价结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.18 JP 2016-0289241.一种缀合物，包含靶向外泌体表面抗原的抗体或抗体片段，以及基因或其表达产物的抑制剂，其中所述抗体或抗体片段和所述基因或其表达产物的抑制剂直接或通过连接基团共价结合或非共价结合。2.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述外泌体表面抗原是CD9、CD63、CD81或CD147。3.根据权利要求1或2所述的缀合物，其中所述抗体或抗体片段采用含有选自由半胱氨酸、精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸组成的组中的至少一种氨基酸的肽进行修饰，并且所述基因或其表达产物的抑制剂通过共价键(S-S键)、配位键或非共价键与肽结合。4.根据权利要求3所述的缀合物，其中所述肽还包含甘氨酸或丙氨酸。5.根据权利要求3所述的缀合物，其中所述肽是聚赖氨酸或聚精氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：山吉麻子，村上章，芦原英司，小堀哲生，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，学校法人京都药科大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP