抗PD-1抗体及其用途制造技术

抑制PD‑L1和PD‑L2结合至人PD‑1的人源化抗PD‑1抗体子集。这些结合蛋白通过操控PD‑1信号途径调节免疫系统治疗免疫机能失调的紊乱，包括例如癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-1抗体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求美国专利申请62/278,669的优先权，该申请的申请日为2016年1月14日，其全文以引用的方式并入本文中。电子提交序列表的引用ASCII格式序列表文件“BPS_PCT_SEQ_ID”创建于2017年1月13日，大小为14kb，其作为序列表正式文本通过EFS-Web电子提交。包含在该ASCII格式文件中的序列表成为说明书的一部分并通过引用整体并入本文。
技术介绍
淋巴细胞存在于静息状态，需要抗原刺激进行增殖并增加有效免疫响应。对于T细胞，该信号通过主要组织相容性复合物(MHC)结合的抗原通过T细胞受体(TCR)发送信号进行传递。完全激活T细胞除了需要TCR激活外，还需要引入各种共刺激和共抑制通路(Croft,M.(2003)Nat.Rev.Immunol.3:609)。程序性死亡1，也称为PD-1和CD279，是55kDa的细胞表面，是主要由淋巴细胞，尤其是T细胞表达的共抑制受体(Blank,C.(2005)CancerImmunol.Immunother.54:307)。PD-1配体包括PD-L1和PD-L2，PD-L1又称B7-H1和CD274,PD-L2又称B7-DC和CD273。PD-1:PD-L1或PD-1:PD-L2相互作用抑制T细胞活性，导致增殖减少、促炎性细胞因子分泌减少和T细胞效应子功能的减少，例如T细胞溶解(Freeman,G.(2000)J.Exp.Med.192:1027；Latchman,Y.(2001)Nat.Immunol.2:261；Rodig,N.(2003)Eur.J.Immunol.33:3117)。在健康个体内，通过激活T细胞诱导PD-1表达，在免疫反应成功消除病原体后PD-1表达减弱(Vibhakar,R.(1997)Exp.CellRes.232:25；Zajac,A.(1998)J.Exp.Med.188:2205)。在某些免疫响应未成功的情形下，延长抗原刺激导致PD-1表达提高并“耗尽”T细胞表型(Zajac,A.(1998)J.Exp.Med.188:2205)。在小鼠中敲除PD-1是非致命的，且在非肥胖小鼠糖尿病模型中，敲除PD-1配体，PD-L1，导致免疫调节疾病发展加速(Wang,J.(2005)Proc.Natl.Acad.SciUSA102:1823)。因此，其主要作用被认为是控制免疫响应，从而通过下调T细胞活性阻止自免疫疾病的发展。已显示，PD-1负调控淋巴细胞所需的许多肿瘤的配体(PD-L1和PD-L2)表达水平提高。这对于PD-L1尤其如此。鳞状细胞癌、结肠癌和乳腺癌已显示PD-1水平提升(Brown,J.(2003)J.Immunol.170:1257)。而且，在小鼠肿瘤上的PD-1转基因表达导致肿瘤发生和入侵增加(Iwai,Y.(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:12293)并且通过敲除PD-1，小鼠黑色素瘤模型中的肿瘤生长停止了。这些临床前的研究证明了使用抗PD-1抗体增强T细胞功能是免疫功能障碍疾病例如癌症的有希望的疗法。临床研究也支持了这种假说。免疫检查点抑制剂的封闭，例如使用抗PD-1抗体，已表明在几种实体瘤中具有临床活性(Brahmer,J.(2010)J.Clin.Oncol.28:3167；BrahmerJ.(2012)N.Engl.J.Med.366:2455；Hamid,O.(2013)N.Engl.J.Med.369:134；Topalian,S.(2014)J.Clin.Oncol.32:1020；Wolchok,J.(2013)N.Engl.J.Med.369:122)。第一免疫检查点抑制剂，全人免疫球蛋白(Ig)G1单克隆抗体阻断细胞毒素T淋巴细胞抗原4(CTLA4),2011年被美国食药监(FDA)批准用于治疗转移性黑素瘤。三年后，美国FDA批准第一抗PD-1抗体用于治疗晚期黑色素瘤并第一次公布了2015年美国的PD-1阻断第三期试验(Robert,C.(2015)N.Engl.J.Med.372:320)。尽管PD-1似乎是治疗中的有希望的靶标，还需要开发能够阻断PD-1和其配体PD-L1和PD-L2相互反应的改进的组合物。
技术实现思路
本专利技术提供特异性结合人PD-1并阻碍人PD-1结合PD-L1和PD-L2的人源化抗体。特别的，本专利技术的一个方面提供结合人PD-1的抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段具有包括SEQIDNOS.1-3所述的CDR序列的重链可变区；以及包括SEQIDNOS.4-6所述的CDR序列的轻链可变区。抗体或抗体片段抑制或减少PD-1结合至PD-L1、PD-L2，或PD-L1及PD-L2。抗体优选是嵌合形式，并最优选是人源化形式，用于药物组合物中的活性组分或药剂。优选的，当人PD-1具有一个或多个选自L128A、P130A、I134A、E136A和K78A的突变时，该抗体或抗体片段结合人PD-1。在一些实施方式中，重链可变区具有SEQIDNOS.7-9中任意一种接触序列或者其中多达三种接触序列。在一些实施方式中，重链可变区氨基酸序列与SEQIDNO.13具有至少85％的序列一致性，或者与SEQIDNO.13具有至少90％的序列一致性。在进一步的实施方式中，重链可变区氨基酸序列与SEQIDNO.13具有至少95％的序列一致性，或者与SEQIDNO.13具有至少99％的序列一致性。在进一步的实施方式中，重链可变区具有SEQIDNO.13所述的氨基酸序列。轻链可变区也可具有SEQIDNOS.10-12中任意一种接触序列或者其中多达三种接触序列。在一些实施方式中，轻链可变区氨基酸序列与SEQIDNO.14具有至少85％的序列一致性，或者与SEQIDNO.14具有至少90％的序列一致性。在进一步的实施方式中，轻链可变区氨基酸序列与SEQIDNO.14具有至少95％的序列一致性，或者与SEQIDNO.14具有至少99％的序列一致性。在进一步的实施方式中，轻链可变区具有SEQIDNO.14所述的氨基酸序列。在相关的实施方式中，重链可变区具有SEQIDNOS.7-9所述的接触序列，轻链可变区具有SEQIDNOS.10-12所述的接触序列。在相关方面，提供能够结合人PD-1的抗体或抗体片段，其包括：与SEQIDNO:13所述氨基酸序列至少85％序列一致性的重链可变区，该重链可变区还具有SEQIDNOS.1-3所述的三个CDR序列和SEQIDNOS.7-9所述的三个接触序列；与SEQIDNO:14所述的氨基酸序列至少85％序列一致性的轻链可变区，该轻链可变区还具有SEQIDNOS.4-6所述的三个CDR序列和SEQIDNOS.10-12所述的三个接触序列。在一些实施方式中，重链可变区与SEQIDNO.13的氨基酸序列具有至少90％的序列一致性，且轻链可变区与SEQIDNO.14的氨基酸序列具有至少90％的序列一致性。在进一步的实施方式中，重链可变区与SEQIDNO.13的氨基酸序列具有至少95％的序列一致性，且轻链可变区与SEQIDNO.14的氨基酸序列具有至少95％的序列一致性。在进一步的实施方式中，重链可变区与SEQID本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合人PD‑1的抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID NOS.1‑3所述的CDR序列，所述轻链可变区包括SEQ ID NOS.4‑6所述的CDR序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.14 US 62/278,6691.一种结合人PD-1的抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQIDNOS.1-3所述的CDR序列，所述轻链可变区包括SEQIDNOS.4-6所述的CDR序列。2.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段抑制或减少PD-1结合至PD-L1、PD-L2，或PD-L1及PD-L2。3.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，为其嵌合抗体或片段形式。4.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，为其人源化抗体或片段形式。5.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，当人PD-1包含一个或多个选自L128A、P130A、I134A、E136A和K78A的突变时，所述抗体或抗体片段结合人PD-1。6.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中重链可变区包含SEQIDNOS.7-9中任意接触序列，可选的包含SEQIDNOS.7-9三种接触序列。7.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中重链可变区包含与SEQIDNO.13具有至少85％的序列一致性，可选的，与SEQIDNO.13具有至少90％的序列一致性的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中重链可变区包含与SEQIDNO.13具有至少95％的序列一致性，可选的，与SEQIDNO.13具有至少99％的序列一致性的氨基酸序列。9.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中所述重链可变区包含SEQIDNO.13所述氨基酸序列。10.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中轻链可变区包含SEQIDNOS.10-12中任意接触序列，可选的包含SEQIDNOS.10-12三种接触序列。11.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中轻链可变区包含与SEQIDNO.14具有至少85％的序列一致性，可选的，与SEQIDNO.14具有至少90％的序列一致性的氨基酸序列。12.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中轻链可变区包含与SEQIDNO.14具有至少95％的序列一致性，可选的，与SEQIDNO.14具有至少99％的序列一致性的氨基酸序列。13.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中所述轻链可变区包含SEQIDNO.14所述氨基酸序列。14.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中重链可变区包含SEQIDNOS.7-9所述的接触序列，轻链可变区包含SEQIDNOS.10-12所述的接触序列。15.能够结合人PD-1的抗体或抗体片段，包含a)一重链可变区，包含与SEQIDNO.13所述氨基酸序列至少85％的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁晓辉，A·斯尼德，陶志华，K·斯卡斯特，C·考德里，J·米克洛斯可，A·纽曼，H·朱，
申请(专利权)人：BPS生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US