特异性结合人CD40的拮抗性抗体和使用方法技术

本发明专利技术涉及特异性结合人CD40的拮抗性抗体、编码该抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，以及制备和使用前述物质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合人CD40的拮抗性抗体和使用方法
本专利技术涉及特异性结合人CD40的拮抗性抗体、编码该抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，以及制备和使用前述物质的方法。
技术介绍
细胞表面CD40分子是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFR)的成员以及先天性和适应性免疫应答两者中的关键调节因子。CD40组成性地表达于抗原递呈细胞，具体地B细胞、树突状细胞和巨噬细胞上，而且也可存在于成纤维细胞、滑膜细胞、平滑肌细胞、内皮细胞和上皮细胞上。CD40的天然配体(命名为CD154或CD40L)主要在活化T淋巴细胞和血小板上表达。CD40与CD40L在T细胞上的相互作用包括体液和细胞介导的免疫应答。CD40调节该配体-受体对来活化B细胞以及包括树突状细胞(DC)的其它抗原递呈细胞(APC)，从而驱动T细胞活化。例如，B细胞上CD40的活化诱导B细胞增殖，体细胞超变，分化为抗体分泌细胞并且在次级淋巴器官中的生发中心同种型转换。体外研究已经显示CD40活化对细胞因子产生(例如IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α)、粘附分子和共刺激受体(例如ICAM、CD23、CD80和CD86)的表达，以及B淋巴细胞对I类MHC、II类MHC和TAP转运蛋白提高的表达的直接影响。调节CD40/CD40L相互作用的抗体对治疗疾病，诸如炎性疾病，包括自身免疫性疾病有兴趣。
技术实现思路
本专利技术提供一种特异性结合SEQIDNO:1的人CD40的分离的拮抗性抗体或其抗原结合部分，该分离的拮抗性抗体或其抗原结合部分包含SEQIDNO:5的重链互补决定区(HCDR)1、SEQIDNO:61的HCDR2、SEQIDNO:62的HCDR3、SEQIDNO:63的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQIDNO:9的LCDR2和SEQIDNO:10的LCDR3。本专利技术还提供一种特异性结合SEQIDNO:1的人CD40的分离的拮抗性抗体或其抗原结合部分，该分离的拮抗性抗体或其抗原结合部分包含特定的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR3、LCDR3、VH、VL、HC和/或LC序列。本专利技术还提供一种药物组合物，该药物组合物包含本专利技术的抗体以及药学上可接受的载体。本专利技术还提供一种免疫缀合物，该免疫缀合物包含连接到治疗剂或成像剂的本专利技术的抗体。本专利技术还提供一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码SEQIDNO:11、21、22、23、24、25或26的VH；SEQIDNO:12或27的VL；或者SEQIDNO:11、21、22、23、24、25或26的VH以及SEQIDNO:12或27的VL。本专利技术还提供一种包含SEQIDNO:13、14、28、29、30、31、32、33或34的多核苷酸序列的分离的多核苷酸。本专利技术还提供一种编码SEQIDNO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45或46的重链的分离的多核苷酸。本专利技术还提供一种编码SEQIDNO:77或78的轻链的分离的多核苷酸。本专利技术还提供一种编码SEQIDNO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45或46的重链以及SEQIDNO:77或78的轻链的分离的多核苷酸。本专利技术还提供一种包含SEQIDNO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、77或78的多核苷酸序列的分离的多核苷酸。本专利技术还提供一种包含本专利技术的多核苷酸的载体。本专利技术还提供一种包含本专利技术的载体的宿主细胞。本专利技术还提供一种制备特异性结合SEQIDNO:1的人CD40的拮抗性抗体或其抗原结合部分的方法，该方法包括在抗体被表达的条件下培养本专利技术的宿主细胞，并且分离所述抗体。本专利技术还提供一种治疗患有炎性疾病的受治疗者的方法，该方法包括以足以治疗炎性疾病的时间向对其有需要的受治疗者施用本专利技术的分离抗体。本专利技术还提供本专利技术的抗体在治疗中使用。本专利技术还提供结合到本专利技术的抗体的抗独特型抗体。本专利技术还提供一种包括本专利技术的抗体的试剂盒。附图说明图1示出C40B16(作为野生型IgG1)在相比于Fc效应子沉默抗体D时展示出类似的最小激动作用。Fc效应子沉默ASKP-1240、CFZ533和BMS-986090mAb在相比于C40B16时展示出较高水平的激动作用。激动作用在HEK-BlueTMCD40LNF-κB活化测定中进行评估。图2示出在测量抗体介导的人树突状细胞(DC)产生IL-12p40的测定中，C40B16并未诱导激动作用，而ASKP-1240、CFZ533和BMS-986090诱导IL-12p40产生。在各自由图中每种抗体的独立柱表示的6种不同抗体浓度(350nM、110nM、35nM、11nM、3.5nM、以及1.1nM)下评价IL-12p40产生。DC+CD40L：阳性对照。仅DC：阴性对照。图3A示出500ng/ml浓度的抗-CD40抗体C40B176、C40B179、C40B180和C40B183没有诱导树突状细胞(DC)活化，而350nMASKP-1240诱导IL-12p40产生。在抗体的存在下，由DC的IL-12p40产生对DC活化进行评估。PP1B40：IgG1sigma同种型对照；CNTO9412：IgG4_PAA同种型对照。图3B示出高浓度的抗-CD40抗体C40B176、C40B179、C40B180和C40B183没有诱导B细胞增殖，而500nMASKP-1240诱导B细胞增殖。PP1B40：IgG1sigma同种型对照；CNTO9412：IgG4_PAA同种型对照。显示出ASKP-1240两条独立的剂量响应曲线。具体实施方式定义本说明书中所引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请均以引用方式并入本文，如同在本文中完整给出。应当了解，本文所用的术语只是为了描述具体实施方案的目的，并非旨在进行限制。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。如本文所用，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代，除非上下文中另有明确说明。虽然与本文所述的那些方法和材料相似或等效的任何方法和材料都可以用于检验本专利技术的实践中，然而本文描述示例性材料和方法。“特异性结合”或“特异性地结合”或“结合”是指抗体以比针对非相关抗原更高的亲和力结合到人CD40。通常，抗体以1×10-8M或更小，例如1×10-9M或更小、1×10-10M或更小、1×10-11M或更小、或1×10-12M或更小的解离常数(KD)结合到人CD40，通常以小于其结合到非相关抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD的至少一百倍的KD。可使用标准程序来测量解离常数。然而，特异性地结合人CD40的抗体可能对其它相关抗原，例如，对来自其它物种(同源)(诸如人或猴，例如食蟹猕猴(Macacafascicularis)(cynomolgus,cyno)、黑猩猩(Pantroglodytes)(chimpanzee,chimp)或狨猴(Callithrixjacchus)(commonmarmoset,marmoset))的相同抗原具有交叉反应性。虽然单特异性抗体特异性地结合一个抗原或一个表位，而双特异性抗体特异性地结合两个不同的抗原或两个不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合SEQ ID NO:1的人CD40的分离的拮抗性抗体或其抗原结合片段，所述分离的拮抗性抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:5的重链互补决定区(HCDR)1、SEQ ID NO:61的HCDR2、SEQ ID NO:62的HCDR3、SEQ ID NO:63的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQ ID NO:9的LCDR2和SEQ ID NO:10的LCDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.30 US 62/2348121.一种特异性结合SEQIDNO:1的人CD40的分离的拮抗性抗体或其抗原结合片段，所述分离的拮抗性抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:5的重链互补决定区(HCDR)1、SEQIDNO:61的HCDR2、SEQIDNO:62的HCDR3、SEQIDNO:63的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQIDNO:9的LCDR2和SEQIDNO:10的LCDR3。2.根据权利要求1所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与包含以下项的抗体竞争以结合到SEQIDNO:1的人CD40a)SEQIDNO:11的重链可变区(VH)和SEQIDNO:12的轻链可变区(VL)；b)SEQIDNO:25的VH和SEQIDNO:27的VL；或者c)SEQIDNO:26的VH和SEQIDNO:27的VL。3.根据权利要求1或2所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含以下序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3a)分别为SEQIDNO:5、6、7、8、9和10；b)分别为SEQIDNO:5、15、7、20、9和10；c)分别为SEQIDNO:5、16、7、20、9和10；d)分别为SEQIDNO:5、17、7、20、9和10；e)分别为SEQIDNO:5、18、7、20、9和10；f)分别为SEQIDNO:5、18、19、20、9和10；或者g)分别为SEQIDNO:5、17、19、20、9和10。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体以约1.5×10-10M或更小的解离常数(KD)结合人CD40，此时所述KD在包含0.01％聚山梨醇酯20(PS-20)和100μg/ml牛血清白蛋白的杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水中在25℃下使用ProteOnXPR36系统测量。5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体抑制可溶性人CD40L-驱动的人扁桃体B细胞增殖的IC50值小于约1×10-9M。6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体抑制可溶性人CD40L-驱动的由人树突状细胞产生IL-12p40的IC50值小于约1×10-9M。7.根据权利要求1至6中任一项所述的分离抗体或其抗原结合片段，所述分离抗体或其抗原结合片段包含以下序列的VH和VLa)分别为SEQIDNO:11和12；b)分别为SEQIDNO:21和27；c)分别为SEQIDNO:22和27；d)分别为SEQIDNO:23和27；e)分别为SEQIDNO:24和27；f)分别为SEQIDNO:25和27；或者g)分别为SEQIDNO:26和27。8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离抗体或其抗原结合片段，所述分离抗体或其抗原结合片段为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。9.根据权利要求8所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中在相比于野生型Fc时，所述抗体包含使所述抗体与Fcγ受体的结合降低的Fc区中的至少一个突变。10.根据权利要求9所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc区中的所述至少一个突变为S228P突变、F234A突变、L234A突变、L235A突变、G237A突变、P238S突变、H268A突变、A330S突变或P331S突变，其中残基根据EU索引进行编号。11.根据权利要求9所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为IgG1同种型并且包含L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S突变。12.根据权利要求9所述的分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为IgG4同种型并且包含S228P/F234A/L235...

【专利技术属性】
技术研发人员：H巴布贝，N费利克斯，J弗兰斯森，P基姆，M斯库里，H周，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：美国,US