IgD-Fc-Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了IgD‑Fc‑Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎药物的应用，其中IgD‑Fc‑Ig融合蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

【技术实现步骤摘要】
IgD-Fc-Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎药物的应用
本专利技术涉及应用以IgD/IgDR为靶点，将人IgD-Fc段与人IgG-Fc段连接并合成的IgD-Fc-Ig融合蛋白治疗自身免疫病领域，尤其涉及IgD-Fc-Ig融合蛋白用于治疗类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)药物的应用。
技术介绍
类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一类常见的、慢性自身免疫性疾病，其病理特征为关节滑膜组织炎性增生和关节软骨进行性破坏，全世界的发病率约为1％，其病因至今尚未真正明确。RA临床表现为多发性小关节炎，早期呈现手、腕、足等关节红、肿、热、痛和功能障碍，晚期可出现关节软骨和软骨下骨破坏，关节畸形和失去功能。我国RA的患病率约为0.5％，发病1年内未治疗的RA患者将有20％～30％导致永久性功能丧失，严重影响健康和生活质量，故临床上强调早期诊断早期治疗。目前临床用于治疗RA的药物主要有非甾体抗炎药(non-steroidalanti-inflammatorydrugs,NSAIDs)、激素类药、改善病情抗风湿药(disease-modifyingantirheumaticdrugs,DMARDs)以及生物制剂等。NSAIDs不能阻止RA的病情进展仅是对症治疗，缓解炎症的同时也产生较强胃肠道、肝肾等不良反应；激素类药不良反应多；DMARDs起效慢且不良反应多。近20年来利用生物技术针对细胞因子或受体制成的单抗类药物和融合蛋白类药物获得了较大发展，如TNF-α抑制剂，包括单抗类药物英利昔单抗(Infliximab)、阿达木单抗(Adalimumab)等及融合蛋白类药物依那西普(Etanercept)；IL-6受体单抗托西珠单抗(Tocilizumab)，CD20单抗利妥昔单抗(Rituximab)等，有较好疗效，但同时也抑制了细胞因子及其受体信号对细胞的生理调控功能，导致免疫功能抑制，造成感染发生率高和诱发肿瘤风险性高等不良反应。因此，在免疫反应中对过度活化T、B细胞的下调和抑制是高选择性免疫抑制药物的研究方向，发现特异性更高的RA治疗靶点、探究RA发病新机制、开发新型治疗药物具有十分重要的临床意义。免疫球蛋白D(ImmunoglobulinD,IgD)是1965年发现的免疫球蛋白，包括分泌型IgD(secretedIgD,sIgD)和膜结合型IgD(membraneIgD,mIgD)，mIgD比sIgD的C末端多了跨膜区和胞内区。相关研究提示：IgD虽然体内含量很少，但在免疫系统中发挥重要的调控作用，如增强IgM、IgG和IgA参与的保护性抗原反应；参与对抗外来病毒的入侵的粘膜免疫；参与记忆B细胞的生成与转化过程等。临床发现，IgD在自身免疫病如RA、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)等患者中异常升高。RA患者外周血中sIgD和mIgD水平均高于健康对照者，而且RA患者血清中高水平的sIgD与其血清中人可溶性核因子κB受体活化因子配基(nuclearfactor-κBligand,sRANKL)、类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)和C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)水平正相关。体外实验进一步发现sIgD能明显促进RA患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)的增殖，促进外周血T细胞上早期活化标志CD69和共刺激信号分子CD40L(CD154)的表达，促进外周血成熟B细胞和浆细胞的百分比。这些发现均提示IgD可能在RA的T、B细胞活化中发挥重要作用。IgD在自身免疫病的免疫应答中具有重要作用，IgD水平的升高可导致炎症和免疫性组织损伤。IgD需要通过与特异性膜受体即IgD受体(IgDreceptor，IgDR)结合发挥功能，人类IgDR分子量约为70kDa，但至今IgDR尚未被克隆，编码基因序列仍未知，但能通过玫瑰花结实验及基于荧光标记的流式细胞术对其进行间接检测。利用流式细胞术检测到RA患者外周血T、B细胞以及关节组织中成纤维样滑膜细胞(fibroblast-likesynoviocytes,FLS)表面上均有IgDR的表达，且相比健康对照者表达更高。体外实验发现sIgD可以诱导人T、B和FLS细胞上IgDR的表达异常增加。但IgD/IgDR相关功能尚不明确，关于IgD/IgDR相关信号通路的研究也很少。综合已有文献报道和课题组前期实验结果，申请人推测IgD/IgDR通路可能与RA的发生发展密切相关，高表达IgD/IgDR可能成为治疗RA的理想靶点，研发针对IgD/IgDR为靶点的药物可能成为高选择性治疗RA的新策略。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种IgD-Fc-Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎药物的应用。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是，IgD-Fc-Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎(RA)药物的应用，IgD-Fc-Ig融合蛋白具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。本专利技术研究了IgD-Fc-Ig融合蛋白的具体作用机制并确定其对类风湿关节炎(RA)的疗效，所涉及的IgD-Fc-Ig融合蛋白具有以下独特的优势：(1)IgD-Fc-Ig融合蛋白主要阻断IgD与活化的T、B淋巴细胞上IgDR的结合，并不影响循环中IgD的水平；(2)IgD-Fc-Ig融合蛋白是来源于人的DNA重组产物，基本没有免疫原性；(3)IgD-Fc-Ig融合蛋白由于加入了IgG-Fc段，可以提高蛋白药物的半衰期，比单独的IgD-Fc重组蛋白稳定性好。申请人通过流式细胞术检测配体IgD-Fc-Ig融合蛋白或IgD蛋白与其受体(IgDR)结合的亲和力，以及IgD-Fc-Ig与IgD竞争性结合IgDR受体的能力。本专利技术中IgD-Fc-Ig融合蛋白可以特异性的与IgDR结合，阻断过度表达的IgD与其受体的结合。结果显示：在CD4+T细胞上IgD-Fc-Ig融合蛋白结合IgDR的亲和力大于IgD结合IgDR，并且IgD-Fc-Ig融合蛋白可以与IgD竞争性的结合IgDR。本专利技术的体外实验结果发现IgD可促进RA患者和健康人外周血中T细胞的增殖和活化，引起Th17/Treg细胞亚群的失衡。IgD-Fc-Ig融合蛋白能下调IgD引起的促T细胞增殖、活化作用，恢复IgD诱导的Th17/Treg细胞亚群的失衡，且IgD-Fc-Ig融合蛋白单独作用对T细胞活性无明显影响。本专利技术通过II型胶原所致DBA/1雄性小鼠胶原性关节炎(collageninducedarthritis,CIA)模型揭示了IgD-Fc-Ig融合蛋白对RA的治疗作用，以及药物起效剂量及相关的作用机制。在实验中，造模d29小鼠足爪出现红肿，CIA组足爪红肿从d29到d58天，d35-d47为肿胀高峰。在d47-d58，IgD-Fc-Ig(3.25、6.5mg/kg)可明显降低CIA小鼠关节炎指数和关节肿胀数。d50后，IgD-Fc-Ig(13mg/kg)也降低CIA小鼠关节炎指数和关节肿胀数。IgD-Fc-Ig(1.625mg/kg)组以及IgG-Fc(13mg/kg)阴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.IgD‑Fc‑Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎药物的应用，所述IgD‑Fc‑Ig融合蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.IgD-Fc-Ig融合蛋白用于制备治疗类风湿关节炎药物的应用，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏伟，吴育晶，
申请(专利权)人：魏伟，
类型：发明
国别省市：安徽,34