【技术实现步骤摘要】
一种甲型流感病毒亚型分型检测方法
本专利技术属于生物技术检测领域，尤其涉及一种甲型流感病毒亚型分型检测方法。
技术介绍
甲型流感病毒为常见流感病毒，非常容易发生变异，因此有很多甲型流感病毒亚型。这些亚型则被人们称为“禽流感”。甲型流感对人类致病性高，曾多次引起世界性大流行。甲型流感病毒中至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：甲型H1N1、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8。其中H1、H5、H7亚型为高致病性，H1N1、H5N1、H7N9尤为值得关注。因此非常有必要对甲型流感病毒亚型H1N1、H5N1、H7N9进行检测。目前对于这几种亚型上没有很好的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种能快速、灵敏地检测甲型流感病毒亚型的方法。具体方案是：一种甲型流感病毒亚型分型检测方法，包括以下步骤：步骤一、设计与合成引物：根据甲型流感病毒各亚型的特异性的基因序列，分别设计出对应的正向引物和反向引物；在正向引物的5’端连接上-NH2-(CH2)n-Tm得到磁珠连接正向引物，n＝4～8，m＝14～18；在反向引物的5’端带...
【技术保护点】
1.一种甲型流感病毒亚型分型检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、设计与合成引物：根据甲型流感病毒各亚型的特异性的基因序列，分别设计出对应的正向引物和反向引物；在所述正向引物的5’端连接上‑NH2‑(CH2)n‑Tm得到磁珠连接正向引物，n＝4～8，m＝14～18；在所述反向引物的5’端带上荧光标记得到5’端带荧光标记的反向引物，针对不同的甲型流感病毒亚型选择不同的荧光标记；合成甲型流感病毒各亚型的所述正向引物、所述磁珠连接正向引物和所述5’端带荧光标记的反向引物；步骤二、制备连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠：将所述步骤一得到的甲型流感病毒各亚型的磁珠连接正向引物分别...
【技术特征摘要】
1.一种甲型流感病毒亚型分型检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、设计与合成引物：根据甲型流感病毒各亚型的特异性的基因序列，分别设计出对应的正向引物和反向引物；在所述正向引物的5’端连接上-NH2-(CH2)n-Tm得到磁珠连接正向引物，n＝4～8，m＝14～18；在所述反向引物的5’端带上荧光标记得到5’端带荧光标记的反向引物，针对不同的甲型流感病毒亚型选择不同的荧光标记；合成甲型流感病毒各亚型的所述正向引物、所述磁珠连接正向引物和所述5’端带荧光标记的反向引物；步骤二、制备连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠：将所述步骤一得到的甲型流感病毒各亚型的磁珠连接正向引物分别与羧基磁珠连接，得到甲型流感病毒各亚型的连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠；步骤三、甲型流感病毒RNA提取；步骤四、RT-PCR：以所述步骤一得到的甲型流感病毒各亚型的所述正向引物、所述5’端带荧光标记的反向引物和所述步骤二得到的甲型流感病毒各亚型的连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠为引物，以所述步骤三得到的甲型流感病毒RNA为模板，进行RT-PCR反应；步骤五、磁吸附与洗涤：RT-PCR反应结束后，在磁性作用下，磁珠被吸附聚集，用洗涤液洗涤磁珠，去掉未与磁珠连接的荧光标记；步骤六、检测：采用酶标仪或者流式细胞仪检测所述步骤五得到的磁珠上的荧光标记信号，从而确定甲型流感病毒的亚型。2.如权利要求1所述的甲型流感病毒亚型分型检测方法，其特征在于，所述步骤四中加入了针对甲型流感病毒各亚型的阳性对照模板；所述阳性对照模板为带有所述步骤四中RT-PCR扩增DNA片段的质粒。3.如权利要求2所述的甲型流感病毒亚型分型检测方法，其特征在于，所述甲型流感病毒亚型包括甲型流感病毒H1N1亚型、甲型流感病毒H5N1亚型和甲型流感病毒H7N9亚型。4.如权利要求3所述的甲型流感病毒亚型分型检测方法，其特征在于，H1N1亚型正向引物的序列如SEQIDNO.7所示；H5N1亚型正向引物的序列如SEQIDNO.8所示；H7N9亚型正向引物的序列如SEQIDNO.9所示；H1N1亚型5’端带荧光标记的反向引物的序列如SEQIDNO.4所示；H5N1亚型5’端带荧光标记的反向引物的序列如SEQIDNO.5所示；H7N9亚型5’端带...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈小芬，
申请(专利权)人：宁波怡和医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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