【技术实现步骤摘要】
端粒酶活性检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及用于非诊断治疗目的的端粒酶活性定量检测方法。
技术介绍
人端粒酶是一种核蛋白反转录酶，包括三个组分：端粒酶反转录酶、端粒酶RNA组分和相关蛋白质。端粒酶负责将端粒重复序列(TTAGGG)n添加到人染色体的末端，其在85％的恶性肿瘤细胞中过度表达，但在正常组织中不表达。因此，端粒酶可用作特异性肿瘤标志物，端粒酶活性的有效检测在癌症诊断和治疗中具有巨大的价值。端粒重复序列扩增法(TRAP)已被认为是检测端粒酶的金标准方法。尽管这个最常用的方法灵敏度高，但仍有许多缺点，如费时、需要进行复杂的优化、产生假阳性。最近有越来越多的新测定法被开发出来以取代TRAP法，包括荧光法、比色法、电化学法、化学发光法、电化学发光法和表面增强拉曼散射法(SERS)。在荧光法方面，有研究使用比率荧光探针通过单一波长处的荧光强度变化，即简单的颜色变化来检测靶分析物。这种方法容易受许多干扰因素的影响，如探针浓度、激发强度和环境影响。比率荧光法是通过测量两种不同波长处荧光强度的比值测定目标物的一种分析方法。由于所测得的荧光比值信号...
【技术保护点】
1.一种端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，包括端粒酶底物引物、dNTPs、端粒酶逆转录缓冲液、氯化血红素、过氧化氢、量子点比率荧光探针，其中所述量子点比率荧光探针包含量子点部分和染料部分，所述量子点部分和所述染料部分发射不同颜色的荧光，且过氧化氢能淬灭所述量子点部分发射的荧光但不能淬灭所述染料部分发射的荧光，所述量子点部分和所述染料部分通过硫代磷酸酯修饰的DNA复合，所述量子点部分为CdZnTeS量子点，所述染料部分为Rox。
【技术特征摘要】
1.一种端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，包括端粒酶底物引物、dNTPs、端粒酶逆转录缓冲液、氯化血红素、过氧化氢、量子点比率荧光探针，其中所述量子点比率荧光探针包含量子点部分和染料部分，所述量子点部分和所述染料部分发射不同颜色的荧光，且过氧化氢能淬灭所述量子点部分发射的荧光但不能淬灭所述染料部分发射的荧光，所述量子点部分和所述染料部分通过硫代磷酸酯修饰的DNA复合，所述量子点部分为CdZnTeS量子点，所述染料部分为Rox。2.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述端粒酶底物引物如SEQIDNO:1所示，所述端粒酶逆转录缓冲液包含20mMTris-HCl(pH＝8.3),1.5mMMgCl2,63mMKCl,0.005％Tween20,BSA0.1mg/mL。3.根据权利要求1或2所述的端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，还包括Tris缓冲液，所述量子点比率荧光探针溶于所述Tris缓冲液中形成量子点比率荧光探针溶液。4.根据权利要求3所述的端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，包括：第一试剂容器，所述第一试剂容器包含所述端粒酶底物引物、dNTPs和所述端粒酶逆转录缓冲液，第二试剂容器，所述第二试剂容器包含所述氯化血红素，第三试剂容器，所述第三试剂容器包含所述过氧化氢，第四试剂容器，所述第四试剂容器包含所述量子点比率荧光探针溶液。5.根据权利要求3所述的端粒酶活性检测试剂盒，其特征在于，包括：第一试剂容器，所述第一试剂容器包含所述端粒酶底物引物、dNTPs和所述端粒酶逆转录缓冲液，第二试剂容器，所述第二试剂容器包含所述氯化血红素，第三试剂容器，所述第三试剂容器包含所述过氧化氢，试纸传感器，所述试纸传感器通过将试纸接触所述量子点比率荧光探针溶液而制得。6.一种用于非诊断治疗目的的端粒酶活性定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取端粒酶样品；(2)向所述端粒酶样品加入端粒酶底物引物、dNTPs和端粒酶逆转录缓冲液进行反应，形成端粒酶延伸反应产物，然后加入氯化血红素进行反应，形成氯化血红素/G-四链体；(4)向所述步骤(3)得到的氯化血红素/G-四链体加入固定量的过氧化氢进行反应；(5)将所述步骤(4)中反应后的混合体系与固定量...
【专利技术属性】
技术研发人员：马英新，黄卫人，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44
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