一株荔枝内生乳酸菌及其发酵果汁饮料制造技术

本发明专利技术公开了一株荔枝内生乳酸菌及其发酵果汁饮料，本发明专利技术以荔枝果肉为材料，通过MRS‑溴甲酚紫平板筛选法分离出一株荔枝内生乳酸菌，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No:60353。生理生化试验和16SrDNA鉴定试验结果表明该株荔枝内生乳酸菌为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种。筛选的荔枝内生乳酸菌肠膜明串珠菌发酵荔枝果汁具有良好的适应性，能有效保持荔枝果汁的主要营养物质，显著降低荔枝汁中还原糖含量，适合于开发低糖含量健康型荔枝乳酸菌发酵功能性饮料。本发明专利技术不但为开发低糖健康型的荔枝乳酸菌发酵功能性饮料提供参考，还为果汁功能型发酵饮料的专用菌种筛选提供了新思路。

An Endophytic Lactic Acid Bacteria from Litchi and Its Fermented Fruit Juice Beverage

The invention discloses a litchi endophytic lactic acid bacteria and its fermented fruit juice beverage. The litchi pulp is used as material, and a litchi endophytic lactic acid bacteria is separated by MRS bromocresol violet plate screening method, which is stored in the microbial strain Preservation Center of Guangdong Province, and the preservation number is GDMCC No: 60353. Physiological and biochemical tests and 16SrDNA identification showed that the endophytic lactobacillus strain was a subspecies of Leuconostoc mesenterica glucan. The screened endophytic lactic acid bacteria Leuconostoc mesenterica fermented litchi juice has good adaptability, can effectively maintain the main nutrients of litchi juice, significantly reduce the content of reducing sugar in Litchi juice, and is suitable for the development of low-sugar healthy litchi lactic acid bacteria fermented functional beverage. The invention not only provides a reference for developing low-sugar healthy litchi lactobacillus fermented functional beverage, but also provides a new idea for screening special strains of fruit juice functional fermented beverage.

【技术实现步骤摘要】
一株荔枝内生乳酸菌及其发酵果汁饮料
本专利技术涉及微生物领域，具体地说，涉及一株荔枝内生菌的筛选及其发酵的果汁饮料。
技术介绍
荔枝(LitchiichinensisSonn.)为无患子科荔枝属常绿小乔木,原产于我国华南亚热带,在我国有着悠久的种植历史。荔枝色美味香甜，富含糖分、有机酸、维生素、氨基酸等营养物质和多酚、花色苷等生物活性物质，具备抗氧化、延缓衰老、降血脂、降血糖、增强免疫力和抑制乙肝病毒表面抗原的保健功效，是岭南特色水果中的佳品。我国是世界最大的荔枝产出国，世界上荔枝消费主要是由中国种植供应。由于在盛夏高温季节采收，加上其结构特殊，荔枝采收后极易褐变和腐烂变质,不耐贮藏。目前，市场上的主要荔枝加工品有荔枝干、荔枝罐头、果汁饮料、果酒等。因此，急需一批技术含量高、营养功能成分保护好、产品附加值高的果蔬深加工技术和产品。以水果为发酵基质的乳酸菌发酵果汁是集水果的营养价值和益生菌的保健功能于一体的新型发酵饮料。国内外研究乳酸菌发酵果汁结果显示，经乳酸菌发酵后的果汁产品，色、香、味均大有改善，果汁具有的调节胃肠道消化、抑制病原菌、增强免疫力以及抗衰老等功能，且能有效改善传统益生菌乳制品乳糖不耐症和高胆固醇。国内学者对荔枝汁和荔枝果渣进行了乳酸菌发酵研究，开发了功能性汁荔枝发酵饮料和果渣果粉产品。但发酵菌株均以牛奶、蔬菜发酵菌株为多。菌株选择是乳酸菌果汁发酵的关键之一。目前，研究中用于水果发酵的乳酸菌菌株专用菌甚少，所用菌株对水果发酵适应性不强，造成现有乳酸菌发酵水果产品风味、活菌数、营养成分等方面不理想。因此，筛选出具有优良发酵性能的水果发酵专用菌是乳酸菌果汁发酵技术的首要任务。植物内生菌是指存活于健康植物组织内部，而又不引发宿主植物表现出明显感染症状的微生物类群。研究表明，植物内生菌和其宿主之间存在着相互依存及互惠的关系，植物内生菌中分离出的次生代谢产物也存在生物活性成分。荔枝内生菌仅见荔枝病害抑制、保鲜和卷烟产香等研究，目前尚未见荔枝内生菌用于果汁发酵的研究和报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有优良发酵性能水果发酵的专用菌少的技术缺陷和不足，提供一株新的肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicum)。该菌株是从荔枝果肉中筛选一株荔枝内生乳酸菌，并能用于制备水果乳酸菌发酵饮料。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术以荔枝果肉为材料，通过MRS-溴甲酚紫平板筛选法分离荔枝内生乳酸菌。通过测定筛选菌株的发酵产酸能力(pH值)和生长能力(24h活菌数、OD值)筛选出具有发酵性能优良的一株荔枝内生乳酸菌。一株荔枝内生乳酸菌(Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicum),于2018年4月13日，保藏地址为：中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCCNo:60353。生理生化试验和16SrDNA鉴定试验结果表明该株荔枝内生乳酸菌为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种。含上述荔枝内生乳酸菌的果汁饮料，所述果汁优选为荔枝果汁。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术以常用果蔬汁发酵菌种植物乳杆菌为对照菌株进行该荔枝内生乳酸菌肠膜明串珠菌发酵荔枝果汁的微生物、理化指标和营养物质含量研究。荔枝内生乳酸菌肠膜明串珠菌能在荔枝果汁中良好生长，活菌数达109cfu/mL，优于对照菌植物乳杆菌，但差异不显著(P＜0.05)；发酵果汁的乳酸从对照果汁的0.44升高到肠膜明串珠菌的9.6和植物乳杆菌的13.9，pH值从对照果汁的4.68下降到肠膜明串珠菌的3.73和植物乳杆菌的3.54，差异显著(P＜0.05)；荔枝内生乳酸菌发酵荔枝果汁中的Vc含量比对照菌植物乳杆菌和未接菌果汁都高，其对果汁中果糖、葡萄糖的利用能力也强于对照菌植物乳杆菌，两株菌葡萄糖含量的降幅分别为31.42％和26.7％，果糖含量的降幅分别为43.3％和21.7％；内生乳酸菌发酵果汁中游离氨基酸氨基酸保留率为87.3％略高于对照菌植物乳杆菌的84.36％，但两种菌在发酵过程中各种氨基酸的变化不同。筛选的荔枝内生乳酸菌肠膜明串珠菌发酵荔枝果汁具有良好的适应性，能有效保持荔枝营养物质，显著降低荔枝汁中还原糖含量，适合于开发低糖健康型荔枝乳酸菌发酵功能性饮料。本专利技术不但为开发低糖健康型的荔枝乳酸菌发酵功能性饮料提供参考，还为果汁功能型发酵饮料的专用菌种筛选提供了新思路。附图说明图1为荔枝内生乳酸菌LZ的菌落形态和细胞形态图；图2为荔枝内生乳酸菌LZ扩增产物测定的序列比对图；图3为荔枝内生乳酸菌肠膜明串珠菌和对照菌植物乳杆菌发酵荔枝果汁及未接菌的对照果汁中的游离氨基酸含量的测定结果图。具体实施方式材料：荔枝：试验荔枝品种为‘桂味’，由东莞市农业科学研究中心提供，种植于东莞市农业科学研究中心内，采收时间为2017年7月，采收后运送至实验室于-10℃冷库保存备用。菌种：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)：实验室保藏。仪器与试剂：(1)仪器榨汁机(Cucina)：飞利浦；立式蒸汽灭菌锅(YXQ-LS-SⅡ)：上海博迅实业有限公司医疗设备厂；台式冷冻离心机(3K15)：德国SIGMA公司；生化培养箱(LRH-250)：上海一恒科学仪器有限公司；UV-1800全波长扫描分光光度计：日本岛津公司；PH计(FiveEasy)：瑞士梅特勒-托利多；电热恒温水浴锅(HWS26型)：上海一恒科学仪器有限公司；液相色谱仪(1260)：美国安捷伦科技有限公司；超高压液相色谱仪(UltiMate3000)：赛默飞世尔科技(中国)有限公司；(2)试剂MRS肉汤培养基：广东环凯生物科技有限公司；MRS琼脂培养基：广东环凯生物科技有限公司；溴甲酚紫：天津市天新精细化工开发中心；乳酸、L-抗坏血酸、D-果糖：均购自德国Dr.Ehrenstorfer；D-葡萄糖：中国食品药品检定研究院；氨基酸混合标液：中国计量科学研究院。实施例1：荔枝内生乳酸菌筛选：将荔枝表面消毒后去皮，果肉用榨汁机打成浆，转入液体培养基中，富集培养后采用MRS-溴甲酚紫平板筛选法分离出产酸菌，再通过测定各产酸菌发酵产酸能力(pH值)和生长能力(24h活菌数、OD值)筛选出具有发酵性能优良的菌株。(1)荔枝内生乳酸菌的初筛。将果实表面消毒后去皮，果肉用榨汁机打成浆，取15mL果浆转入200mL灭菌MRS液体培养基中，富集培养24h后取其发酵液。以无菌生理盐水按10的倍数逐级稀释荔枝果汁发酵液。将各级稀释液分别涂布于加有溴甲酚紫的MRS培养基平板上，在36℃下培养24h，进行产酸菌分离。在出现单菌落的平板上，根据菌落形态，挑取使溴甲酚紫产生变色的菌落进行镜检，并接入肉汤培养基进行培养，进一步挑选出G(+)菌落，如此反复3次，分离纯化得到纯培养。将筛选出的各乳酸菌菌株分别编号。(2)优良发酵菌株的筛选。筛选出的各乳酸菌菌株分别接种于250mLMRS肉汤培养基中，在36℃下培养24h后测定各产酸菌发酵产酸能力(pH值)和生长能力(24h活菌数、OD值)，筛选出发酵性能优良的荔枝内生乳酸菌菌株，进行鉴定。研究将MRS-溴甲酚紫平板筛选法分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株荔枝内生乳酸菌（Leuconostoc mesenteroides subsp.dextranicum）, 保藏号为GDMCC No:60353。

【技术特征摘要】
1.一株荔枝内生乳酸菌（Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicum）,保藏号为GDMCCN...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡珊，黄皓，梁卫驱，罗华建，陈仕丽，徐匆，钟鸣，
申请(专利权)人：东莞市农业科学研究中心，
类型：发明
国别省市：广东,44