一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型人源抗菌肽LL‑37衍生物及其应用，所述人源抗菌肽LL‑37衍生物氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术还包括将上述新型人源抗菌肽LL‑37衍生物在抗菌药物制备中的应用。所述抗菌药物为抗细菌药物或抗真菌药物，所述细菌或真菌至少为隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌、金黄葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌和沙门氏菌中的一种。与现有技术相比，本发明专利技术序列的人源抗菌肽LL‑37衍生物具有稳定性强且抗菌效果好等优点，在抗菌药物制备领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物及其应用
本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物及其应用。
技术介绍
抗菌肽是生物体经诱导产生的一种具有广谱抗菌活性的小分子多肽，通常由12-60个氨基酸组成，属于机体非特异性防御系统的固有组成部分，广泛存在于细菌、真菌、两栖类、昆虫、高等植物、哺乳动物乃至人类中。近年来由于抗生素的滥用导致细菌耐药性、过敏反应和环境污染，因此人们开始迫切寻找新型药物来解决抗生素产生的负面效应。而抗菌肽具有热稳定性好、抗菌谱广、无污染、不产生耐药性等优点，在国内外已成为研究和开发的热点，逐渐替代抗生素预防和治疗疾病，具备极其广阔的发展前景。某些抗菌肽不仅对部分病毒、真菌、原虫和癌细胞等有杀灭作用，甚至还能提高免疫力并加速伤口愈合过程。抗菌肽可分为天然抗菌肽和人工合成抗菌肽。由于从动物体内提取天然抗菌肽存在产量低、耗时长、工艺复杂且费用昂贵等问题，导致其无法实现大规模生产，这也成为了制约抗菌肽进入临床应用的最大障碍。而人工合成的抗菌肽与天然抗菌肽相比往往能够产生更好的抗菌活性，因此，通过使用基因工程、固相化学合成等技术对抗菌肽进行改造制备已成为当今研究的热点方向。抗菌肽LL-37是人类天然免疫系统中唯一的cathelicidin家族成员，其不仅具有广谱的抗微生物活性，还具有调节免疫系统、促进损伤修复和血管生成、治疗肿瘤等功能。抗菌肽LL-37是cathelicidin肽Hcap-18的C末端切割产物，因具有37个氨基酸，故被称为LL-37抗菌肽。LL-37可通过趋化免疫细胞、调节促炎因子或抑制因子的分泌、协调天然免疫和获得性免疫等功能，发挥免疫调节作用，是一种具有开发潜力的抗菌肽。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗菌效果更好且稳定性更强的新型人源抗菌肽LL-37衍生物及应用。本专利技术的技术方案为一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物，所述人源抗菌肽LL-37衍生物氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。进一步地，所述人源抗菌肽LL-37衍生物是通过多肽固相合成法进行合成制备或通过分子生物学技术制备的。本专利技术还包括上述人源抗菌肽LL-37衍生物在抗菌药物制备中的应用。进一步地，所述抗菌药物为抗细菌药物或抗真菌药物，所述细菌或真菌至少为隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌、金黄葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌和沙门氏菌中的一种。一种抗菌药物，包括上述人源抗菌肽LL-37衍生物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。进一步地，所述抗菌药物的制剂形式为注射剂、凝胶剂、软膏剂或喷雾剂。进一步地，所述注射剂中人源抗菌肽LL-37衍生物的含量为0.05-500mg/支；所述凝胶剂中人源抗菌肽LL-37衍生物的含量为0.1-100mg/支，所述软膏剂中人源抗菌肽LL-37衍生物的含量为0.1-100mg/支，所述喷雾剂中人源抗菌肽LL-37衍生物的含量为0.05-5mg/瓶。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过保留抗菌活性片段对LL-37抗菌肽进行结构改造，获得一种新型人源抗菌肽衍生物，显著提高了其抑菌活性，极具市场价值。本专利技术方案中的新型人源抗菌肽LL-37衍生物在保留人源抗菌肽(序列如SEQIDNO：2所示)抗菌活性结构Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg的基础上，加入了天冬酰胺和赖氨酸，吸引细菌表面负电荷，增强抗菌活性，同时，改造后的人源抗菌肽LL-37衍生物富含谷氨酰胺和半胱氨酸，稳定性得到了极大的提升。本专利技术根据抗菌肽的作用机理和氨基酸组成特点，同时参照LL-37抗菌肽抑菌活性结构，设计了一种新型人源LL-37抗菌肽衍生物，由26个氨基酸组成，分子量为3177.6D。该抗菌肽能抑制金黄葡萄球菌、白色念珠菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌等细菌和真菌的生长，具有较好的抑菌效果，可作为现有抗生素的优良替代药品或辅助药物，以解决抗生素滥用问题及细菌和真菌感染对广大患者造成的痛苦。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。本专利技术的实施例一为：一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物，其氨基酸序列为Leu-Leu-Asp-Phe-Lys-Glu-Arg-Lys-Glu-Lys-Gln-Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Gln-Asn，分子量为3177.6D。如表1所示，所述新型人源抗菌肽LL-37衍生物包含抗菌肽LL-37的抗菌活性结构Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg。多肽名称氨基酸序列抗菌肽LL-37LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES抗菌肽LL-37衍生物LLDFKERKEKQFKRIVQRIKDFLRQN经本专利技术方案改造后的抗菌肽LL-37衍生物富含谷氨酰胺和半胱氨酸，增强了抗菌肽稳定性。加入天冬酰胺和赖氨酸，可吸引细菌表面负电荷，增强了抗菌活性。根据新型人源抗菌肽LL-37衍生物氨基酸序列，通过标准固相肽合成法即可人工合成新型人源抗菌肽LL-37衍生物。所合成抗菌肽衍生物经反相-高效液相层析(reversed-phasehigh-performanceliquidchromatography，RP-HPLC，Column：XBridge4.6×250mm)脱盐并纯化，采用乙腈/水/三氟乙酸体系进行梯度洗脱(A：0.1％三氟乙酸(trifluoroacetic，TFA)in100％water；B：0.1％trifluoroaceticin100％acetonitrile)，采用电喷雾质谱法测定新型人源抗菌肽LL-37衍生物分子量。其中样品纯度≥98％，新型人源抗菌肽LL-37衍生物理论分子量为3177.6D，实测分子量为3164.8D，测定结果基本一致，将合成的新型人源抗菌肽LL-37衍生物溶于灭菌双蒸水，用于活性检测。本专利技术的实施例二为：一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物氯化钠注射剂的制备：本实施例为本专利技术方案的新型人源LL-37抗菌肽衍生物在制备抗菌药物方面的应用，所述抗菌肽衍生物的氨基酸序列为Leu-Leu-Asp-Phe-Lys-Glu-Arg-Lys-Glu-Lys-Gln-Phe-Lys-Arg-Ile-Val-Gln-Arg-Ile-Lys-Asp-Phe-Leu-Arg-Gln-Asn，分子量为3177.6D。将该抗菌肽衍生物制成多肽菌素氯化钠注射剂，每100ml注射剂由以下组分组成：主药为SEQIDNO:1序列的抗菌肽0.5g，其百分含量为0.5％，氯化钠0.9g，余量为注射用水。称取处方量总体积60％的注射用水，然后分别加入处方量SEQIDNO:1序列抗菌肽衍生物0.5g和氯化钠0.9g，搅拌使其全部溶解。加0.1％的针用活性炭加热至50℃，搅拌吸附30分钟后除去活性炭，加入注射用水至总体积。灭菌过滤，检验合格进行灌装，灯检合格包装，得成品。本专利技术的实施例三为：一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物凝胶剂的制备：本实施例为新型人源LL-37抗菌肽衍生物在制备抗菌药物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型人源抗菌肽LL‑37衍生物，其特征在于：所述人源抗菌肽LL‑37衍生物氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种新型人源抗菌肽LL-37衍生物，其特征在于：所述人源抗菌肽LL-37衍生物氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.根据权利要求1所述的新型人源抗菌肽LL-37衍生物，其特征在于：所述人源抗菌肽LL-37衍生物是通过多肽固相合成法进行合成制备或通过分子生物学技术制备的。3.一种如权利要求1～2任一项所述的新型人源抗菌肽LL-37衍生物在抗菌药物制备中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述抗菌药物为抗细菌药物或抗真菌药物，所述细菌或真菌至少为隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌、金黄葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌和沙门氏菌中的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐畅，李军华，谢苍桑，张溪之，张利鹏，姜长安，
申请(专利权)人：珠海中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44