一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白及构建方法与应用技术

本发明专利技术公开的一种mTAT‑hEGF‑kCD47融合蛋白，将mTAT、kCD47与hEGF融合表达，设计出mTAT‑hEGF‑kCD47的全基金组序列，人工合成后连接入pTrcHisB表达载体，构建成功mTAT‑hEGF‑kCD47重组表达质粒载体，经表达、纯化获得具有生物学活性的mTAT‑hEGF‑kCD47融合蛋白，具有低成本、高活性、作用时间久的优点。本发明专利技术mTAT‑hEGF‑kCD47融合蛋白不仅保留了TAT原有的穿透力和CD47的抑制非特异性免疫应答的作用，且对外源蛋白hEGF的活性几乎没有影响，使其在在制备促进表皮增殖的药物及护肤品中具有广阔的前景。

A mTAT-hEGF-kCD47 fusion protein and its construction method and Application

The invention discloses a mTAT hEGF kCD47 fusion protein, which fuses mTAT, kCD47 and hEGF, designs a full-fund sequence of mTAT hEGF kCD47, and artificially synthesizes it and connects it to pTrcHisB expression vector to construct a successful mTAT hEGF kCD47 recombinant expression plasmid vector, which has biological activity after expression and purification. The mTAT hEGF kCD47 fusion protein has the advantages of low cost, high activity and long acting time. The mTAT hEGF kCD47 fusion protein of the invention not only retains the original penetrating power of TAT and the effect of CD47 on inhibiting non-specific immune response, but also has little effect on the activity of the exogenous protein hEGF, so that it has broad prospects in the preparation of drugs and skin care products promoting epidermal proliferation.

【技术实现步骤摘要】
一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白及构建方法与应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白，本专利技术还涉及一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白的构建方法与应用。
技术介绍
表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)具有促进表皮细胞增殖等多种功效。人表皮生长因子(humanepidermalgrowthfactor，hEGF)是一种由53个氨基酸残基组成的单链多肽，其分子量为6kDa，等电点pI为4.2。hEGF分子的稳定性较高，能耐受酸、碱、热以及胃蛋白酶和胰蛋白酶等的作用。大量研究证实hEGF具有刺激表皮细胞增殖和分化的能力，能通过促进表皮细胞内DNA的合成，加速新细胞取代老化细胞的进程，增加细胞对其他内源性生长因子的摄取，促进细胞分泌透明质酸和糖蛋白，从而恢复表皮的光滑和弹性、延缓皮肤衰老、减少皱纹，hEGF将在美容护肤方面具有十分重要的意义。此外，当表皮发生损害后，hEGF还可与细胞膜上的表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)特异性结合，启动EG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种mTAT‑hEGF‑kCD47融合蛋白，其特征在于，所述mTAT‑hEGF‑kCD47融合蛋白的cDNA序列如序列1所示。

【技术特征摘要】
1.一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白，其特征在于，所述mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白的cDNA序列如序列1所示。2.根据权利要求1所述的一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白，其特征在于，所述mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白的蛋白质序列如序列2所示。3.根据权利要求1或2所述的一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白，其特征在于，所述mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白中，mTAT为具有连续的9个连续的Arg多肽，其氨基酸的序列RRRRRRRRR。4.根据权利要求1或2所述的一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白，其特征在于，所述kCD47具体为CD47能抑制巨噬细胞活性的关键功能区GNYTSEVTELTREGETIIELK。5.如权利要求1所述的一种mTAT-hEGF-kCD47融合蛋白的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，构建mTAT+hEGF+kCD47载体取用GeneBank基因库中TAT、hEGF和CD47已知序列为基础，在序列的N端加上RRRRRRRRR，中间通过SGPG连接肽连接，模板序列设计为：mTAT+hEGF+kCD47；采用载体pTrcHis，使用BamHI和XhoI双酶切穿梭pTrcHis质粒，得到载体大片段，将所述模板序列与载体大片段连接，得到重组穿梭质粒，测序正确后构建成功mTA...

【专利技术属性】
技术研发人员：苟兴春，高兴春，胡峰瑞，米亚静，
申请(专利权)人：西安医学院，
类型：发明
国别省市：陕西,61