ROR1抗体组合物和相关方法技术

本发明专利技术提供特异性地识别人ROR1的抗体、抗体药物缀合物、基于抗体的片段或抗体片段(抗原结合片段)以及抗体药物缀合物(ADC)和嵌合抗原受体(CAR)，以及相关组合物。本发明专利技术还提供在各种诊断和治疗应用中使用这类抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】ROR1抗体组合物和相关方法相关申请的交叉引用本主题专利申请要求美国临时专利申请号62/280,843(2016年1月20日提交)的优先权。优先权申请全部公开整体和为了所有目的援引加入本文。专利技术背景癌症是死亡的主要原因之一。它是由健康细胞的恶性转化引起的一类疾病，由遗传改变引起，如染色体易位，肿瘤抑制基因、转录因子或生长因子受体中的突变，导致细胞的永生化。如果永生化与过度增殖结合，则永生化细胞产生有或无转移的肿瘤(在实体瘤的情况下)或者白血病和淋巴瘤(血液的癌症)。有缺陷的凋亡或程序性细胞死亡可以进一步有助于导致癌症的细胞恶性转化。已描述由受体酪氨酸激酶孤儿受体-1和-2(ROR1和ROR2)组成的膜相关受体酪氨酸激酶家族特异性地与特点癌症相关(Rebagayetal.(2012)FrontOncol.2(34))，同时在健康组织上基本不存在表达，只有少量例外(Balakrishnanetal.(2016)ClinCancerRes.doi:10.1158/1078-0432)。ROR表达是否在功能上与肿瘤发生相关尚不清楚。但是，由于ROR家族成员的完全肿瘤选择性表达，它们代表靶向癌症疗法的相关靶标。由于其与慢性淋巴细胞白血病(CLL)几乎100％相关(Cuietal.(2016)Blood128(25),p.2931)以及还在某些实体瘤如肺和乳房的实体瘤中表达的观察(Balakrishnanetal.(2016)ClinCancerRes.doi:10.1158/1078-0432)，受体酪氨酸激酶孤儿受体-1(ROR1)作为癌症靶标特别令人感兴趣。ROR家族的成员是I型跨膜蛋白，其包含3个不同的胞外结构域，Ig、Kringle和Frizzled结构域，然后是跨膜区和胞内部分。在胞内部分内，ROR1具有一个酪氨酸激酶结构域、两个富含丝氨酸/苏氨酸的结构域和一个富含脯氨酸的结构域。已在胚胎模式和神经发生的背景下通过各种同系物研究ROR。基于激酶结构域的需求，这些生理功能是二分的。越来越多的文献已建立ROR1作为癌症的标记，如ROR1表达与其几乎100％相关的慢性淋巴细胞白血病(CLL)，一些急性淋巴细胞白血病(ALL)，套细胞淋巴瘤和一些其他恶性肿瘤。此外，ROR1主要参与许多实体瘤的发展，如神经母细胞瘤、肉瘤、肾细胞癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、头颈癌、黑色素瘤和其他癌症。已显示ROR1抑制凋亡，增强EGFR信号传导，诱导上皮-间充质转换(EMT)，并且有助于小窝形成。重要的是，ROR1主要在胚胎组织中可检测，并且一般在成年组织中不存在，使得该蛋白成为癌症疗法的理想药物靶标。因此，以前已认为ROR1作为开发ROR1特异性抗体的靶标。但是，由于不同哺乳动物物种之间ROR1的高同源性，其在人和食蟹猴之间在氨基酸水平上100％保守，在人和小鼠之间96.7％同源，并且在人和兔之间96.3％同源，难以通过标准技术如动物免疫产生针对这个靶标的高亲和力抗体。在文献中已讨论一些小鼠和兔抗体。例如，WO2007/051077讨论了单克隆抗体，包括人源化抗体，针对在淋巴瘤上发现的天然ROR1，包括CLL、小淋巴细胞性淋巴瘤、边缘B-细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤。WO2007/146957的主题是利用试剂抑制肿瘤细胞生长的方法，所述试剂可以是抑制ROR1激酶活性的ROR1-结合抗体。WO2011/054007讨论了治疗或预防癌症的方法，其中通过施用特异性ROR1靶向抗体表达ROR1的胞外结构域。此外，WO2010/124188讨论了抗人ROR1抗体，特别是命名为2A2的单克隆小鼠抗体，而WO2012/075158涉及名为R11和R12的单克隆兔抗体。WO2016/094873也提到了特定ROR1靶向抗体。WO2011/079902和WO2012/076066讨论了结合至所选胞外ROR1结构域序列的能够诱导细胞死亡的ROR1的生物抑制剂。WO2014/031174涉及具有与名为99961的抗体相同的结合特异性的抗ROR1抗体。WO2016/187220中进一步提到了抗ROR1抗体的结合表位。WO2011/159847讨论了结合ROR1的特定scFv抗体片段缀合物。WO2014/167022、WO2016/055592和WO2016/055593讨论了双特异性ROR1靶向抗体和它们的用途，而WO2015/184203讨论了三特异性结合分子。公开人源化抗ROR1单克隆抗体的特别新的文件是基于最初公开的小鼠或兔抗体，如2A2、R11、R12或D10。由于可用的ROR1特异性单克隆抗体的数量少，本领域需要更好的抗ROR1抗体，其具有更高的亲和力或者已知抗体克隆没有的其他功能特性。还需要额外的诊断工具用于通过例如免疫印迹和/或免疫组织化学(IHC)检测ROR1相关病症中的ROR1表达。本专利技术涉及解决这些和其他需要。专利技术概述在一方面，本专利技术提供兔抗体的新的、高亲和力结合结构域，其特异性地结合人受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(hROR1)的胞外结构域，并且其是利用哺乳动物细胞上表达的人ROR1(hROR1)胞外结构域作为诱饵从未免疫的兔的高度多样性噬菌体展示文库选出。通过筛选对作为重组蛋白的hROR1的ECD的结合并且还基于哺乳动物宿主细胞表面上过量表达的hROR1的结合选择兔抗体的可变区。通过这种策略，已鉴定具有前所未有的质量和良好的功能特性的hROR1的新抗体。此外，本专利技术提供融合至人IgG1抗体的恒定区结构域的兔可变结构域的嵌合全长抗体。此外，本专利技术提供通过将本文公开的兔抗ROR1抗体CDR移植至可变免疫球蛋白重链和轻链的框架中产生的新的、高亲和力人源化抗体。由于所述人源化抗体与内源、全人抗体的高同源性，这类人源化抗体可以用于人类疾病的疗法。在本专利技术的第二方面，本专利技术提供基于嵌合兔-人和人源化抗人ROR1(hROR1)抗体与超高效蒽环类毒素的位点特异性缀合的抗体药物缀合物(ADC)。位点特异性缀合通过酶促缀合利用分选酶(sortase)实现，基本上如WO2014140317中公开的，其援引加入本文。WO2016102679中已公开了导致在各种体外和体内肿瘤模型中具有前所未有的效力的抗hROR1ADC，其援引加入本文。最后，本专利技术提供嵌合抗原受体(CAR)和用这些CAR工程化的T细胞，即所谓的CAR-T细胞，采用在体外表现出高效力的所述抗hROR1结合结构域。因此，本专利技术涉及抗hROR1抗体、基于抗体的结合蛋白、其抗体片段、抗体药物缀合物(ADC)或者具有与hROR1特异性抗体相同的对hROR1的结合特异性的CAR，其包含免疫球蛋白重链可变区序列和免疫球蛋白轻链可变区序列，分别在(1)SEQIDNO:1和SEQIDNO:14；(2)SEQIDNO:2和SEQIDNO:15；(3)SEQIDNO:3和SEQIDNO:16；(4)SEQIDNO:4和SEQIDNO:17；(5)SEQIDNO:5和SEQIDNO:18；(6)SEQIDNO:6和SEQIDNO:19；(7)SEQIDNO:7和SEQIDNO:20；(8)SEQIDNO:8和SEQIDNO:21；(9)SEQIDNO:9和SEQIDNO:22；(10)SEQIDNO:本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其以与第二抗体相同的结合特异性特异性地结合人受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)的胞外结构域，其中所述第二抗体包含分别在(1)SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:14；(2)SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:15；(3)SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:16；(4)SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:17；(5)SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:18；(6)SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:19；(7)SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:20；(8)SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:21；(9)SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:22；(10)SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:23；(11)SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:24；(12)SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:25；(13)SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:26；(14)SEQ ID NO:130和SEQ ID NO:136；(15)SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:137；(16)SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:138；(17)SEQ ID NO:133和SEQ ID NO:139；(18)SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:140；或者(19)SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:141中示出的重链可变区序列和轻链可变区序列。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.20 US 62/280,8431.一种抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其以与第二抗体相同的结合特异性特异性地结合人受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)的胞外结构域，其中所述第二抗体包含分别在(1)SEQIDNO:1和SEQIDNO:14；(2)SEQIDNO:2和SEQIDNO:15；(3)SEQIDNO:3和SEQIDNO:16；(4)SEQIDNO:4和SEQIDNO:17；(5)SEQIDNO:5和SEQIDNO:18；(6)SEQIDNO:6和SEQIDNO:19；(7)SEQIDNO:7和SEQIDNO:20；(8)SEQIDNO:8和SEQIDNO:21；(9)SEQIDNO:9和SEQIDNO:22；(10)SEQIDNO:10和SEQIDNO:23；(11)SEQIDNO:11和SEQIDNO:24；(12)SEQIDNO:12和SEQIDNO:25；(13)SEQIDNO:13和SEQIDNO:26；(14)SEQIDNO:130和SEQIDNO:136；(15)SEQIDNO:131和SEQIDNO:137；(16)SEQIDNO:132和SEQIDNO:138；(17)SEQIDNO:133和SEQIDNO:139；(18)SEQIDNO:134和SEQIDNO:140；或者(19)SEQIDNO:135和SEQIDNO:141中示出的重链可变区序列和轻链可变区序列。2.权利要求1的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含重链可变区序列和轻链可变区序列，其中之一或两者与分别在(1)SEQIDNO:1和SEQIDNO:14；(2)SEQIDNO:2和SEQIDNO:15；(3)SEQIDNO:3和SEQIDNO:16；(4)SEQIDNO:4和SEQIDNO:17；(5)SEQIDNO:5和SEQIDNO:18；(6)SEQIDNO:6和SEQIDNO:19；(7)SEQIDNO:7和SEQIDNO:20；(8)SEQIDNO:8和SEQIDNO:21；(9)SEQIDNO:9和SEQIDNO:22；(10)SEQIDNO:10和SEQIDNO:23；(11)SEQIDNO:11和SEQIDNO:24；(12)SEQIDNO:12和SEQIDNO:25；(13)SEQIDNO:13和SEQIDNO:26；(14)SEQIDNO:130和SEQIDNO:136；(15)SEQIDNO:131和SEQIDNO:137；(16)SEQIDNO:132和SEQIDNO:138；(17)SEQIDNO:133和SEQIDNO:139；(18)SEQIDNO:134和SEQIDNO:140；或者(19)SEQIDNO:135和SEQIDNO:141中示出的重链可变区序列和轻链可变区序列至少90％或至少95％相同。3.权利要求1的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含重链可变区序列和轻链可变区序列，其中之一或两者与分别在(1)SEQIDNO:1和SEQIDNO:14；(2)SEQIDNO:2和SEQIDNO:15；(3)SEQIDNO:3和SEQIDNO:16；(4)SEQIDNO:4和SEQIDNO:17；(5)SEQIDNO:5和SEQIDNO:18；(6)SEQIDNO:6和SEQIDNO:19；(7)SEQIDNO:7和SEQIDNO:20；(8)SEQIDNO:8和SEQIDNO:21；(9)SEQIDNO:9和SEQIDNO:22；(10)SEQIDNO:10和SEQIDNO:23；(11)SEQIDNO:11和SEQIDNO:24；(12)SEQIDNO:12和SEQIDNO:25；(13)SEQIDNO:13和SEQIDNO:26；(14)SEQIDNO:130和SEQIDNO:136；(15)SEQIDNO:131和SEQIDNO:137；(16)SEQIDNO:132和SEQIDNO:138；(17)SEQIDNO:133和SEQIDNO:139；(18)SEQIDNO:134和SEQIDNO:140；或者(19)SEQIDNO:135和SEQIDNO:141中示出的重链可变区序列和轻链可变区序列相同。4.权利要求1的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含分别在(1)SEQIDNO:1和SEQIDNO:14；(2)SEQIDNO:2和SEQIDNO:15；(3)SEQIDNO:3和SEQIDNO:16；(4)SEQIDNO:4和SEQIDNO:17；(5)SEQIDNO:5和SEQIDNO:18；(6)SEQIDNO:6和SEQIDNO:19；(7)SEQIDNO:7和SEQIDNO:20；(8)SEQIDNO:8和SEQIDNO:21；(9)SEQIDNO:9和SEQIDNO:22；(10)SEQIDNO:10和SEQIDNO:23；(11)SEQIDNO:11和SEQIDNO:24；(12)SEQIDNO:12和SEQIDNO:25；(13)SEQIDNO:13和SEQIDNO:26；(14)SEQIDNO:130和SEQIDNO:136；(15)SEQIDNO:131和SEQIDNO:137；(16)SEQIDNO:132和SEQIDNO:138；(17)SEQIDNO:133和SEQIDNO:139；(18)SEQIDNO:134和SEQIDNO:140；或者(19)SEQIDNO:135和SEQIDNO:141中示出的重链可变区序列或轻链可变区序列。5.权利要求1的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含分别与(1)SEQIDNO:27-29和SEQIDNO:66-68，(2)SEQIDNO:30-32和SEQIDNO:69-71，(3)SEQIDNO:33-35和SEQIDNO:72-74，(4)SEQIDNO:36-38和SEQIDNO:75-77，(5)SEQIDNO:39-41和SEQIDNO:78-80，(6)SEQIDNO:42-44和SEQIDNO:81-83，(7)SEQIDNO:45-47和SEQIDNO:84-86，(8)SEQIDNO:48-50和SEQIDNO:87-89，(9)SEQIDNO:51-53和SEQIDNO:90-92，(10)SEQIDNO:54-56和SEQIDNO:93-95，(11)SEQIDNO:57-59和SEQIDNO:96-98，(12)SEQIDNO:60-62和SEQIDNO:99-101，或者(13)SEQIDNO:63-65和SEQIDNO:102-104至少90％或至少95％相同的重链CDR序列和轻链CDR序列。6.权利要求1的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含选自SEQIDNO:27-65的重链CDR序列。7.权利要求6的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其进一步包含选自SEQIDNO:66-104的轻链CDR序列。8.权利要求6的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含分别与SEQIDNO:27-29、SEQIDNO:30-32、SEQIDNO:33-35、SEQIDNO:36-38、SEQIDNO:39-41、SEQIDNO:42-44、SEQIDNO:45-47、SEQIDNO:48-50、SEQIDNO:51-53、SEQIDNO:54-56、SEQIDNO:57-59、SEQIDNO:60-62或SEQIDNO:63-65相同的重链CDR1、CDR2和CDR3序列。9.权利要求8的抗体、基于抗体的结合蛋白或抗体片段，其包含分别在(1)SEQIDNO:27-29和SEQIDNO:66-68，(2)SEQIDNO:30-32和SEQIDNO:69-71，(3)SEQIDNO:33-35和SEQIDNO:72-74，(4)SEQIDNO:36-38和SEQIDNO:75-77，(5)SEQIDNO:39-41和SEQIDNO:78-80，(6)SEQIDNO:42-44和SEQIDNO:81-83，(7)SEQIDNO:45-47和SEQIDNO:84-86，(8)SEQIDNO:48-50和SEQIDNO:87-89，(9)SEQIDNO:51-53和S...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·拉德，H·彭，R·贝利，L·瓦尔德迈尔，U·格劳乌德，
申请(专利权)人：斯克利普斯研究所，恩比伊治疗股份公司，
类型：发明
国别省市：美国,US