一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术属于体外免疫检测技术领域，具体涉及一种检测样本中髓过氧化物酶（MPO）浓度的试剂盒及其制备方法。所述试剂盒包括包被有抗髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板、髓过氧化物酶系列标准品和质控品、辣根过氧化物酶标记的抗髓过氧化物酶单克隆抗体、样本缓冲液、过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液、四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲溶液、1-2M的硫酸溶液、含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。本发明专利技术由于所用的检测仪器较为简单，均为通常所用仪器，故检测成本较低，利于推广；并且该试剂盒容易操作，不需要专业的人员即可实现；同时试剂盒内独特的标准品稀释液和样本缓冲液配方，大大提高了检测结果的可靠性和准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于体外免疫检测
，具体涉及一种检测样本中髓过氧化物酶（MPO）浓度的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
髓过氧化物酶（MPO）是一种相对分子质量为150KD的白细胞酶，是糖基化的血红素蛋白。MPO来源于多形核中性粒细胞、单核细胞及巨噬细胞,贮存在嗜天青颗粒中,当白细胞被激活及脱颗粒时,MPO被释放到吞噬泡和血浆中。在特定条件下,它能诱导氧化应激和组织损伤,作为系统炎症和氧化应激的标志物，MPO通过多种机制参与冠心病的发生、发展。大量流行病学研究显示MPO浓度的增高与冠心病密切相关，因此检测病人血浆中MPO的浓度对于冠心病患者具有十分重要的参考价值。目前，在市面上检测MPO浓度常用的试剂种类需要配套昂贵的大型仪器，检测成本高，操作繁琐，对实验操作人员的技能要求高，不利于该项目检测的大范围推广。
技术实现思路
针对上述技术的不足之处，本专利技术提供一种操作简便、便于实验人员掌握、涉及实验仪器单一、普及率高、检测成本低、检测结果准确，非常利于大范围推广的髓过氧化物酶（MPO）定量检测试剂盒。一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒，包括包被有抗髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板、髓过氧化物酶系列标准品和质控品、辣根过氧化物酶标记的抗髓过氧化物酶单克隆抗体、样本缓冲液、过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液（称为底物A）、四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲溶液（称为底物B）、1-2M的硫酸溶液（称为终止液）、含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液（称为浓缩洗液）。进一步的，所述微孔板为96孔聚苯乙烯微孔板，里面包被有1-50μg/孔的抗髓过氧化物酶单克隆抗体。进一步的，所述的髓过氧化物酶系列标准品和质控品都是用髓过氧化物酶纯品与自制的标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释而成，所述标准品不少于2个，所述质控品和所述标准品的区别只是浓度不同，所述质控品的作用是在试剂盒使用过程中起到核准校对的作用，即通过质控品测值是否在质控范围内来对标准品拟合出来的曲线进行核准校对，若质控品测值合格，则可以利用标准曲线来拟合出样本中的髓过氧化物酶浓度值。进一步的，所述的标准品稀释液，是在PH7.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10%质量分数的动物血清、0.01-0.5%质量分数的防腐剂、1-10%质量分数的蛋白保护剂、0.05-1%质量分数的表面活性剂混合而成。进一步的，所述样本缓冲液是在PH4.0-5.0、浓度为10-100mM的柠檬酸盐缓冲液中，分别加入0.1-3mM的金属离子络合剂、1-10%质量分数的蛋白保护剂、0.01-1%质量分数的表面活性剂、0.01-0.5%质量分数的防腐剂混合而成。优选的，所述的表面活性剂为曲达通X-100、吐温20、布里杰-35、吐温40、吐温60、吐温80、十二烷基磺酸钠、斯盘20、烷基酚聚氧乙烯4醚、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000。优选的，所述的防腐剂为Proclin300、叠氮钠、硫柳汞、硫酸庆大霉素。优选的，所述的金属离子络合剂为乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸四钠。优选的，所述的蛋白保护剂为牛血清白蛋白、牛γ蛋白、海藻糖、甘油、蔗糖。制备所述试剂盒的方法，包括以下制备过程，所述制备过程不分先后：包被有抗髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板的制备：将特异性的抗髓过氧化物酶单克隆抗体用磷酸盐缓冲液稀释到浓度为1-50μg/ml，分别加入到96孔聚苯乙烯微孔板的凹孔中进行包被；然后用洗板机将微孔板洗三次；再向微孔板凹孔中加入含牛血清白蛋白的封闭液进行封闭；甩去凹孔中的封闭液，烤干，真空袋封装，4℃存放；髓过氧化物酶系列标准品和质控品的制备：用含有动物血清、防腐剂、蛋白保护剂、表面活性剂的磷酸盐缓冲液将髓过氧化物酶纯品配制成标示浓度为0-1000ng/ml的一系列标准品以及80-500ng/ml的质控品；辣根过氧化物酶标记的抗髓过氧化物酶单克隆抗体的制备：将被过碘酸钠氧化好的辣根过氧化物酶与特异性的抗髓过氧化物酶单克隆抗体混合交联，然后用硼氢化钠还原，再透析后即得髓过氧化物酶的酶标抗体；将酶标记物与甘油等体积混合，-20℃保存备用；样本缓冲液的制备：将金属离子络合剂、蛋白保护剂、表面活性剂和防腐剂分别加入到柠檬酸盐缓冲液中，搅拌均匀；底物A的制备：将过氧化氢加入到柠檬酸盐缓冲液中，配制成过氧化氢终浓度为20-50%的柠檬酸盐混合溶液；底物B的制备：将四甲基联苯胺加入到柠檬酸盐缓冲液中，配制成四甲基联苯胺最终浓度为5-20%的柠檬酸盐混合溶液；终止液的制备：将浓硫酸加水稀释；浓缩洗液的制备：把表面活性剂加到磷酸盐缓冲液中，然后混匀。本专利技术由于所用的检测仪器较为简单，均为通常所用仪器，故检测成本较低，利于推广；并且该试剂盒容易操作，不需要专业的人员即可实现；同时试剂盒内独特的标准品稀释液和样本缓冲液配方，大大提高了检测结果的可靠性和准确性。附图说明图1为实施例2标准曲线图。图2为实施例3标准曲线图。图3为实施例4标准曲线图。图4为实施例5标准曲线图。图5为实施例6标准曲线图。图6为实施例7标准曲线图。图7为实施例8标准曲线图。图8为实施例9标准曲线图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步详细说明。实施例1:一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒，包括包被有抗髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板、髓过氧化物酶系列标准品和质控品、辣根过氧化物酶标记的抗髓过氧化物酶单克隆抗体、样本缓冲液、过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液（称为底物A）、四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲溶液（称为底物B）、1-2M的硫酸溶液（称为终止液）、含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液（称为浓缩洗液）。进一步的，所述微孔板为96孔聚苯乙烯微孔板，里面包被有1-50μg/孔的抗髓过氧化物酶单克隆抗体。进一步的，所述的髓过氧化物酶系列标准品和质控品都是用髓过氧化物酶纯品与自制的标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释而成，所述标准品不少于2个，所述质控品和所述标准品的区别只是浓度不同，所述质控品的作用是在试剂盒使用过程中起到核准校对的作用，即通过质控品测值是否在质控范围内来对标准品拟合出来的曲线进行核准校对，若质控品测值合格，则可以利用标准曲线来拟合出样本中的髓过氧化物酶浓度值。进一步的，所述的标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒，其特征在于：包括包被有抗髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板、髓过氧化物酶系列标准品和质控品、辣根过氧化物酶标记的抗髓过氧化物酶单克隆抗体、样本缓冲液、过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液、四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲溶液、1‑2M的硫酸溶液、含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒，其特征在于：包括
包被有抗髓过氧化物酶单克隆抗体的微孔板、髓过氧化物酶系列标准品
和质控品、辣根过氧化物酶标记的抗髓过氧化物酶单克隆抗体、样本缓
冲液、过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液、四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲溶液、
1-2M的硫酸溶液、含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述微孔板为96
孔聚苯乙烯微孔板，里面包被有1-50μg/孔的抗髓过氧化物酶单克隆抗
体。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的髓过氧化物
酶系列标准品和质控品都是用髓过氧化物酶纯品与自制的标准品稀释液
按照1:200000-1:1000稀释而成。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的标准品稀释
液，是在PH7.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10%
质量分数的动物血清、0.01-0.5%质量分数的防腐剂、1-10%质量分数的
蛋白保护剂、0.05-1%质量分数的表面活性剂混合而成。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述样本缓冲液是
在PH4.0-5.0、浓度为10-100mM的柠檬酸缓冲液中，分别加入0.1-3mM
的金属离子络合剂、1-10%质量分数的蛋白保护剂、0.01-1%质量分数的
表面活性剂、0.01-0.5%质量分数的防腐剂混合而成。
6.根据上述任意一项权利要求所述的试剂盒，其特征在于：所述的
表面活性剂为曲达通X-100、吐温20、布里杰-35、吐温40、吐温60、
吐温80、十二烷基磺酸钠、斯盘20、烷基酚聚氧乙烯4醚、聚乙二醇
2000、聚乙二醇4000。
7.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂
为Proclin300、叠氮钠、硫柳汞、硫酸庆大霉素。
8.根据权利要求4或5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑乐民，王晓华，吴建榕，
申请(专利权)人：北京协和洛克生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11