一种基于核酸适配体的循环聚合免标记荧光检测PD-1的方法技术

一种基于核酸适配体的循环聚合免标记荧光检测PD‑1的方法。本发明专利技术涉及一种信号放大技术荧光光谱传感器的构建和应用。将自行设计的DNA单链与程序性死亡受体（PD‑1）核酸适体互补杂交，加入待测物质PD‑1后，由于其与核酸适体间的结合力大于DNA双螺旋的配位能力，导致DNA双链解旋。释放出来的DNA单链在各种工具酶作用下循环扩增，级联信号放大。扩增产物通过构象改变引发荧光信号，实现PD‑1的高灵敏度高选择性核酸光学传感检测。依靠这种方法，PD‑1的检测限可以达到0.3 ng/mL，可满足于血清等生物样品中PD‑1的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于核酸适配体的循环聚合免标记荧光检测PD-1的方法
本专利技术属于分析化学和生物传感检测领域，涉及一种信号放大技术荧光光谱传感器的构建和应用。另外，本专利技术还涉及采用所述的荧光光谱传感器检测程序性死亡受体（PD-1）的方法。
技术介绍
程序性死亡受体（programmedcelldeath-1,PD-1）是一种主要表达在T细胞上的共受体，与其配体（PD-L1/PD-L2）结合能够抑制T细胞的活化，使机体免受自身免疫系统的攻击（TumehP.C.,HarviewC.L.,YearleyJ.H.,etal.Nature,2014,515:568-571）。除了调节并维持自身免疫耐受，在肿瘤细胞中PD-L1的表达上调，而在被病毒感染的T细胞中PD-1的表达也会上调，PD-1/PD-L1信号通路参与了肿瘤细胞及传染性病原体的免疫逃逸，因此阻断PD-1/PD-L1信号通路已成为肿瘤和慢性传染病研究的热点。但当人们庆祝这些前所未有的治疗进展时，癌症专家却逐渐意识到这种强大的新疗法的局限性。近期研究结果表明，PD-1抑制剂治疗肿瘤的疗效取决于肿瘤细胞是否表达PD-1，对于低表达甚至不表达P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于核酸适配体的循环聚合免标记检测PD‑1的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）探针DNA1与核酸适体的选取与杂交；2） PD‑1置换探针DNA1，探针DNA1开始沿着模版DNA2聚合，加入nicking酶切割聚合出来的DNA3；3）加入发卡DNA模版4、聚合酶、dNTPS后，DNA3沿着模版4开始聚合，加入nicking酶将聚合出来的DNA5切割下来；4）DNA5不仅可以做为引物重新沿着模版1的聚合，本身可以作为信号输出，加入锌原卟啉IX（ZnPPIX）后产生荧光，完成信号检测。

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适配体的循环聚合免标记检测PD-1的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）探针DNA1与核酸适体的选取与杂交；2）PD-1置换探针DNA1，探针DNA1开始沿着模版DNA2聚合，加入nicking酶切割聚合出来的DNA3；3）加入发卡DNA模版4、聚合酶、dNTPS后，DNA3沿着模版4开始聚合，加入nicking酶将聚合出来的DNA5切割下来；4）DNA5不仅可以做为引物重新沿着模版1的聚合，本身可以作为信号输出，加入锌原卟啉IX（ZnPPIX）后产生荧光，完成信号检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的具体步骤如下：取1μMPD-1适体链10μL同10μL2μM探针DNA1反应25min后，加入不同浓度PD-1标准品，补加Tris-HCl缓冲液至250μL，5μL5μM模板DNA2、聚合酶、dNTPS后加入nicking酶反应7h。3.随后加入5μL5μM的发卡链DNA4、聚合酶、dNTPS和nicking酶反应5h，加入锌原卟啉IX（ZnPPIX）后产...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜廷福，吕爽，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东,37