一种化合物用作抗体上糖基的封闭试剂的应用制造技术

本发明专利技术涉及到蛋白质糖基的检测，尤其涉及到一种化合物用作抗体上糖基的封闭试剂的应用。为了解决目前抗体本身的糖基对于检测的干扰的问题，本发明专利技术提供一种用作抗体上糖基的封闭试剂的化合物，所述化合物选自α‑氨基脲、乙酰肼、硫乙酰肼、氨基硫脲、天冬酰胺酰肼、酪氨酸肼、N(苄氧基羰基)‑L‑缬氨酰‑L‑酪氨酸酰肼、或N(苄氧基羰基)甘氨酸酰肼中的一种。用所述化合物对抗体进行预处理，可以避免植物凝集素结合到抗体上，从而使对于被捕获的蛋白上的糖基进行精确的定量，且封闭抗体的过程简单，为一步反应，缩短了现有封闭抗体的反应过程，且降低成本非常明显。

【技术实现步骤摘要】
一种化合物用作抗体上糖基的封闭试剂的应用
本专利技术涉及到蛋白质糖基的检测，尤其涉及到一种化合物用作抗体上糖基的封闭试剂的应用。
技术介绍
利用分子标志物对疾病进行早期诊断可显著降低疾病导致的死亡。蛋白的糖基化是最普遍的蛋白质翻译后修饰。这些修饰对蛋白质的物理、化学和生物性质都发挥重要作用；同时对各种生物过程，包括发育、细胞分化、受精、细胞免疫识别，宿主病原体相互作用，细胞间信号转导都发挥着非常重要的作用。由于糖基对于环境特别敏感。因此，检测异常糖基可以作为一种诊断疾病的一个特异的生物标志物，可以用于对于疾病的早期诊断。事实上，目前很多临床上常用的用于诊断的生物标志物就是蛋白质的糖基，比如CA19-9,CA125,和CA15-3等等。检测蛋白质糖基的一个简单低成本的方式是用一种酶联免疫分析的方法进行：首先用抗体捕获特异性的蛋白，然后利用特异性的植物凝集素检测蛋白质上的糖基的变化。但是，由于抗体本身具有糖基，会对于检测结果有较大的干扰。
技术实现思路
为了解决目前抗体本身的糖基对于检测的干扰的问题，本专利技术提供一种化合物用作抗体上糖基的封闭试剂的应用，用此化合物对抗体进行预处理，这些化合物可以有效的和被高碘酸钠氧化的抗体上的糖基上的醛基反应，封闭糖基，避免植物凝集素结合到抗体上，从而使对于被捕获的蛋白上的糖基进行精确的定量。为了解决上述技术问题，本专利技术采用下述技术方案：本专利技术提供一种化合物的应用，所述化合物用作抗体的糖基的封闭试剂，所述化合物的通用结构式为：其中，X选自O，N，或S；Y选自C，N，S，苄基环，氨基酸(谷氨酸除外)，或多肽的侧链基团。进一步的，X选自O＝，NH＝，或S＝；Y选自－C≡，－N＝，－S－，苄基环，氨基酸(谷氨酸除外)，或多肽的侧链基团。进一步的，Y选自CHR2，CH2R，CH3，NHR，或NH2。进一步的，Y选自CH3，或NH2。进一步的，X选自O，N，或S，其中吸电子能力从O，N，S，越来越弱，使酰肼基团与醛基的反应性越来越强。进一步的，Y选自C，N，S，苄基环，氨基酸(谷氨酸除外)的侧链基团，或多肽的侧链基团，这些基团的推电子能力依次增强，使酰肼基团的反应能力也依次增强。进一步的，所述X选自O、或S，Y选自甲基、氨基、或氨基酸的侧链基团。所述的化合物选自α-氨基脲、乙酰肼、硫乙酰肼、氨基硫脲、天冬酰胺酰肼、酪氨酸肼、N(苄氧基羰基)-L-缬氨酰-L-酪氨酸酰肼、或N(苄氧基羰基)甘氨酸酰肼中的一种。进一步的，所述化合物的化学结构式如下：(a)α-氨基脲；(b)乙酰肼；(c)硫乙酰肼；(d)氨基硫脲；(e)天冬酰胺酰肼；(f)酪氨酸肼；(g)N(苄氧基羰基)-L-缬氨酰-L-酪氨酸酰肼；(h)N(苄氧基羰基)甘氨酸酰肼。进一步的，所述Y是氨基酸的侧链基团或甲基，乙基等取代基团，或者是氨基。进一步的，所述Y是氨基酸的侧链基团或甲基，乙基等取代基团，或者是氨基，可以增加酰肼与醛基的反应性。进一步的，所述的化合物硫乙酰肼、氨基硫脲具有较高的反应活性，但对人体的毒性很大，在操作过程中需要更加小心。一种使用所述的化合物封闭抗体的糖基的方法，所述方法包括下述步骤：(1)用高碘酸钠将抗体上的糖基上的羟基氧化成醛基；(2)使化合物中的酰肼基与(1)中的醛基反应。进一步的，醛基非常容易和酰肼基团上的氨基发生shiffbase反应。进一步的，当抗体上糖基的羟基被高碘酸钠氧化成醛基后，使用本专利技术中的化合物可以快速封闭抗体上的糖基。进一步的，本专利技术提供的化合物封闭糖基的反应是一步反应，并且本专利技术提供的化合物的成本更低。一种用于检测样品中蛋白上的糖基的抗体芯片，所述抗体芯片或者微孔板上包被抗体，所述抗体采用(a)-(h)中任一项所述的化合物封闭糖基。进一步的，所述抗体芯片也可称为微孔板、或多孔板。进一步的，包被抗体后的抗体芯片或者微孔板在低温(例如4-8℃)储存。一种试剂盒，所述试剂盒包括用于检测样品中蛋白上的糖基的抗体芯片或者微孔板。进一步的，所述试剂盒还包括植物凝集素。进一步的，所述植物凝集素选自重组植物凝集素AAL(检测海藻糖)、野生植物凝集素AAL(检测海藻糖)、植物凝集素RCA120(检测葡萄糖酰胺)、或植物凝集素SNA(检测唾液酸)中的一种。一种抗体芯片的制备方法，所述方法包括：(1)将抗体(根据不同的抗体每个微孔0.1到10微克抗体)包被到抗体芯片或者微孔板的表面，加入50-250毫摩尔的高碘酸钠，再加入5-50毫摩尔pH5.0-8.0醋酸钠缓冲液，在冰上2到8℃反应1-3小时，或室温反应0.2-1.0小时；(2)加入封闭试剂，在室温下用相同的缓冲液孵育0.5-1.5小时；(3)用小牛血清白蛋白封闭抗体芯片或者微孔板或者抗体芯片的表面0.5-1.5小时。一种使用上述的试剂盒检测样品中蛋白上的糖基的方法，所述方法包括下述步骤：(1)将要检测的血清或者其它待检测溶液在已经封闭的抗体芯片或者微孔板或者抗体芯片上孵育0.5-1.5小时；(2)在室温下，加入生物素标记的植物凝集素，孵育0.5-1.5小时；(3)在室温下，加入荧光染料标记的链霉亲和素，孵育0.5-1.5小时，用荧光染料检测结合的植物凝集素的量。进一步的，所述的抗体芯片的制备方法，所述方法包括：(1)将抗体包被到微孔板的表面，加入150毫摩尔的高碘酸钠，加入20毫摩尔pH7.0醋酸钠缓冲液，在冰上4℃反应2小时，或室温0.5小时；(2)加入封闭试剂，在室温下用相同的缓冲液孵育1小时；(3)用小牛血清白蛋白封闭微孔板或者生物芯片的表面1小时。进一步的，所述的试剂盒检测样品中蛋白上的糖基的方法，所述方法包括下述步骤：(1)将要检测的血清或者其它待检测溶液在已经封闭的微孔板或者生物芯片上孵育1小时；(2)在室温下，加入生物素标记的植物凝集素，孵育1小时；(3)在室温下，加入Cy3标记的链霉亲和素，孵育1小时，用Cy3荧光染料检测结合的植物凝集素的量。进一步的，本专利技术对所有化合物进行测试。这些化合物可以有效的和被高碘酸钠氧化的抗体上的糖反应，并且有效的抑制了植物凝集素和抗体本身的结合。同时，由于反应条件温和，封闭后的抗体仍然保持了原有的对抗原的识别的特异性。利用本专利技术中的化合物封闭抗体上的糖基，有下述优点：背景干净。化合物的反应性可靠。用化合物封闭抗体的过程简单，为一步反应，缩短了现有封闭抗体的反应过程，由现有的2天缩短到本专利技术的1天之内完成封闭反应，提高了生产效率。降低成本非常明显，和以前的封闭试剂和封闭方法相比，试剂的成本也便宜，成本减少500倍。利用本专利技术的化合物封闭后的抗体保留了很好的活性，能进行精确的检测分析。附图说明图1为使用本专利技术的化合物作为封闭试剂，利用抗体芯片或者微孔板上进行酶联免疫反应和植物凝集素对特异蛋白上的糖基进行检测的过程示意图；图2为实施例1-6提供的抗体芯片上的每个子区域的抗体位置图谱；图3为实施例1-2提供的抗体芯片的检测结果；图4为实施例3提供的抗体芯片的检测结果；图5为实施例5提供的抗体芯片的检测结果；图6为实施例6提供的抗体芯片的检测结果；图7为本专利技术所述化合物的通式结构。具体实施方式：下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步的阐述，以下实施例只是对本专利技术的详细说明，不是对本专利技术所请求保护范围的限定。所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种化合物，其特征在于，所述化合物用作抗体的糖基的封闭试剂，所述化合物的通用结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种化合物，其特征在于，所述化合物用作抗体的糖基的封闭试剂，所述化合物的通用结构式为：其中，X选自O，N，或S；Y选自C，N，S，苄基环，氨基酸(谷氨酸除外)，或多肽的侧链基团。2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自α-氨基脲、乙酰肼、硫乙酰肼、氨基硫脲、天冬酰胺酰肼、酪氨酸肼、N(苄氧基羰基)-L-缬氨酰-L-酪氨酸酰肼、或N(苄氧基羰基)甘氨酸酰肼中的一种。3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述Y是氨基酸的侧链基团、甲基、乙基、或氨基。4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述X选自O、或S，Y选自甲基、氨基、或氨基酸的侧链基团。5.一种使用权利要求1所述的化合物封闭抗体的糖基的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：(1)用高碘酸钠将抗体上的糖基上的羟基氧化成醛基；(2)使化合物中的酰肼基与(1)中的醛基反应。6.一种用于检测样品中蛋白上的糖基的抗体芯片，其特征在于，所述抗体芯片或者微孔板上包被抗体，所述抗体采用权利要求1-4中任一项所述的化合物封闭糖基。7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈松明，
申请(专利权)人：嵊州宝康医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33