多价和多特异性41BB结合融合蛋白制造技术

本发明专利技术大体上涉及特异性接合41BB的分子，所述41BB是TNF受体超家族(TNFRSF)的成员。更具体地说，本发明专利技术涉及结合至少41BB的多价和多特异性分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多价和多特异性41BB结合融合蛋白相关申请本申请要求2016年1月11日提交的美国临时申请号62/277,028的权益；其各自的内容以引用的方式整体并入本文。专利
本专利技术大体上涉及特异性接合41BB的分子，所述41BB是TNF受体超家族(TNFRSF)的成员。更具体地说，本专利技术涉及结合至少41BB的多价和/或多特异性分子。专利技术背景肿瘤坏死因子受体超家族由几种结构相关的细胞表面受体组成。被多聚体配体激活是这些受体中的许多受体的共同特征。如果被适当激活的话，TNFRSF的许多成员在许多病变中具有治疗效用。这种受体家族的激动常常需要更高级的聚簇，并且常规的二价抗体对于该目的来说并不理想。因此，存在对TNFRSF的更强效的激动剂分子的治疗需求。专利技术概述本公开提供了多价和多特异性TNF受体超家族(TNFRSF)结合融合多肽，所述多肽结合至少41BB(也被称为肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF9)和/或CD137))。术语“41BB”的使用意图涵盖其任何变化形式，如作为非限制性实例，41-BB和/或4-1BB，并且所有变化形式在本文可互换使用。这些结合至少41BB的分子在本文被称为“41BB靶向分子”或“41BB靶向融合体”或“41BB靶向蛋白”或“41BB靶向融合多肽”或“41BB靶向融合蛋白”。在一些实施方案中，所述41BB靶向分子是多价分子，例如多价41BB靶向融合蛋白。在一些实施方案中，所述41BB靶向分子是多特异性分子，例如多特异性41BB靶向融合蛋白。在一些实施方案中，所述41BB靶向分子是多价和多特异性分子，例如多价和多特异性41BB靶向融合蛋白。除非另外具体指明，否则如本文所用的术语“融合蛋白”或“融合多肽”或“41BB靶向融合蛋白”或“41BB靶向融合多肽”指的是本公开的任何融合蛋白实施方案，包括但不限于多价融合蛋白、多特异性融合蛋白或多价和多特异性融合蛋白。本公开还提供了结合至少程序性死亡配体1(PDL1)的多价和多特异性融合多肽，所述程序性死亡配体1也被称为PD-L1、CD274、B7同源物1和/或B7-H1。术语“PDL1”的使用意图涵盖其任何变化形式，如作为非限制性实例，PD-L1和/或PDL-1，所有变化形式在本文可互换使用。这些结合至少PDL1的分子在本文被称为“PDL1靶向分子”或“PDL1靶向融合体”或“PDL1靶向蛋白”或“PDL1靶向融合多肽”或“PDL1靶向融合蛋白”。在一些实施方案中，所述PDL1靶向分子是多价分子，例如多价PDL1靶向融合蛋白。在一些实施方案中，所述PDL1靶向分子是多特异性分子，例如多特异性PDL1靶向融合蛋白。在一些实施方案中，所述PDL1靶向分子是多价和多特异性分子，例如多价和多特异性PDL1靶向融合蛋白。除非另外具体指明，否则如本文所用的术语“融合蛋白”或“融合多肽”或“PDL1靶向融合蛋白”或“PDL1靶向融合多肽”指的是本公开的任何融合蛋白实施方案，包括但不限于多价融合蛋白、多特异性融合蛋白或多价和多特异性融合蛋白。本公开还提供了结合至少PDL1和41BB的多价和多特异性融合多肽。这些结合至少PDL1的分子在本文被称为“PDL1x41BB靶向分子”或“PDL1x41BB靶向融合体”或“PDL1x41BB靶向蛋白”或“PDL1x41BB靶向融合多肽”或“PDL1x41BB靶向融合蛋白”。在一些实施方案中，所述PDL1x41BB靶向分子是多价分子，例如多价PDL1x41BB靶向融合蛋白。在一些实施方案中，所述PDL1x41BB靶向分子是多特异性分子，例如多特异性PDL1x41BB靶向融合蛋白。在一些实施方案中，所述PDL1x41BB靶向分子是多价和多特异性分子，例如多价和多特异性PDL1靶向融合蛋白。除非另外具体指明，否则如本文所用的术语“融合蛋白”或“融合多肽”或“PDL1x41BB靶向融合蛋白”或“PDL1x41BB靶向融合多肽”指的是本公开的任何融合蛋白实施方案，包括但不限于多价融合蛋白、多特异性融合蛋白或多价和多特异性融合蛋白。在一些实施方案中，所述多价和/或多特异性融合蛋白结合至少41BB。靶向TNF受体超家族(TNFRSF)的成员的常规抗体已经被证实需要外源性交联来实现足够的激动剂活性，如由Fcγ受体(FcγR)对于针对DR4、DR5、GITR以及OX40的抗体的活性的必要性所证实(Ichikawa等人,2001alNat.Med.7,954-960；Li等人,2008DrugDev.Res.69,69-82；Pukac等人,2005Br.J.Cancer92,1430-1441；Yanda等人,2008Ann.Oncol.19,1060-1067；Yang等人,2007CancerLett.251:146-157；Bulliard等人,2013JEM210(9):1685；Bulliard等人,2014ImmunolandCellBiol92:475-480)。除了经由FcγR进行交联之外，包括低聚配体或抗体结合实体(例如蛋白A和二级抗体)的添加的其它外源性试剂也已经被证实增强了抗TNFRSF抗体聚簇和下游信号转导。举例来说，DR5配体TRAIL的添加增强了抗DR5抗体的细胞凋亡诱导能力(Graves等人,2014CancerCell26:177-189)。这些发现表明了需要超出二聚体的TNFRSF聚簇。本公开提供了多价TNFRSF结合融合蛋白，所述融合蛋白包含2个或更多个TNFRSF结合结构域(TBD)，其中至少一个TBD结合41BB。在一些实施方案中，本公开的融合蛋白具有治疗赘生物的效用。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有两个或更多个不同的TBD，其中每一个TBD都结合41BB。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的多个拷贝。举例来说，在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的至少两个拷贝。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的至少三个拷贝。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的至少四个拷贝。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的至少五个拷贝。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的至少六个拷贝。在一些实施方案中，所述融合蛋白含有结合41BB的TBD的六个或更多个拷贝。在其它实施方案中，本公开的融合蛋白结合41BB和第二TNFRSF成员，例如GITR、OX40、CD27、TNFR2和/或CD40。在这些实施方案中，本公开的融合蛋白调节免疫细胞，从而引起增强的肿瘤破坏。在其它实施方案中，本公开的融合蛋白具有治疗炎性病状的效用。在这些实施方案中，本公开的融合蛋白调节免疫细胞，从而引起对炎性损伤的抑制。举例来说，特异性激动TNFR2可以增强Treg增殖，从而引起免疫抑制。与非交联的二价抗体相比，本公开的融合蛋白能够增强TNFRSF成员的聚簇。与非交联的二价抗体相比，由本公开的融合蛋白介导的增强的TNFRSF成员聚簇诱导增强的TNFRSF依赖性信号转导。在大部分的实施方案中，所述融合蛋白将包含多于2个TBD，例如三个、四个、五个或六个。在一些实施方案中，所述融合蛋白是多特异性的，含有TBD和针对第二抗原的结合结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的多肽，所述分离的多肽结合41BB并且包含多个肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)结合结构域(TBD)，其中至少第一TBD(TBD1)结合41BB。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.11 US 62/277,0281.一种分离的多肽，所述分离的多肽结合41BB并且包含多个肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)结合结构域(TBD)，其中至少第一TBD(TBD1)结合41BB。2.一种分离的多肽，所述分离的多肽结合PDL1并且包含多个多肽结合结构域(BD)，其中至少第一BD(BD1)结合PDL1。3.一种分离的多肽，所述分离的多肽结合PDL1和41BB并且包含多个多肽结合结构域(BD)和多个肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)结合结构域(TBD)，其中至少第一结合结构域(BD1)结合PLD1并且至少第一TNFRSF结合结构域(TBD1)结合41BB。4.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述分离的多肽是单特异性的。5.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述分离的多肽是多特异性的。6.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述分离的多肽是双特异性的。7.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽包含结合第二TNFRSF成员的至少第二TBD(TBD2)。8.如权利要求1所述的分离的多肽，其中所述多个TBD中的每一个TBD结合41BB。9.如权利要求8所述的分离的多肽，其中所述多个TBD结合41BB上的相同表位。10.如权利要求8所述的分离的多肽，其中所述多个TBD中的至少两个TBD结合41BB上的不同表位。11.如权利要求8至10中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个TBD包括至少四个TBD。12.如权利要求8至10中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个TBD包括至少六个TBD。13.如权利要求2所述的分离的多肽，其中所述多肽包含结合第二抗原的至少第二BD(BD2)。14.如权利要求2所述的分离的多肽，其中所述多个BD中的每一个BD结合PDL1。15.如权利要求14所述的分离的多肽，其中所述多个BD结合PDL1上的相同表位。16.如权利要求14所述的分离的多肽，其中所述多个BD中的至少两个BD结合PDL1上的不同表位。17.如权利要求13至16中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个BD包括至少四个BD。18.如权利要求13至16中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个BD包括至少六个BD。19.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个TBD中的每一个所述TBD或所述多个BD中的每一个所述BD经由接头多肽可操作地连接。20.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含结合靶标的至少一个结合结构域，前提是所述靶标不是TNFRSF成员。21.如权利要求1所述的分离的多肽，其中所述多个TBD中的至少一个所述TBD结合选自OX40、DR5、GITR和41BB的第二TNFRSF成员。22.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含异二聚化结构域。23.如权利要求1至3中任一项所述的分离的多肽，其中所述分离的多肽包括免疫球蛋白Fc区多肽。24.如权利要求23所述的分离的多肽，其中所述免疫球蛋白Fc区多肽包含选自SEQIDNO:1-6的氨基酸序列。25.如权利要求1至24中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个TBD中的至少一个TBD或所述多个BD中的至少一个BD组成抗体或其抗原结合片段。26.如权利要求1至24中任一项所述的分离的多肽，其中所述多个TBD中的每一个TBD或所述多个BD中的每一个BD组成抗体或其抗原结合片段。27.如权利要求25或权利要求26所述的分离的多肽，其中所述抗体或其抗原结合片段是scFv、Fab、单结构域抗体(sdAb)、VNAR或VHH。28.如权利要求25或权利要求26所述的分离的多肽，其中所述抗体或抗原结合片段是sdAb。29.如权利要求28所述的分离的多肽，其中所述sdAb是人或人源化sdAb。30.如权利要求28所述的分离的多肽，其中所述sdAb是VHH、VNAR、工程改造的VH结构域或工程改造的VK结构域。31.如权利要求30所述的分离的多肽，其中所述sdAb是由软骨鱼仅有重链的抗体产生的。32.如前述权利要求中任一项所述的分离的多肽，其中所述结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·P·埃克尔曼，J·C·蒂默，C·哈特，K·S·琼斯，A·侯赛因，A·S·雷札伊，B·贝克兰德，R·潘迪特，M·卡普兰，L·罗森，Q·狄弗洛，
申请(专利权)人：印希比股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US