包含修饰的IL-2多肽的多肽及其用途制造技术

本文提供了包含修饰的IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含修饰的IL
‑
2多肽的多肽及其用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2019年1月7日提交的美国临时申请号62/789,075的优先权权益，将所述临时申请出于任何目的通过引用以其整体并入本文。


[0002]本专利技术涉及具有降低的对CD25和CD122的亲和力的修饰的IL
‑
2以及与靶向部分融合的这种修饰的IL
‑
2。本专利技术还涉及使用修饰的IL
‑
2和包含修饰的IL
‑
2的多肽的方法，包括但不限于治疗癌症的方法。

技术介绍

[0003]IL
‑
2是一种有力的细胞因子，可通过由CD25、CD122和CD132构成的异三聚体IL
‑
2受体(IL
‑
2R)或仅由CD122和CD132构成的异二聚体IL
‑
2受体刺激T和NK细胞增殖。两种形式的IL
‑
2R都是T细胞存活、增殖和整体激活状态的有力介导物。IL
‑
2通常由T细胞和NK细胞在激活后产生，并在局部微环境中以顺式和反式介导信号传导。IL
‑
2R信号传导可以诱导幼稚T细胞分化为效应T细胞和记忆T细胞，并且还可以刺激抑制性调节性T细胞。尽管三聚体形式的IL
‑
2R对IL
‑
2的亲和力高于二聚体形式，但两者都具有相当高的亲和力并导致受体介导的快速内化和降解，从而导致极短的半衰期。重组人ILr/>‑
2(rhIL
‑
2，阿地白介素(Proleukin))在临床上用于治疗肾细胞癌和恶性黑色素瘤；然而，它关联严重的毒性。由于IL
‑
2信号传导对表达高亲和力IL
‑
2R的内皮细胞的效应，血管渗漏综合征是接受阿地白介素治疗的癌症患者的主要毒性问题。
[0004]T细胞通过其TCR与呈递结合了互补肽的MHC的相邻细胞的连接而被激活，从而导致TCR复合物聚集并通过NFAT传导信号。通过CD28对T细胞的共刺激由CD80和CD86驱动，从而增强T细胞激活。在初始激活后，T细胞上调多种蛋白质，包括细胞因子受体以及许多用于调节T细胞应答的共刺激和检查点受体。
[0005]最近报道了针对检查点受体(如CTLA
‑
4、PD
‑
1和PD
‑
L1)的拮抗剂抗体具有持久的抗肿瘤临床反应。然而，即使在最具反应性的适应症中，反应率也仅限于约30％的患者。因此，需要改进的T细胞调节疗法。

技术实现思路

[0006]本文提供了包含修饰的IL
‑
2的多肽，所述修饰的IL
‑
2在至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。在一些实施方案中，相对于野生型IL
‑
2，所述修饰的IL
‑
2具有降低的对CD25、CD122和/或IL
‑
2R的结合亲和力。在一些实施方案中，相对于野生型IL
‑
2，所述修饰的IL
‑
2具有降低的对静息或激活T细胞的活性。实施方案1.一种包含修饰的IL
‑
2的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在选自P65、D84、E95、M23和H16的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。实施方案2.根据实施方案1所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2是修饰的人IL
‑
2。
实施方案3.根据实施方案1或实施方案2所述的多肽，其中所述氨基酸位置对应于SEQ ID NO:1中的氨基酸位置。实施方案4.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置P65处包含取代。实施方案5.根据实施方案4所述的多肽，其中所述取代选自P65R、P65E、P65K、P65H、P65Y、P65Q、P65D和P65N。实施方案6.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置H16处包含取代。实施方案7.根据实施方案6所述的多肽，其中所述取代选自H16A、H16G、H16S、H16T、H16V和H16P。实施方案8.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置D84处包含取代。实施方案9.根据实施方案8所述的多肽，其中所述取代选自D84S、D84G、D84A、D84T、D84V和D84P。实施方案10.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置P65、H16和D84处包含取代。实施方案11.根据实施方案10所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A和D84S。实施方案12.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置M23处包含取代。实施方案13.根据实施方案12所述的多肽，其中所述取代选自M23A、M23G、M23S、M23T、M23V和M23P。实施方案14.根据实施方案13所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A、D84S和M23A。实施方案15.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置E95处包含取代。实施方案16.根据实施方案15所述的多肽，其中所述取代选自E95Q、E95G、E95S、E95T、E95V、E95P、E95H和E95N。实施方案17.根据实施方案16所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A、D84S和E95Q。实施方案18.根据实施方案17所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A、D84S、M23A和E95Q。实施方案19.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置F42处包含取代。实施方案20.根据实施方案19所述的多肽，其中所述在F42处的取代选自F42K、F42A、F42R、F42A、F42G、F42S和F42T。实施方案21.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在选自Y45和L72的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。实施方案22.根据实施方案21所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含至少一个选
自Y45A和L72G的取代。实施方案23.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在选自T3和C125的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。实施方案24.根据实施方案23所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含至少一个选自T3A和C125A的取代。实施方案25.根据前述实施方案中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含修饰的IL
‑
2的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在选自P65、D84、E95、M23和H16的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2是修饰的人IL
‑
2。3.根据权利要求1或权利要求2所述的多肽，其中所述氨基酸位置对应于SEQ ID NO:1中的氨基酸位置。4.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置P65处包含取代。5.根据权利要求4所述的多肽，其中所述取代选自P65R、P65E、P65K、P65H、P65Y、P65Q、P65D和P65N。6.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置H16处包含取代。7.根据权利要求6所述的多肽，其中所述取代选自H16A、H16G、H16S、H16T、H16V和H16P。8.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置D84处包含取代。9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述取代选自D84S、D84G、D84A、D84T、D84V和D84P。10.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置P65、H16和D84处包含取代。11.根据权利要求10所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A和D84S。12.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置M23处包含取代。13.根据权利要求12所述的多肽，其中所述取代选自M23A、M23G、M23S、M23T、M23V和M23P。14.根据权利要求13所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A、D84S和M23A。15.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置E95处包含取代。16.根据权利要求15所述的多肽，其中所述取代选自E95Q、E95G、E95S、E95T、E95V、E95P、E95H和E95N。17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A、D84S和E95Q。18.根据权利要求17所述的多肽，其中其中所述修饰的IL
‑
2包含取代P65R、H16A、D84S、M23A和E95Q。19.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在氨基酸位置F42处包含取代。20.根据权利要求19所述的多肽，其中所述在F42处的取代选自F42K、F42A、F42R、F42A、F42G、F42S和F42T。21.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在选自Y45和L72的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。22.根据权利要求21所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含至少一个选自Y45A和L72G
的取代。23.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2在选自T3和C125的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。24.根据权利要求23所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含至少一个选自T3A和C125A的取代。25.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含选自以下的取代集：H16A
‑
F42K；D84S
‑
F42K；E15S
‑
F42K；M23A
‑
F42K；E95Q
‑
F42K；P65R
‑
H16A；P65R
‑
D84S；P65R
‑
E15S；P65R
‑
M23A；P65R
‑
E95Q；T3A
‑
C125S；T3A
‑
P65R
‑
C125S；T3A
‑
H16A
‑
C125S；T3A
‑
D84S
‑
C125S；T3A
‑
H16A
‑
P65R
‑
C125S；T3A
‑
P65R
‑
D84S
‑
C125S；T3A
‑
H16A
‑
P65R
‑
D84S
‑
C125S；T3A
‑
H16A
‑
M23A
‑
P65R
‑
D84S
‑
C125S；T3A
‑
H16A
‑
P65R
‑
D84S
‑
E95Q
‑
C125S以及T3A
‑
H16A
‑
M23A
‑
P65R
‑
D84S
‑
E95Q
‑
C125S。26.根据权利要求25所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含所述取代集，并且不包含任何另外的取代。27.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含与SEQ ID NO:84至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。28.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含与选自SEQ ID NO:3
‑
9、11
‑
21和23
‑
31的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。29.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2包含选自SEQ ID NO:3
‑
9、11
‑
21和23
‑
31的氨基酸序列。30.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含Fc区。31.根据权利要求30所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2与所述Fc区的N端或C端融合。32.根据权利要求30或权利要求31所述的多肽，其中所述Fc区在Kabat氨基酸位置T366处包含取代。33.根据权利要求32所述的多肽，其中所述Fc区包含T366W取代。34.根据权利要求31所述的多肽，其中所述Fc区在至少一个选自T366、L368和Y407的Kabat氨基酸位置处包含至少一个取代。35.根据权利要求34所述的多肽，其中所述Fc区包含T366S、L368A和Y407V突变。36.根据权利要求30
‑
35中任一项所述的多肽，其中所述Fc区在选自S354和Y349的Kabat位置处包含取代。37.根据权利要求36所述的多肽，其中所述Fc区包含S354C或Y349C取代。38.根据权利要求30
‑
37中任一项所述的多肽，其中所述Fc区在Kabat氨基酸位置H435处包含取代。39.根据权利要求38所述的多肽，其中所述Fc区包含选自H435R和H435K的取代。40.根据权利要求30
‑
39中任一项所述的多肽，其中所述Fc区在至少一个选自M252和M428的Kabat氨基酸位置处包含至少一个取代。41.根据权利要求40所述的多肽，其中所述Fc区包含M252Y和M428V取代。42.根据权利要求30
‑
41中任一项所述的多肽，其中所述Fc区包含Kabat氨基酸E233、L234和L235的缺失。
43.根据权利要求30
‑
41中任一项所述的多肽，其中所述Fc区在选自L234、L235和P329的至少一个氨基酸位置处包含至少一个取代。44.根据权利要求43所述的多肽，其中所述Fc区包含L234A、L235A和P329G取代。45.根据权利要求30
‑
44中任一项所述的多肽，其中所述Fc区包含与选自SEQ ID NO:47
‑
83的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。46.根据权利要求30
‑
44中任一项所述的多肽，其中所述Fc区是重链恒定区的一部分。47.根据权利要求46所述的多肽，其中所述重链恒定区是IgG恒定区。48.根据权利要求47所述的多肽，其中所述重链恒定区是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区。49.根据权利要求30
‑
48中任一项所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2与所述Fc区或重链恒定区的C端融合。50.根据权利要求49所述的多肽，其中所述修饰的IL
‑
2经由包含1
‑
20个氨基酸的接头与所述Fc区或重链恒定区的C端融合。51.根据权利要求50所述的多肽，其中所述接头包含甘氨酸氨基酸。52.根据权利要求51所述的多肽，其中所述接头包含甘氨酸和丝氨酸氨基酸。53.根据权利要求50
‑
52中任一项所述的多肽，其中所述接头中的大部分或全部氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。54.根据权利要求30
‑
33、42和49
‑
53中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO:86、87、102、103或104的氨基酸序列。55.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含至少一个抗原结合结构域。56.根据权利要求55所述的多肽，其中所述多肽包含两个、三个或四个抗原结合结构域。57.根据权利要求55或权利要求56所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合T细胞抗原或自然杀伤细胞抗原。58.根据权利要求55
‑
57中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合CD4
+
T细胞抗原或CD8
+
T细胞抗原。59.根据权利要求58所述的多肽，其中所述至少一个抗原结合结构域特异性结合激活的CD4
+
T细胞或激活的CD8
+
T细胞上的抗原。60.根据权利要求55
‑
59中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域是激动剂。61.根据权利要求55
‑
59中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是拮抗剂。62.根据权利要求55
‑
61中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合PD
‑
1、CTLA
‑
4、LAG3、TIM3、4
‑
1BB、OX40、GITR、CD8a、CD8b、CD4、NKp30、NKG2A、TIGIT、TGFβR1、TGFβR2、Fas、NKG2D、NKp46、PD
‑
L1、CD107a、ICOS、TNFR2或CD16a。63.根据权利要求55
‑
62中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域特异性结合PD
‑
1。64.根据权利要求55
‑
63中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域是人或人
源化抗原结合结构域。65.根据权利要求64所述的多肽，其中每个抗原结合结构域独立地是人或人源化抗原结合结构域。66.根据权利要求55
‑
65中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域包含VHH结构域。67.根据权利要求66所述的多肽，其中每个抗原结合结构域包含VHH结构域。68.根据权利要求55
‑
65中任一项所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域包含VH结构域和VL结构域。69.根据权利要求68所述的多肽，其中至少一个抗原结合结构域包含选自以下的抗体的VH结构域和VL结构域：派姆单抗、纳武单抗、AMP
‑
514、TSR
‑
042、STI
‑
A1110、伊匹单抗、曲美目单抗、乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、阿特珠单抗和度伐鲁单抗。70.根据权利要求68或69所述的多肽，其中所述至少一个抗原结合结构域包含单链Fv(scFv)。71.根据权利要求68或69所述的多肽，其中所述多肽包含重链恒定区，其中所述VH结构域与所述重链恒定区融合，并且其中所述VL结构域与所述VH结构域关联。72.根据权利要求71所述的多肽，其中所述VL结构域与轻链恒定区融合。73.根据权利要求72所述的多肽，其中所述轻链恒定区选自κ和λ。74.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：印希比股份有限公司，
类型：发明
国别省市：