抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)抗体及其用途制造技术

本申请提供了与糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合的抗体或其抗原结合部分。还提供了这些蛋白质在治疗应用中的用途，比如在治疗癌症中的用途。进一步提供了产生抗体的细胞、编码所述抗体的重链和/或轻链可变区的多核苷酸、以及包含编码所述抗体的重链和/或轻链可变区的多核苷酸的载体。

Anti glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor (GITR) antibodies and their uses

This application provides an antibody or antigen-binding portion that binds to glucocorticoid-induced TNF receptor (GITR). The use of these proteins in therapeutic applications is also provided, such as in the treatment of cancer. The cells producing the antibody, the polynucleotides encoding the heavy and/or light chain variable regions of the antibody, and the carriers containing the polynucleotides encoding the heavy and/or light chain variable regions of the antibody are further provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)抗体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求分别于2015年11月19日和2016年3月4日提交的美国临时申请No.62/257,599和62/303,990的优先权。将上述申请的内容通过提述并入本文。序列表本申请包括已经以电子方式以ASCII格式提交的序列表,，其通过提述完整并入本申请中。该ASCII副本创建于2017年11月17日，命名为2016-11-15_MXI-547PC_ST25.txt，大小为1,011,555个字节。背景糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)是一种共刺激分子，又称TNFRSF18、AITR、CD357和GITR-D，是TNF受体家族的成员，其最初在用地塞米松处理的鼠T细胞系中被鉴定出(Nocentini等人，PNAS1997；94:6216-21)。TNF受体家族的其他相关成员包括CD40、CD27、4-1BB和OX40。虽然幼稚CD4+和CD8+细胞中GITR表达低，但GITR在调节性T细胞中呈组成性表达(Tone等人，PNAS2003；100:15059-64)。然而，一旦GITR的表达在效应T细胞上被诱导，GITR衔接作用可促进效应T细胞的活化、增殖和细胞因子产生(Watts,AnnualReviewsinImmunology2005；23:23-68)。关于CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)，Shimizu报道，利用混合培养抑制测定法，GITR衔接抑制了它们的功能(Shimizu等人，NatureImmunology2002；3:135-42)。然而，Stephans等人(JI200415；173(8):5008-20)的后续工作确定，GITR在效应T(Teff)细胞上的衔接使所述效应T细胞对Treg抑制较不敏感，从而解释了在Treg-Teff细胞共培养中所观察到的抑制减少。DTA-1(大鼠抗小鼠GITR)抗体介导的GITR刺激在多种肿瘤模型中促进了抗肿瘤免疫。GITR-L(GITR的配体)在抗原呈递细胞(例如，B细胞、树突细胞)中以低水平表达，但是在例如通过病毒感染激活后，其在这些细胞中瞬时上调(Suvas等人，JVirol.2005；79:11935-42)。由于面临着改进针对癌症等疾病的策略的需要、人们非常希望从增强的免疫应答特别是T细胞应答，调节GITR活性的新型药剂和方法获益。概述本申请提供了分离的抗体，例如单克隆抗体，特别是人单克隆抗体，其特异性结合GITR并且具有期望的功能性质。这些特性包括与人GITR的高亲和力结合、与猴GITR(例如，食蟹猴GITR)的结合以及刺激抗原特异性T细胞应答的能力。本文所述的抗体可用于刺激抗原特异性T细胞应答，例如在带有肿瘤或带有病毒(病毒感染)的受试者中刺激抗原特异性T细胞应答，并可用于检测样品中的GITR蛋白。在一个方面，本申请提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其与GITR结合并包含重链恒定区，所述重链恒定区包含(1)选自SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543的氨基酸序列，或(2)与氨基酸序列SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区，其中氨基酸修饰不位于SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543中这样的特定氨基酸处：所述特定氨基酸在天然存在的人重链恒定区中不存在。在某些实施方案中，抗体展现以下性质中的至少一项：(a)与可溶性人GITR结合；(b)与膜结合的人GITR结合；(c)与膜结合的食蟹猴GITR结合；(d)诱导或增强T细胞活化，例如，抗原特异性T细胞活化；(e)抑制GITR配体与3A9-hGITR细胞上的GITR结合；(f)至多部分地抑制GITR配体与活化的T细胞上的GITR结合；(g)与成熟人GITR(SEQIDNO:4)上的构象表位结合；(h)与O-连接的和N-糖基化的及未糖基化的人GITR结合；(i)在没有与Fc受体结合时具有激动剂活性，但其中与Fc受体的结合进一步增强该激动剂活性；及(j)在任一方向或两个方向上与抗体28F3、3C3-1、3C3-2、2G6、8A6、9G7-1、9G7-2、14E3、19H8-1、19H8-2、19D3、18E10及6G10中的一者或多者竞争结合人GITR。在某些实施方案中，本文所述抗GITR抗体或其抗原结合部分刺激抗肿瘤免疫应答，例如，抗原特异性T细胞应答。在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合部分增加表达GITR的T细胞中的细胞因子(例如，IL-2和/或IFN-γ)产生和/或增加T细胞增殖。在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合部分不与Fc受体结合。在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合部分结合一种或多种FcγR，例如活化或抑制性FcγR。在某些实施方案中，抗GITR抗体或其抗原结合部分以如通过Biacore测量的10nM或更小的KD与可溶性人GITR结合，以如通过Scatchard测量的1nM或更小的KD与膜结合的人GITR结合，以如通过FACS测量的1nM或更小的EC50与膜结合的人GITR结合，以如通过FACS测量的10nM或更小的EC50与膜结合的食蟹猴GITR结合，诱导或增强T细胞(例如Teff细胞)活化而无需多价交联，以如通过FACS测量的1μg/mL或更小的EC50抑制GITR配体与GITR结合，和/或在成熟人GITR(SEQIDNO:4)的区域PTGGPGCGPGRLLLGTGT(SEQIDNO:217)和CRDYPGEE(SEQIDNO:218)内结合。本申请提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与GITR特异性地结合，并且包含选自下列的可变重链和可变轻链对中的三个可变重链CDR和三个可变轻链CDR：(a)SEQIDNO:13和14；(b)SEQIDNO:26和27；(c)SEQIDNO:39和40；(d)SEQIDNO:52和53；(e)SEQIDNO:52和54；(f)SEQIDNO:71和72；(g)SEQIDNO:84和85；(h)SEQIDNO:97和98；(i)SEQIDNO:97和99；(j)SEQIDNO:115和116；(k)SEQIDNO:128和129；(l)SEQIDNO:128和130；以及(m)SEQIDNO:335和336；并且包含重链恒定区，所述重链恒定区包含(1)选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543或(2)与氨基酸序列SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区，其中氨基酸修饰不位于SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543中这样的特定氨基酸处：所述特定氨基酸在天然存在的人重链恒定区中不存在。本申请提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与GITR结合并且包含：(a)分别包含SEQIDNO:20、21和22的重链CDR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与人糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合并包含重链恒定区，所述重链恒定区包含(1)选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:223‑226、283‑290、383‑446和480‑543或(2)与氨基酸序列SEQ ID NO:223‑226、283‑290、383‑446和480‑543有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区，其中氨基酸修饰不位于SEQ ID NO:223‑226、283‑290、383‑446和480‑543中这样的特定氨基酸处：所述特定氨基酸在天然存在的人重链恒定区中不存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.19 US 62/257,599;2016.03.04 US 62/303,9901.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与人糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合并包含重链恒定区，所述重链恒定区包含(1)选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543或(2)与氨基酸序列SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区，其中氨基酸修饰不位于SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543中这样的特定氨基酸处：所述特定氨基酸在天然存在的人重链恒定区中不存在。2.权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体刺激抗肿瘤免疫应答。3.权利要求1或2的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体刺激抗原特异性T细胞应答。4.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体增加表达GITR的T细胞中的IL-2和/或IFN-γ产生。5.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体增加T细胞增殖。6.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体不与Fc受体结合。7.权利要求1-5中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体与一种或多种活化性FcγR结合。8.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体以如通过Biacore测量的100nM或更低的KD与可溶性人GITR结合。9.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体以如通过Scatchard测量的1nM或更低的KD与膜结合的人GITR结合。10.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体以如通过FACS测量的1nM或更低的EC50与膜结合的人GITR结合。11.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体以如通过FACS测量的10nM或更低的EC50与膜结合的食蟹猴GITR结合。12.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体诱导或增强T细胞活化而无需多价交联。13.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体以如通过FACS测量的1μg/mL或更低的EC50抑制GITR配体与GITR结合。14.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体结合成熟人GITR(SEQIDNO:4)的PTGGPGCGPGRLLLGTGT(SEQIDNO:217)和CRDYPGEE(SEQIDNO:218)。15.权利要求1-14中任一项的分离的抗体或其抗原结合部分，其与糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)特异性地结合，并且包含选自下组序列的可变重链和可变轻链对中的三个可变重链CDR和三个可变轻链CDR：(a)SEQIDNO:13和14；(b)SEQIDNO:26和27；(c)SEQIDNO:39和40；(d)SEQIDNO:52和53；(e)SEQIDNO:52和54；(f)SEQIDNO:71和72；(g)SEQIDNO:84和85；(h)SEQIDNO:97和98；(i)SEQIDNO:97和99；(j)SEQIDNO:115和116；(k)SEQIDNO:128和129；(l)SEQIDNO:128和130；以及(m)SEQIDNO:335和336。16.权利要求1-14中任一项的分离的抗体或其抗原结合部分，其与糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合，其包含：(a)分别包含SEQIDNO:20、21和22的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:23、24和25的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(b)分别包含SEQIDNO:33、34和35的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:36、37和38的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(c)分别包含SEQIDNO:46、47和48的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:49、50和51的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(d)分别包含SEQIDNO:62、63和64的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:65、66和67的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(e)分别包含SEQIDNO:62、63和64的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:68、69和70的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(f)分别包含SEQIDNO:78、79和80的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:81、82和83的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(g)分别包含SEQIDNO:91、92和93的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:94、95和96的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(h)分别包含SEQIDNO:106、107和108的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:109、110和111的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(i)分别包含SEQIDNO:106、107和108的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:112、113和114的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(j)分别包含SEQIDNO:122、123和124的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:125、126和127的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(k)分别包含SEQIDNO:138、139和140的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:141、142和143的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(l)分别包含SEQIDNO:138、139和140的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:144、145和146的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或(m)分别包含SEQIDNO:342-344的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:345-347的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。17.权利要求16的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别包含SEQIDNO:20、21和22的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:23、24和25的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。18.权利要求16的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别包含SEQIDNO:33、34和35的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:36、37和38的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。19.权利要求16的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含分别包含SEQIDNO:46、47和48的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:49、50和51的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。20.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合并包含重链及轻链可变区，其中所述重链可变区包含与选自下组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列：SEQIDNO:13、26、39、52、71、84、97、115、128和335，并且其包含重链恒定区，所述重链恒定区包括：(1)选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543或(2)与氨基酸序列SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区，其中氨基酸修饰不位于SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543中如下所述的特定氨基酸处：所述特定氨基酸在天然存在的人重链恒定区中不存在。21.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合并包含重链及轻链可变区，其中所述轻链可变区包含与选自下组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列：SEQIDNO:14、27、40、53、54、72、85、98、99、116、129、130和336，并且所述重链包含重链恒定区，所述重链恒定区包括：(1)选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543或(2)与氨基酸序列SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543有至多5个氨基酸不同或至少95％、96％、97％、98％或99％相同的重链恒定区，其中氨基酸修饰不位于SEQIDNO:223-226、283-290、383-446和480-543中中如下所述的特定氨基酸处：所述特定氨基酸在天然存在的人重链恒定区中不存在。22.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与糖皮质激素诱导的TNF受体(GITR)结合并且包含与选自下组的氨基酸序列至少85％相同的重链和轻链可变区序列：(a)分别为SEQIDNO:13和14；(b)分别为SEQIDNO:26和27；(c)分别为SEQIDNO:39和40；(d)分别为SEQIDNO:52和53；(e)分别为SEQIDNO:52和54；(f)分别为SEQIDNO:71和72；(g)分别为SEQIDNO:84和85；(h)分别为SEQIDNO:97和98；(i)分别为SEQIDNO:97和99；(j)分别为SEQIDNO:115和116；(k)分别为SEQIDNO:128和129；(l)分别为SEQIDNO:128和130；以及(m)分别为SEQIDNO:335和336。23.权利要求22的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链和轻链可变区包含与选自(a)-(m)的重链和轻链可变区至少90％相同的氨基酸序列。24.权利要求23的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链和轻链可变区包含与选自(a)-(m)的重链和轻链可变区至少95％相同的氨基酸序列。25.权利要求24的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链和轻链可变区包含选自(a)-(m)的重链和轻链可变区。26.权利要求25的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括：包含在SEQIDNO:13中列出的氨基酸序列的重链可变区、和包含在SEQIDNO:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·王，N·朗伯格，艾伦·J·科曼，M·J·塞尔比，M·斯里尼瓦桑，K·A·亨宁，M·M·韩，G·陈，R·黄，I·查克拉博蒂，H·黄，S·CS·王，H·李，B·C·巴恩哈特，A·P·亚尼克，M·雷，L·施魏策尔，S·V·哈彻，A·赖帕尔，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：美国,US