RCAN1.4作为诊断肝细胞癌的诊断标志物的应用制造技术

本发明专利技术涉及RCAN1.4作为诊断肝细胞癌的诊断标志物的应用。本发明专利技术公开了一种新型肝癌诊断和预后标志物，所述标志物是RCAN1.4，其可以作为肝癌病人的独立预后指标。本发明专利技术为临床上诊断肝癌和判断预后提供了一种灵敏度更高、特异性更强的方法。

Application of RCAN1.4 as diagnostic marker for hepatocellular carcinoma

The invention relates to the application of RCAN1.4 as a diagnostic marker for diagnosing hepatocellular carcinoma. The invention discloses a novel diagnostic and prognostic marker for hepatocellular carcinoma, which is RCAN1.4, and can be used as an independent prognostic indicator for patients with hepatocellular carcinoma. The invention provides a method with higher sensitivity and stronger specificity for clinically diagnosing hepatocellular carcinoma and judging prognosis.

【技术实现步骤摘要】
RCAN1.4作为诊断肝细胞癌的诊断标志物的应用
本专利技术属于诊断标志领域，更具体地，本专利技术涉及RCAN1.4作为诊断肝细胞癌的诊断标志物的应用。
技术介绍
肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC，简称肝癌)是严重威胁人类健康的恶性疾病之一，全球范围内其死亡率在男性中位居第二，在女性中位居第五。世界卫生组织发表的《全球癌症报告2014》显示，中国新增癌症病例高居世界第一位，其中肝癌的新增病例和死亡人数均居世界首位。目前，中国肝癌的发病率约为25.7/10万，成为死亡率仅次于胃癌、肺癌的第三大恶性肿瘤。肝癌早期诊治较难，病情进展快且预后差。虽然肝癌的检测和治疗水平在近几十年有了一定的提高，但目前其主要治疗方法依然是手术切除，且肝癌患者的5年存活率依旧很低。因此，迫切需要发现新的肝癌诊断和预后标志物；目前临床上对于癌前病变的不典型增生结节(dysplasticnodule，DN)与早期肝细胞肝癌(earlyHCC，eHCC)的鉴别诊断非常困难。主要依靠影像学诊断或病理学者的HE染色切片的镜下诊断。此外，目前主要有几种分子标志物如热休克蛋白70(Heatshockprotein70，HSP70)，磷脂酰肌醇聚糖3(Glypican3，GPC3)、谷氨酰氨合成酶(Glutaminesynthetase，GS)、网格蛋白重链(Clathrinheavychain，CHC)、zeste同源分子2增强子(Enhancerofzestehomologue2，EZH2)和CD34等用于病理学免疫组化染色鉴别诊断DN和eHCC，但这些分子的诊断效率均不够理想。钙调磷酸酶调节蛋白1(Regulatorofcalcineurin1，RCAN1)是钙调神经磷酸酶(Calcineurin，CaN)的一类内源性调节因子，最早发现于唐氏综合症关键区域1(DownSyndromeCriticalRegion，DSCR1)的q22.12区域。RCAN1基因组有7个外显子，分别被6个内含子隔开，其中外显子1-4可被选择性剪切产生4种不同的mRNA转录产物。研究发现，在哺乳动物组织中只能检测到其中三种选择性剪接体的mRNA表达产物，且绝大多数转录产物都是以外显子1(RCAN1.1)或外显子4(RCAN1.4)起始。RCAN1的表达具有组织特异性：RCAN1.1大量表达于心脏、大脑、肌肉和胰腺中；RCAN1.2只表达于胎儿肝脏和大脑中；而RCAN1.4主要表达于心脏、肝脏、肌肉、胎盘、胰腺和肾脏中。RCAN1.4蛋白包含197个氨基酸，主要通过与CaN的调节亚基结合，调节CaN的活性进而影响下游信号通路和靶基因的表达。然而，目前的现有技术中，对于RCAN1.4与肝细胞癌的相关性，尚无任何报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供RCAN1.4作为诊断肝细胞癌的诊断标志物的应用。在本专利技术的第一方面，提供RCAN1.4蛋白或其编码基因在制备诊断肝细胞癌的诊断试剂或试剂盒中的用途。在一个优选例中，所述的细胞癌是：早期肝细胞癌。在本专利技术的另一方面，提供RCAN1.4蛋白或其编码基因在制备对肝细胞癌患者进行预后的试剂或试剂盒中的用途。在一个优选例中，所述的诊断试剂选自：特异性扩增RCAN1.4蛋白的编码基因的引物；或特异性识别RCAN1.4蛋白的编码基因或其转录本的探针；或特异性抗RCAN1.4蛋白的抗体。在另一优选例中，所述的特异性扩增RCAN1.4蛋白的编码基因的引物是引物对。在另一优选例中，所述的特异性抗RCAN1.4蛋白的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断肝细胞癌或用于对肝细胞癌患者进行预后的试剂盒，所述的试剂盒中含有：检测RCAN1.4蛋白或其编码基因的表达情况或表达量的诊断试剂。在一个优选例中，所述的检测RCAN1.4蛋白或其编码基因的表达情况或表达量的诊断试剂选自：特异性扩增RCAN1.4蛋白的编码基因的引物；或特异性识别RCAN1.4蛋白的编码基因或其转录本的探针；或特异性抗RCAN1.4蛋白的抗体。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：核酸抽提试剂；和/或聚合酶链反应试剂；和/或蛋白免疫印迹试剂；和/或酶链免疫反应试剂。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：说明该试剂盒的使用方法的使用说明书。在本专利技术的另一方面，提供一种测定肝细胞癌的方法，所述方法包括：检测待测样品中的RCAN1.4蛋白或其编码基因的表达情况或表达量，若结果显示RCAN1.4蛋白或其编码基因的表达量显著低于(为统计学上低于，如低10％或更低，较佳地20％或更低，更佳地低30％或更低)对照，则该待测样品的提供者为肝细胞癌高危或为肝细胞癌患者；其中，所述的对照是正常肝组织样品，或癌旁组织样品。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、RCAN1.4在正常肝组织、肝硬组织、不典型增生结节组织和早期肝癌组织的差异表达。图2、RCAN1.4在肝癌组织及配对癌旁肝组织中的差异表达。图3、分析RCAN1.4与肝癌患者预后的关系。(A)免疫组化检测RCAN1.4在肝癌组织芯片中的表达情况(n＝196)，从左到右依次为；强阳性(IRS:9～12分)、中度阳性(IRS:6～8分)、弱阳性(IRS:2～4分)和阴性(IRS:0～1分)；(B)分析RCAN1.4与肝癌患者生存(OS)的关系；(C)分析RCAN1.4与肝癌患者复发(TTR)的关系。其中RCAN1.4low包括阴性和弱阳性病例，RCAN1.4high包括中度阳性和强阳性病例。具体实施方式本专利技术公开了一种新型肝癌诊断和预后标志物，所述标志物是RCAN1.4。本专利技术人通过免疫组织化学检测肝癌组织芯片发现，RCAN1.4蛋白在肝癌发生发展过程中逐渐降低，特别是在肝细胞不典型增生结节组织和早期肝癌中有显著的表达差异；对196例肝癌病例进行RCAN1.4检测，并结合临床数据分析显示：RCAN1.4蛋白低表达患者生存时间和复发时间都显著缩短，可以作为肝癌病人的独立预后指标。本专利技术的诊断和预后标志物，为临床上诊断肝癌和判断预后提供了一种灵敏度更高、特异性更强的新的诊断手段。如本文所用，“早期肝细胞癌”是按照巴塞罗那临床肝癌标准(BarcelonaClinicLiverCancer，BCLC)0+A级的肝细胞癌。在本专利技术中，术语“RCAN1.4蛋白”的氨基酸序列与SEQIDNO:2的蛋白序列基本上相同，也包括RCAN1.4蛋白的同源蛋白。在本专利技术中，术语“RCAN1.4蛋白的编码基因”的核苷酸序列与SEQIDNO:1的核苷酸序列基本上相同或其简并的变异体，也包括RCAN1.4基因的同源基因。目前临床上，肝癌主要分为以下几类：(1)肝细胞癌，起源于肝细胞的恶性肿瘤；(2)胆管癌，起源于肝内外胆管上皮细胞的恶性肿瘤，约占原发性肝癌的20％，近年来发病率逐年升高；(3)混合性原发性肝癌，同一肝癌肿块内，肝细胞癌与胆管细胞癌并行；(4)肝血管瘤，较为常见的肝脏良性肿瘤，占肝良性肿瘤的5-20％；(5)肝腺瘤：在肝脏良性肿瘤中，其发病率仅次于肝血管瘤，发病机理可能与性内分泌紊乱有关，主要发于女性；(6)肝脏局灶性结节性增生，肝脏良性病变，发病原因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.RCAN1.4蛋白或其编码基因在制备诊断肝细胞癌的诊断试剂或试剂盒中的用途。

【技术特征摘要】
1.RCAN1.4蛋白或其编码基因在制备诊断肝细胞癌的诊断试剂或试剂盒中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的细胞癌是：早期肝细胞癌。3.RCAN1.4蛋白或其编码基因在制备对肝细胞癌患者进行预后的试剂或试剂盒中的用途。4.如权利要求1～3任一所述的用途，其特征在于，所述的诊断试剂选自：特异性扩增RCAN1.4蛋白的编码基因的引物；或特异性识别RCAN1.4蛋白的编码基因或其转录本的探针；或特异性抗RCAN1.4蛋白的抗体。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的特异性扩增RCAN1.4蛋白的编码基因的引物是引物对。6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的特异性抗RCAN1.4蛋白的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：覃文新，金浩杰，王存，汪惠，吕远远，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31