新城疫病毒抗体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及新城疫病毒抗体检测试剂盒。本发明专利技术的检测试剂盒包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的特定多肽或多肽集合。

Newcastle disease virus antibody test kit

The invention relates to a Newcastle disease virus antibody detection kit. The detection kit of the invention comprises one or more solid carriers and a specific polypeptide or polypeptide set independently connected to the one or more solid carriers.

【技术实现步骤摘要】
新城疫病毒抗体检测试剂盒
本专利技术主要涉及禽用试剂盒及诊断方法。具体而言，本专利技术涉及可用于对新城疫抗体检测的试剂盒以及检测方法。
技术介绍
新城疫(ND)是由NDV(Newcastlediseasevirus,新城疫病毒)引起的一种极易传染的毁灭性疾病，其死亡率常高达100％，广泛分布于许多国家,OIE将其列为A类疫病。本病的典型特征是呼吸道、消化道粘膜出血，人也有易感性。本病在1926年最早发现于印度尼西亚的巴塔维亚，同年发现于英国新城，因此而得名。NDV为副黏病毒科副黏病毒属(Avulavirus)的禽副黏病毒I型(APMV-1)。该病毒具有囊膜结构，基因组为单股负链不分节段的RNA病毒，由6种结构蛋白组成，分别为NP、P、M、F、HN和L蛋白。NP蛋白为核衣壳蛋白，氨基酸保守性较高，大部分NDV病毒在NP蛋白443-460位置都具有一高度保守的B细胞表位；P蛋白是病毒RNA合成的必需因子；M、F和HN蛋白与病毒囊膜的形成相关；F蛋白(融合蛋白)和HN蛋白(血凝素神经氨酸酶蛋白)是病毒的主要免疫原性蛋白，可以诱导机体产生中和抗体。F蛋白介导病毒与宿主细胞的膜融合，其蛋白裂解位点与病毒毒力有关。HN蛋白具有神经氨酸酶及促进融合等作用；此外，该蛋白还与病毒毒力相关。L蛋白为病毒最大的蛋白，它在NDV6种结构蛋白中最为保守，具有RNA聚合酶、转录后修饰等生物学活性，可与NP和P蛋白共同构成病毒复制复合体，该复合体参与病毒基因组的转录和复制。目前，新城疫的实验室检测技术主要包括：常规分离鉴定，血清学方法(血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散实验(AGP)、荧光抗体技术(FA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中和试验(VNT)、乳胶凝集试验(LAT)、神经氨酸酶试验(NIT)、放射免疫试验(RIA)，分子生物学方法(RNA指纹图谱、核酸探针技术、RT-PCR技术)等。这其中，酶联免疫测定的特异性和敏感性较高且适合检测大量样品，因此，被广泛应用于新城疫病毒抗体的检测。用于新城疫病毒抗体检测的酶联免疫测定方法主要包括竞争酶联免疫测定(c-ELISA)、阻断酶联免疫测定(b-ELISA)和间接阻断酶联免疫测定。c-ELISA和b-ELISA的特异性和敏感性都比较高，是被临床普遍接受的新城疫病毒抗体检测方法。但是，c-ELISA和b-ELISA均需使用单克隆抗体，这造成检测成本大幅提高；而且，c-ELISA和b-ELISA的操作繁琐、检测时间长、判据复杂。另一方面，传统的间接ELISA使用源自新城疫病毒的完整蛋白或重组蛋白作为包被抗原来检测血清中的抗体，其成本低于c-ELISA和b-ELISA；但是，由于该方法使用完整蛋白作为抗原，容易发生抗体的错误识别和非特异性识别，因此，其特异性和敏感性都不及c-ELISA和b-ELISA。因此，需要开发出检测成本低、检测时间短、操作简便、特异性和敏感性高的新城疫病毒抗体检测试剂盒。
技术实现思路
鉴于上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种检测成本低、检测时间短、操作简便、特异性和敏感性高的新城疫病毒抗体检测试剂盒，以及能够用于制备该试剂盒的多肽或多肽组合。专利技术人发现：基于抗原表位多肽的间接ELISA方法由于使用抗原表位多肽(20个氨基酸左右的单条多肽通常只包含一个抗原表位)作为包被抗原，因此，特异性很高；但该方法的敏感性往往偏低，单条多肽的敏感性一般不会超过50％。如果能够找到敏感性高的抗原表位多肽，就可以克服传统的间接ELISA的缺点，开发出特异性和敏感性均可媲美c-ELISA和b-ELISA、甚至更高的新城疫病毒抗体检测试剂盒。专利技术人为解决上述技术问题进行了深入研究，结果发现：SEQIDNO：1所示的多肽，用该多肽单独检测新城疫病毒抗体的敏感性为90.5％、特异性为97％，单独使用即可达到作为检测试剂盒的标准；当用SEQIDNO：1所示的多肽和SEQIDNO：2所示的多肽组合检测新城疫病毒抗体时，敏感性为95％，特异性为96％，是目前综合性能最优异的新城疫病毒抗体检测试剂盒。因此，本专利技术包括：1.SEQIDNO：1所示的多肽。2.SEQIDNO：1所示的多肽与SEQIDNO：2所示的多肽的组合。3.上述多肽或多肽组合在制备用于检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体(IgY)的试剂盒中的用途。4.一种新城疫病毒抗体(IgY)检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的下述多肽组合1；多肽组合1SEQIDNO：1所示的多肽，以及SEQIDNO：2所示的多肽。5.一种新城疫病毒抗体(IgY)检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的SEQIDNO：1所示的多肽。6.根据权利要求4或5所述的新城疫病毒抗体(IgY)检测试剂盒，其不包含其它用于检测新城疫病毒抗体(IgY)的探针分子(例如多肽、蛋白或核酸)。7.下述多肽组合1在制备用于检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体(IgY)的试剂盒中的用途；多肽组合1SEQIDNO：1所示的多肽，以及SEQIDNO：2所示的多肽。在本说明书中，所述对象生物优选为禽类，更优选为鸡。在本说明书中，所述生物样本可以是全血、血浆或血清。上述多肽及试剂盒可以用于检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体(IgY)。通常，生物样本中的新城疫病毒抗体是由于对象生物被新城疫病毒感染或被新城疫疫苗免疫而产生的，因此，上述多肽及试剂盒可以用于诊断对象生物是否被新城疫病毒感染或新城疫疫苗免疫。专利技术的具体实施方式首先，本专利技术提供SEQIDNO：1所示的多肽。专利技术人发现，用该多肽单独检测新城疫病毒抗体的敏感性为90.5％、特异性为97％。与基于抗原表位多肽的间接ELISA方法中，单条多肽的一般不超过50％的敏感性相比，SEQIDNO：1所示的多肽的敏感性是惊人的，单独使用该多肽检测新城疫病毒抗体的敏感性甚至可以与传统的ELISA方法检测试剂盒媲美！而且，其还具有高达97％的特异性。因此，其取得了预料不到的技术效果。本说明书中，敏感性是指：用“金标准”方法确认的阳性样本中，被其他方法测定为阳性样本的比例。特异性是指：用“金标准”方法确认的阴性样本中，被其他方法测定为阴性样本的比例。对于新城疫病毒抗体的检测而言，本
的“金标准”是血凝抑制试验(HI)。所述SEQIDNO：1所示的多肽可以作为检测探针用于制备检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体的试剂盒。专利技术人还发现，当用SEQIDNO：1所示的多肽与SEQIDNO：2所示的多肽组合检测新城疫病毒抗体时，敏感性为95％、特异性为97％，完全可以与c-ELISA方法和b-ELISA方法媲美。因此，本专利技术还提供下述多肽组合1。多肽组合1SEQIDNO：1所示的多肽，以及SEQIDNO：2所示的多肽。上述多肽组合可以作为检测探针用于制备检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体的试剂盒。因此，本专利技术还提供一种新城疫病毒抗体检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的上述多肽组合1。在本说明书中，固体载体可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SEQ ID NO：1所示的多肽。

【技术特征摘要】
1.SEQIDNO：1所示的多肽。2.SEQIDNO：1所示的多肽在制备用于检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体(IgY)的试剂盒中的用途。3.一种新城疫病毒抗体(IgY)检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的下述多肽组合1；多肽组合1SEQIDNO：1所示的多肽，以及SEQIDNO：2所示的多肽。4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其用于检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗新城疫病毒的抗体(IgY)。...

【专利技术属性】
技术研发人员：马雄明，章为江，
申请(专利权)人：苏州艾比拓生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32