The invention discloses a cryogenic preservation medium for CART cell preparation, which belongs to the field of cell therapy technology. A method of CART cell preparation includes the following steps: (1) after mixing the cultured CART cells, transferring them to the centrifugal tube, centrifuging them for 5 minutes at 300 g, and discarding the supernatant; (2) suspending the centrifuged cell mass with saline, confirming that the cell mass is completely blown away, adding saline, and resting on the magnetic frame for 3 minutes; To separate cells from magnetic beads; (3) transfer the cell suspension to a new centrifugal tube with a pipette and repeat the removal of magnetic beads twice; (4) centrifuge for 5 minutes at 300 g, discard the supernatant and reserve it; (5) re-suspend cells with cryopreservation medium according to the number of cells transfused back to each patient. Compound electrolyte injection, dextran 40 Glucose injection, 20% human albumin, sodium chloride injection, 10% glucose injection, DMSO injection and 50% glucose injection are the components of cryopreservation medium. The advantages of the present invention are that the cells after preparation can be preserved for at least 12 months at low temperature, and the cell viability can be maintained above 90% within 24 hours.
【技术实现步骤摘要】
一种嵌合抗原受体T细胞制剂及其低温保存制剂制备方法
本专利技术属于嵌合抗原受体领域,本专利技术公开了一种CART细胞制剂及低温保存介质。
技术介绍
嵌合抗原受体(ChimericAntigenReceptor-Tcell,CAR-T)T细胞是指经基因修饰后,能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原,并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段,并将成为未来肿瘤治疗必选手段。嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件,赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力,这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen,TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFv段),一个胞外铰链区,一个跨膜区和一个胞内信号区。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素。在CART细胞体外大量扩增培养后,有效的制备成易保存、易运输、易回输的制剂无论是对患者还是对生产CART细胞机构来说显得都极为重要。因此,本专利专利技术了一种CART细胞低温保存制剂,为将来的临床试验和临床治疗奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种CART细胞制剂的低温保存介质。一种CART细胞制剂方法,包括以下步骤:(1)将培养的CART细胞混匀后,转移至离心管中,在300g条件下,离心5min,弃掉上清液;(2)将离心后的细胞团先用生理盐 ...
【技术保护点】
1.一种CART细胞制剂方法,其特征在于包括以下步骤:(1)将培养的CART细胞混匀后,转移至离心管中,在300g条件下,离心5min,弃掉上清液;(2)将离心后的细胞团先用生理盐水重悬,确认细胞团被完全吹散,加生理盐水,在磁力架上静止3分钟,实现细胞跟磁珠的分离;(3)用移液管将细胞悬液转移至新的离心管中,重复去除磁珠操作两次;(4)在300g条件下,离心5min,弃掉上清液,备用;(5)根据每个患者回输的细胞数量,用低温保存介质重悬细胞。
【技术特征摘要】
1.一种CART细胞制剂方法,其特征在于包括以下步骤:(1)将培养的CART细胞混匀后,转移至离心管中,在300g条件下,离心5min,弃掉上清液;(2)将离心后的细胞团先用生理盐水重悬,确认细胞团被完全吹散,加生理盐水,在磁力架上静止3分钟,实现细胞跟磁珠的分离;(3)用移液管将细胞悬液转移至新的离心管中,重复去除磁珠操作两次;(4)在300g条件下,离心5min,弃掉上清液,备用;(5)根据每个患者回输的细胞数量,用低温保存介质重悬细胞。2...
【专利技术属性】
技术研发人员:史子啸,王海鹰,何凤,彭荣,
申请(专利权)人:上海恒润达生生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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