联合表达Treg抑制剂P60的CAR-T细胞的制备制造技术

本发明专利技术公开了Treg细胞抑制剂P60与CART细胞联合制备的方法，主要包括以下步骤：1)Treg细胞抑制剂P60的构建；2)CART细胞构建；3)P60加入到CART细胞中并检测CART细胞增殖与功能。本发明专利技术制备的联合表达Treg抑制剂P60的CART细胞增殖能力强，细胞功能好。

Preparation of car-t cells co expressing Treg inhibitor P60

【技术实现步骤摘要】
联合表达Treg抑制剂P60的CAR-T细胞的制备
本专利技术涉及一种工程T细胞，其制备方法及其作为药物的用途，特别是用于免疫治疗。本专利技术的工程T细胞被设计用于局部表达调控T细胞(Treg)的分泌抑制剂。分泌抑制剂是叉头/翼状螺旋转录因子3(FoxP3)的肽抑制剂，FoxP3是参与T细胞向调节性T细胞分化的特异性因子。所述T细胞优选具有针对在恶性或感染细胞表面表达的至少一种抗原的嵌合抗原受体(CAR)。因此本专利技术的工程化T细胞将其免疫活性导向特定的恶性或受感染细胞，同时阻止相邻的调节性T细胞调节免疫反应。。
技术介绍
嵌合抗原受体(ChimericAntigenReceptor-Tcell，CAR-T)T细胞是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明，CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备工程T细胞的方法，包括以下步骤:/na)将包含核苷酸序列编码的外源性核酸分子引入已提供的T细胞，该核苷酸序列编码用于针对恶性或受感染细胞表面表达的至少一种抗原的第一嵌合抗原受体(CAR)；和/nb)将外源性核酸分子引入所述T细胞，该外源性核酸分子包含编码细胞穿透肽抑制剂FoxP3的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备工程T细胞的方法，包括以下步骤:
a)将包含核苷酸序列编码的外源性核酸分子引入已提供的T细胞，该核苷酸序列编码用于针对恶性或受感染细胞表面表达的至少一种抗原的第一嵌合抗原受体(CAR)；和
b)将外源性核酸分子引入所述T细胞，该外源性核酸分子包含编码细胞穿透肽抑制剂FoxP3的核苷酸序列。


2.根据权利要求1的方法，其中FoxP3的细胞穿透肽抑制剂是包含SEQIDNO：1所示氨基酸序列的多肽或其包含具有至少60％氨基酸序列的变体，例如，在编码FoxP3的细胞穿透肽抑制剂的SEQIDNO：1序列的整个长度上，与SEQIDNO：1所示的氨基酸序列具有至少80％的序列同一性。


3.根据权利要求1或2的方法，进一步包括以下步骤:
a)将外源性核酸分子引入所述T细胞，该外源性核酸分子包含一个核苷酸序列，该核苷酸序列编码用于针对调控T细胞(Treg)表面表达的至少一个抗原的第二嵌合抗原受体；
b)将含有核苷酸序列编码的外源性核酸分子引入该T细胞，该核苷酸序列编码用于一种罕见切割的内切核酸酶，该内切核酸酶可通过DNA裂解选择性失活T细胞受体(TCR)某一组分的至少一个基因编码；
c)将含有核苷酸序列编码的外源性核酸分子引入该T细胞，该核苷酸序列编码用于一种罕见切割内切酶，该内切酶可通过DNA裂解表面抗原CD25的基因编码而选择性失活；和/或
d)扩增产生的工程T细胞。


4.根据权利要求1至3中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海鹰，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31