一种混源萜类化合物及其在制备抗炎药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种混源萜类化合物及其在制备抗炎药物中的用途。该混源萜类化合物的结构如式I所示，其制备方法为将海洋来源土曲霉ML‑44发酵物经提取、分离纯化得到。本发明专利技术具有抑制LPS诱导RAW 264.7细胞NO释放的作用，该作用并不是通过抑制细胞增殖或毒性实现的，表明具有抗炎活性，因此可用作为抗炎药物用于治疗炎症性疾病，为开发新型抗炎药物提供先导化合物。

A mixed source terpenoid and its use in the preparation of anti-inflammatory drugs

The invention relates to a mixed source terpenoid and its use in the preparation of anti-inflammatory drugs. The structure of the mixed terpenoids is shown in Formula I. The preparation method is to extract, isolate and purify the fermentation product of marine Aspergillus terrestris ML_44. The invention has the effect of inhibiting NO release from RAW 264.7 cells induced by LPS, which is not achieved by inhibiting cell proliferation or toxicity, and shows anti-inflammatory activity. Therefore, it can be used as an anti-inflammatory drug in the treatment of inflammatory diseases and provides a leading compound for the development of new anti-inflammatory drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种混源萜类化合物及其在制备抗炎药物中的用途
本专利技术涉及一种混源萜类化合物及其在制备抗炎药物中的用途。
技术介绍
混源萜用于描述通过异戊烯基途径杂合其他生物合成途径形成的天然产物，具有复杂多变的结构多样性，进而显示了多种多样的生物活性。部分该类化合物已作为治疗药物用于临床，如抗肿瘤药物长春花碱、免疫抑制剂霉酚酸酯、乙酰胆碱酯酶抑制剂土震素B等。Terretonins是一类以3,5-demethylorsellinicacid（DMOA）和arnesylpyrophosphate（FPP）为合成前体的真菌来源混源萜类化合物，主要从曲霉菌发酵产物中分离得到（Guoetal.,MoleculargeneticcharacterizationofaclusterinA.terreusforbiosynthesisofthemeroterpenoidterretonin.OrgLett.2012,14:5684–5687）。截止目前，Terretonin（Springer,Terretonin,atoxiccompoundfromAspergillusterreus.JOrgChem,1979,44:4852–4854）及其结构类似物terretoninsA–D（Lietal.,Sesterterpenoids,terretoninsA-D,andanalkaloid,asterrelenin,fromAspergillusterreus.JNatProd,2005,68:1243–1246）、H–K（Matsudaetal.,UncoveringtheunusualD-ringconstructioninterretoninbiosynthesisbycollaborationofamultifunctionalcytochromeP450andauniqueIsomerase.JAmChemSoc,2015,137:3393–3401）和M（Shaabanetal.TerretoninM:AnewmeroterpenoidfromthethermophilicAspergillusterreusTM8andrevisionoftheabsoluteconfigurationofpenisimplicins.NatProdRes,2017,doi:10.1080/14786419.2017.1419230）均分离自土曲霉Aspergillusterreus发酵物中，分子中存在式I中显示的一个独特的骈四环结构母核，且天然产物的绝对构型一致，其中14-H为β取向。近期发现的两个结构类似物，“terretoninH”和“terretoninI”分离自海洋来源焦曲霉Aspergillusustus（Oleinikovaetal.,Twonewsesterterpenoids,terretoninsHandI,fromthemarine-derivedfungusAspergillusustus.PhytochemLett,2016,17:135–139），与上述化合物相比其结构特征是C-14位的绝对构型发生转变，即14-H为α取向。TerretoninsE和F作为线粒体呼吸链抑制剂分离自海洋来源真菌Aspergillusinsuetus发酵物中（Lopez-Gresaetal.,TerretoninsEandF,inhibitorsofthemitochondrialrespiratorychainfromthemarine-derivedfungusAspergillusinsuetus.JNatProd,2009,72:1348–1351），其与terretoninL属于一类特殊的terretonins亚型。中国专利CN201510244085.2报道了一种α-吡喃酮混源萜及其制备方法和应用，应用于制备抗流感病毒药物。CN107362077A仅仅一次性提到了马尾藻属植物富含甘油糖脂、植物甾醇、混源萜类、褐藻多酚、含氮化合物等成分，具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂、抗病毒等多种生物活性。因此，迄今关于terretonins活性研究报道非常少，并无报道terretonin及其类似物具有抗炎活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的混源萜类化合物及其在制备抗炎药物中的用途。该混源萜类化合物及其结构类似物具有抗炎活性，为开发新型抗炎药物提供先导化合物，用作为抗炎药物用于治疗炎症性疾病。本专利技术提供的混源萜类（terretonins）化合物如下述式I结构所示：I本专利技术涉及的式I化合物，区别于已知化合物terretoninD，其14-H为α取向。本专利技术的还涉及式I化合物、与式I化合物的结构类似物terretonin，即化合物II、terretoninA，即化合物III、terretoninD，即化合物IV单独或以组合物形式（如药学上可接受的辅助剂等）在制备抗炎药物中的用途。IIIIIIV本专利技术提供了的土曲霉（Aspergillusterreus）ML-44，其保藏编号为CGMCCNo.15664，保藏日期为2018年04月17日，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。该菌株是从太平洋牡蛎的消化道样品中分离，经分类学研究鉴定为土曲霉（Aspergillusterreus）。本专利技术提供的式I化合物及其结构类似物的制备方法包括如下步骤：将上述的土曲霉进行发酵培养，获得含有式I化合物及其结构类似物的发酵物，将发酵物进行分离纯化，得到所述化合物。也可以使用曲霉属的其它能够产生式I化合物的生产菌进行发酵培养。所述分离纯化包括利用本领域技术人员熟知的天然产物分离纯化的常规方法，如萃取、柱层析、高效液相制备等。本专利技术提供的式I化合物的具体制备方法包括如下步骤：1)将上述的土曲霉进行大米固体发酵培养，获得发酵物；2)将所得发酵物用50%-90%（v/v）的丙酮水溶液超声浸提、过滤，滤液经减压浓缩至不含丙酮，残余混悬液用乙酸乙酯萃取，得到发酵物的乙酸乙酯萃取物；3)将步骤2)得到乙酸乙酯萃取物减压浓缩至干，得到乙酸乙酯浸膏；4)将乙酸乙酯总浸膏依次用硅胶柱层析，石油醚‒二氯甲烷‒甲醇梯度洗脱、SephadexLH-20柱层析，甲醇洗脱，和ODS柱层析，水→100%甲醇梯度洗脱，分离，得到含有所述化合物的柱层析组分；5)将含有所述化合物的柱层析组分经HPLC分离。步骤2)中的丙酮水溶液为70%-90%（v/v），优选为75%-85%（v/v），更优选为80%（v/v）。本专利技术采用Griess法，对式I化合物及其上述结构类似物对LPS诱导RAW264.7细胞NO释放的抑制作用进行了测试。经实验证实，式I化合物及上述结构类似物可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞NO的释放，因而具有抗炎作用。本专利技术的还提供了土曲霉ML-44的发酵物的提取物，所述提取物含有本专利技术的式I化合物及其结构类似物。具体地，所述提取物为土曲霉ML-44发酵物的乙酸乙酯萃取物、乙酸乙酯总浸膏、或者层析组分。所述提取物可以参照上面本专利技术的化合物的制备方法的相应步骤制得。具体地本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于抗炎的混源萜类化合物，其特征在于具有如下所示的结构：

【技术特征摘要】
1.一种用于抗炎的混源萜类化合物，其特征在于具有如下所示的结构：I以及IIIIIIV。2.权利要求1所述的混源萜类化合物的制备方法，其特征在于它是从土曲霉（Aspergillusterreus）ML-44的发酵培养物中制备分离得到的，具体步骤如下：1）将土曲霉（Aspergillusterreus）ML-44进行发酵培养，获得发酵物；2）将发酵物用乙酸乙酯提取，得到乙酸乙酯浸膏；3）将步骤2）中得到的乙酸乙酯总浸膏依次用硅胶柱层析、SephadexLH-20柱层析和ODS柱层析分离，得到含有所述化合物的柱层析组分；4）将含有所述化合物的柱层析组分经HPLC纯化。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于制备土曲霉（Aspergillusterreus）ML-44的发酵培养物的步骤是：按微生物培养的常规方法，从曲霉菌（Aspergillusterreus）ML-44试管斜面，在无菌条件下用接种环刮取适量孢子，划线接种于新配制的5个PDA固体培养基平板上，其中，固体培养基的质量组成为：葡萄糖2%、琼脂2%、NaCl1.5%，用20%土豆的水煮液配制，28...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴长景，刘晓萌，崔香，杨明生，李博，宋亚杰，
申请(专利权)人：周口师范学院，
类型：发明
国别省市：河南,41