一种杜松烷倍半萜类化合物及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及杀虫剂领域，具体地说是一种海藻附生真菌来源的杜松烷倍半萜类化合物及其制备方法和在杀虫方面的应用。具体结构式如(I)所示，其制备方法为将海藻附生真菌绿木霉(Trichoderma virens)Y13‑3接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经分离纯化后，即为式(I)所示的杜松烷倍半萜类化合物。本发明专利技术获得的杜松烷倍半萜类化合物，经杀虫活性实验得出化合物对卤虫的半数致死浓度为21微克/毫升。

A terpenes sesquiterpene compound and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种杜松烷倍半萜类化合物及其制备和应用
本专利技术涉及杀虫剂领域，具体地说是一种海藻附生真菌来源的杜松烷倍半萜类化合物及其制备方法和在杀虫方面的应用。
技术介绍
随着化学合成农药使用时间的推移，其产生的不良影响已越来越突出。化学农药大规模地生产和无限制地大量使用，使70％-80％的农药直接渗透到环境中，残留非常严重，对土壤、地表水、地下水造成污染，并进一步进入生物链，对生物和人类健康都造成直接和潜在的危害。我国加入世界贸易组织后，因化学农药残留而导致的″绿色壁垒″严重制约着我国农产品的出口，传统农业面临着更大的风险和挑战。农业部已从2001年起在全国范围内实施″无公害食品行动计划″，而使用无公害农药又是实施这一目标的关键措施，于是人们把目光投向对环境更友好的生物农药。与传统的化学合成药物相比，生物农药具有对人畜和非靶标生物安全，环境兼容性好，不易产生抗性等优点。生物农药的开发应用对人类健康，环境保护和农业的可持续发展都具有极其重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种杜松烷倍半萜类化合物及其制备和应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种杜松烷倍半萜类化合物，杜松烷倍半萜类化合物结构如式(I)所示一种杜松烷倍半萜类化合物的制备方法，将绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经纯化后，即为式(I)所示的杜松烷倍半萜类化合物；所述的绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3于2018年1月10日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCM2018016；具体制备步骤：1)将绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3接种于真菌培养基中发酵10-60天，而后经有机溶剂提取并浓缩，即为粗提物；2)取步骤1)中的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；3)收集步骤2)中洗脱组分再依次经反相硅胶柱层析、凝胶柱层析和薄层层析分离纯化，即得如式(I)所示的杜松烷倍半萜类化合物。所述步骤1)中真菌培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基、大米固体培养基、麦芽汁培养基或菊芋葡萄糖液体培养基；优选为：马铃薯葡萄糖液体培养基。有机溶剂提取液为二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇中一种或几种，优选为：乙酸乙酯。。所述步骤2)中的有机溶剂为体积比50-0∶1的石油醚-乙酸乙酯、石油醚-乙醇、石油醚-丙醇、石油醚-异丙醇、二氯甲烷-乙酸乙酯、二氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-乙醇、二氯甲烷-丙醇、二氯甲烷-异丙醇一组或几组。所述步骤3)所述反相硅胶柱层析洗脱液为体积比5-0∶1的水-甲醇或水-乙醇；凝胶柱层析洗脱液为体积比2-0∶1的二氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙醇；薄层层析展开剂为体积比为10-0∶1的石油醚-乙酸乙酯、石油醚-乙醇或二氯甲烷-乙酸乙酯。所述步骤3)各层析后经TLC检测，均收集红色斑点的组分。一种杜松烷倍半萜类化合物的应用，所述的杜松烷倍半萜类化合物在用于制备杀虫剂中的应用。本专利技术具有以下优点：本专利技术通过分离于海洋红藻真江蓠表面的绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3发酵经提取、分离获得的杜松烷倍半萜类化合物，经杀虫活性实验得出杜松烷倍半萜类化合物对卤虫的半数致死浓度为21微克/毫升。具体实施方式：下面结合实施实例对本专利技术做进一步阐述。实施例1海藻附生真菌来源的杜松烷倍半萜类化合物结构如式(I)所示。该化合物具有以下理化和波谱特性：无色油状；比旋光度[α]22D-164(c0.22，MeOH)；核磁共振氢谱(溶剂为氘代二甲基亚砜)δH1.80(m)，3.78(td，9.5，6.0)，2.67(dd，17.4，5.5)，1.97(m)，6.78(brs)，1.81(m)，1.35(brt，11.1)，1.77(m)，1.09(qd，12.7，4.4)，2.30(brd，11.5)，1.94(m)，2.12(m)，0.73(d，6.9)，0.91(d，6.9)，4.95(brs)，4.79(brs)；核磁共振碳谱(溶剂为氘代二甲基亚砜)δC50.5(CH)，65.9(CH)，34.8(CH2)，130.5(C)，135.6(CH)，45.3(CH)，45.9(CH)，26.6(CH2)，36.5(CH2)，148.4(C)，168.9(C)，26.5(CH)，14.9(CH3)，21.2(CH3)，106.2(CH2)；高分辨质谱[M]+m/z250.1568，计算值250.1569。实施例2如式(I)所示的杜松烷倍半萜类化合物的制备方法：取平板上生长良好的绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3菌种，切成小块并接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，每1升三角瓶中放300毫升培养基，共200瓶，室温静止发酵30天，而后用乙酸乙酯提取三次，减压浓缩，浓缩后得粗提物27.2克。所述马铃薯葡萄糖液体培养基组成为每升含100克土豆的煮汁500毫升，葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母浸粉5克，陈海水500毫升。绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3菌种于2018年1月10日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，地址：中国武汉大学，保藏编号为CCTCCM2018016，分类命名为Trichodermavirens，株号为Y13-3。将粗提物经200-300目的硅胶柱层析，依次用石油醚-乙酸乙酯以体积比50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1到1∶1和二氯甲烷-甲醇20∶1、10∶1、5∶1到1∶1的梯度进行洗脱，分别收集洗脱液，收集的各组分再用薄层层析(TLC)检测(体积比20-0∶1的石油醚-乙酸乙酯展开，茴香醛-硫酸作为显色剂)，根据Rf值来判断、合并相同或类似部分，获得10个组分(1-10)。将Rf值为0.5-0.6(乙酸乙酯，硫酸-茴香醛显色)组分6，即以体积比1∶1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱下的组分再依次经反相C18硅胶柱、SephadexLH-20凝胶柱和薄层层析分离。反相C18硅胶柱层析洗脱液为体积比1∶1的水-甲醇，TLC检测(体积比1∶1的石油醚-乙酸乙酯展开，硫酸-茴香醛显色)，收集红色斑点的组分；收集组分经SephadexLH-20凝胶柱层析时洗脱液为甲醇，TLC检测(体积比1∶1的石油醚-乙酸乙酯展开，硫酸-茴香醛显色)，收集红色斑点的组分；收集组分经制备薄层层析，体积比1∶1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，收集Rf值为0.5-0.6的组分，即为式(I)所示化合物(6.7毫克)，经TLC检测(乙酸乙酯，硫酸-茴香醛显色)，呈单个、均匀红色斑点，确定为纯化合物。经波谱分析，其结构鉴定为一种新的杜松烷倍半萜类化合物，结构式如(I)所示。实施例3与实施例2不同之处在于取平板上生长良好的绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3菌种，切成小块并接种于菊芋葡萄糖液体培养基中，每1升三角瓶中放300毫升培养基，共100瓶，室温静止发酵40天，过滤并分别收集菌丝体和发酵液。所述菊芋葡萄糖液体培养基组成为每升含100克菊芋块茎的煮汁500毫升，葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母浸粉5克，陈海水500毫升。收集发酵液约30升，用乙酸乙酯萃取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杜松烷倍半萜类化合物，其特征在于：杜松烷倍半萜类化合物结构如式(I)所示

【技术特征摘要】
1.一种杜松烷倍半萜类化合物，其特征在于：杜松烷倍半萜类化合物结构如式(I)所示2.一种权利要求1所述的杜松烷倍半萜类化合物的制备方法，其特征在于：将绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3接种于真菌培养基中发酵培养，发酵产物经纯化后，即为式(I)所示的杜松烷倍半萜类化合物；所述的绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3于2018年1月10日保存于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCM2018016；3.按权利要求2所述的杜松烷倍半萜类化合物的制备方法，其特征在于具体制备步骤：1)将绿木霉(Trichodermavirens)Y13-3接种于真菌培养基中发酵10-60天，而后经有机溶剂提取并浓缩，即为粗提物；2)取步骤1)中的粗提物进行硅胶柱层析，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；3)收集步骤2)中洗脱组分再依次经反相硅胶柱层析、凝胶柱层析和薄层层析分离纯化，即得如式(I)所示的杜松烷倍半萜类化合物。4.按权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：季乃云，时振振，
申请(专利权)人：中国科学院烟台海岸带研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37