一种利用重组谷氨酸棒杆菌全细胞转化生产9-OH-AD的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌全细胞转化生产9‑OH‑AD的方法，属于生物工程和生物技术领域。本发明专利技术通过大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19，将来源于Mycobacterium sp.Strain VKM Ac‑1817D的3‑甾酮9α‑羟基化酶的氧化亚基KshA，还原亚基KshB成功在C.glutamicum ATCC13032中共表达。以此工程菌全细胞菌体作为生物催化剂，转化生产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮，底物雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮的摩尔转化率达到99.5％。本发明专利技术方法生产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮具有效率高，专一性强,能耗低等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种利用重组谷氨酸棒杆菌全细胞转化生产9-OH-AD的方法
本专利技术涉及一种利用重组谷氨酸棒杆菌全细胞转化生产9-OH-AD的方法，属于生物工程和生物

技术介绍
甾体化合物是广泛存在于生物体组织内的一类重要的天然有机化合物，由于甾体类药物具有多种生理功能并发挥独特疗效，故在临床上有广泛的应用。甾体化合物是仅次于抗生素的第二大类药物，年增长率在15％以上。甾类化合物通常具有一系列独特的生理功能，这主要是由于甾体化合物母核上取代基、双键位置或立体构型的不同。甾类化合物拥有类似的结构且结构复杂数目繁多，普遍存在于动、植物组织和某些微生物中，比较常见的有动物组织中的胆固醇、胆酸、性激素、肾上腺皮质激素、孕酮和雄酮等植物中的薯预皂素和谷甾醇等以及酵母细胞中的麦角固醇等。9-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9-OH-AD)具有9-羟基结构，可借助常规甾体化学合成手段形成C9，11-双键体系，从而很方便地在C9位引入一个卤素原子形成糖皮质激素必不可缺少的功能羟基。9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9α-OH-AD)是一种重要的甾体药物中间体，其9α位作为被羟基化的位点，在进行简本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，通过大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19表达了3‑甾酮9α‑羟基化酶氧化酶和3‑甾酮9α‑羟基化酶还原酶。

【技术特征摘要】
1.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，通过大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19表达了3-甾酮9α-羟基化酶氧化酶和3-甾酮9α-羟基化酶还原酶。2.根据权利要求1所述的一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述重组谷氨酸棒杆菌是以C.glutamicumATCC13032为宿主。3.根据权利要求1或2所述的一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，3-甾酮9α-羟基化酶氧化酶和3-甾酮9α-羟基化酶还原酶来源于Mycobacteriumsp.StrainVKMAc-1817D。4.根据权利要求3所述的一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，编码所述3-甾酮9α-羟基化酶氧化酶、3-甾酮9α-羟基化酶还原酶的基因的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示。5.一种构建权利要求1～4任一所述重组谷氨酸棒杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)设计引物，PCR扩增编码3-甾酮9α-羟基化酶的基因，(2)克隆3-甾酮9α-羟基化酶KSH的氧化亚基和还原亚基基因全序列，(3)构建重组表达载体pXMJ19-kshA-kshB，(4)将重组质粒pMJ19-kshA-kshB转化模式菌株C.glutamicumATCC13032，将经验证构建成功的重组质粒pMJ19-kshA-kshB通过电击转化法转化至模式菌株C.glutamicumATCC13032中；获得重组菌株C.glutamicumATCC13...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，沙宗焱，哈婧雯，燕宇，刘昭君，樊佳慧，高梦昕，邵明龙，张显，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32