本发明专利技术公开了一种TLR5激活剂用于激活抗原提呈细胞进而增强肿瘤细胞疫苗免疫原性的用途。本发明专利技术发现，12,15‑顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素和莫垂林通过升高抗原提呈细胞(树突状细胞DC)中TLR5的表达水平显著提高抗原提呈细胞表面标志物的含量，具有激活抗原提呈细胞的作用；本领域技术人员知道，激活抗原提呈细胞可以增强肿瘤细胞疫苗的免疫原性，提高肿瘤细胞疫苗的免疫效果，因此上述化合物可以用作肿瘤细胞疫苗的免疫佐剂。
【技术实现步骤摘要】
一种TLR5激活剂用于激活抗原提呈细胞进而增强肿瘤细胞疫苗免疫原性的用途
本专利技术属于生物领域，涉及一种TLR5激活剂用于激活抗原提呈细胞进而增强肿瘤细胞疫苗免疫原性的用途。
技术介绍
机体抗肿瘤免疫应答主要由细胞免疫介导，而细胞免疫应答的启动则需要抗原提呈细胞(APC)将抗原递呈给T细胞，使初始型T细胞增殖活化以发挥其抗肿瘤活性。肿瘤免疫过程大致分为3步：1)APC加工处理并递呈抗原；2)肿瘤抗原特异性或非特异性T细胞的活化；3)抗原特异性的细胞毒性T细胞(cytotoxiclymphocyte，CTL)向肿瘤部位移行，发挥特异性抗肿瘤效应。APC作为机体最基础的免疫应答细胞，在机体的免疫识别、免疫应答与免疫调节中起重要作用，APC细胞通过表达重要的表面蛋白：CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ和分泌重要的具有抗肿瘤作用的细胞因子IL-12、TNF-α等起作用。所以，对天然免疫中APC细胞的研究是抗肿瘤免疫的基础，激活抗原提呈细胞可以增强肿瘤细胞疫苗免疫原性。Toll样受体5(toll-likereceptor5，TLR5)是toll样受体家族中的一员，是一类最具有特征性的模式受体分子，能募集多种配体蛋白，激发信号转导，导致一些特异性转录因子的活化。研究表明，激活TLR5有助于促进机体免疫细胞的活化。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种TLR5激活剂用于激活抗原提呈细胞进而增强肿瘤细胞疫苗免疫原性的用途。本专利技术技术方案如下：如下化合物用作抗原提呈细胞TLR5表达激活剂的用途。进一步地，所述抗原提呈细胞为树突状细胞。上述化合物用于制备抗原提呈细胞激活剂的用途。进一步地，所述抗原提呈细胞为树突状细胞。上述化合物用于制备肿瘤细胞疫苗免疫佐剂的用途。有益效果：本专利技术发现，12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素和莫垂林通过升高抗原提呈细胞(树突状细胞DC)中TLR5的表达水平显著提高抗原提呈细胞表面标志物的含量，具有激活抗原提呈细胞的作用；本领域技术人员知道，激活抗原提呈细胞可以增强肿瘤细胞疫苗的免疫原性，提高肿瘤细胞疫苗的免疫效果，因此上述化合物可以用作肿瘤细胞疫苗的免疫佐剂。附图说明图1为药物干预对DC2.4细胞中TLR5mRNA表达水平的影响；图2为药物干预对DC2.4细胞表面CD80表达量的影响；图3为药物干预对DC2.4细胞表面CD86表达量的影响；图4为药物干预对DC2.4细胞表面MHC-Ⅰ表达量的影响；图5为药物干预对DC2.4细胞表面MHC-Ⅱ表达量的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、实验材料DC2.4细胞系购自上海素尔生物科技有限公司。LPS和弗式完全佐剂购自Sigma公司；流式抗体PEanti-mouseH-2Kb(MHC-Ⅰ)、PEanti-mouseI-A/I-E(MHC-Ⅱ)、PEanti-mouseCD80、PEanti-mouseCD86、PEanti-mouseIL-10、PEanti-mouseIL-12、PEanti-mouseTNF-α购自Biolegend公司。12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素和莫垂林自制或购买，纯度不低于95％。二、实验方法1、细胞培养DC2.4细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基于含5％CO2的37℃细胞培养箱中培养，待细胞生长到对数生长期时使用。2、分组及药物干预实验设有如下组别：阴性对照组、阳性对照组、不同药物干预组。收集对数期的DC2.4细胞，调整细胞数为2×106/ml，铺于96孔板中，每孔100μl，24h后弃掉旧培养液，分别加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，药物干预组加入12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素或莫垂林的溶液20μl并使药物终浓度为10μM，阳性对照组加入20μl的LPS6μg/ml，阴性对照组加入20μl含10％胎牛血清的DMEM，每孔溶液终体积为120μl，每组均设3个复孔。3、RT-PCR测定DC2.4细胞中TLR5mRNA表达水平继续培养48h后，收集细胞，PBS洗涤。采用TRIZOL一步法提取总RNA。取总RNA3μg，采用RevertAidTM逆转录试剂盒完成逆转录。反应总体积为50μL，其中10×Taqbuffer5.0μL，MgCl2(25mmol/L)5.0μL，dNTPMix(10mmol/L)2μL，TLR5及GAPDH上、下游引物(10μmol/L)各1μL，cDNA5μL，Taq酶(5U/μL)0.5μL，补足双蒸水至50μL。反应条件为：95℃预变性5min，94℃变性40s，55℃退火60s，72℃延伸60s，72℃终末延伸10min，共30循环。引物序列为：TLR5上游：5'-CGGGTGCAGGCATTCCAGAG-3'；TLR5下游：5'-CTCCGTGGGACAGAGAGGAC-3'；GAPDH上游：5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'；GAPDH下游：5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。电泳后，用凝胶成像系统进行扫描拍照，分析目的条带的灰度值，按TLR5灰度值/GAPDH灰度值的比值计算TLR5mRNA的相对含量。4、流式细胞仪检测DC2.4细胞表面标志物继续培养48h后，收集细胞，用PEanti-mouseH-2Kb(MHC-Ⅰ)、PEanti-mouseI-A/I-E(MHC-Ⅱ)、PEanti-mouseCD80、PEanti-mouseCD86染色，于4℃避光染色30min；用PBS清洗1次，弃上清，加1mlPBS重悬细胞并收集于1.5ml离心管中，用移液枪轻轻吹匀，用GuavaSoft流式细胞仪进行检测。三、实验结果1、12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素和莫垂林对DC2.4细胞中TLR5mRNA表达水平的影响结果如表1和图1所示。与阴性对照组相比，12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素或莫垂林干预组DC2.4细胞中TLR5mRNA表达水平显著上升，差异有统计学意义(P＜0.05)。表1药物干预对DC2.4细胞中TLR5mRNA表达水平的影响2、12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素和莫垂林对DC2.4细胞表面标志物的影响结果如表2-3和图2-5所示。与阴性对照组相比，12,15-顺式番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭甲、番荔枝塔亭丁、泡番荔枝辛、番荔辛、去乙酰紫玉盘素、去乙酰异紫玉盘素或莫垂林干预组DC2.4细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达量均显著增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。而且，DC2.4细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达量的增加幅度与TLR5mRNA表达水平的升高幅度存在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.泡番荔枝辛或番荔辛用作抗原提呈细胞TLR5表达激活剂的用途。
【技术特征摘要】
1.泡番荔枝辛或番荔辛用作抗原提呈细胞TLR5表达激活剂的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述抗原提呈细胞为树突状细胞。3.权利要求1所述的化合物用...
【专利技术属性】
技术研发人员：何英广，马思航，
申请(专利权)人：淮安诺康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。