一种淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方法技术

本发明专利技术公开了一种淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方法，将脐血单个核细胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基(10％FCS‑RPMI 1640)调制至2×10

A rapid activation method for lymphokine activated killer cells LAK

The invention discloses a fast activation method of lymphokine activated killer cell LAK, which modulates cord blood mononuclear cells to 2 *10 using RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum (10% FCS RPMI 1640).

【技术实现步骤摘要】
一种淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方法
本专利技术属于生物领域，涉及一种淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方法。
技术介绍
免疫治疗是新兴的一种肿瘤治疗方式，已经被列为继手术、放疗、化疗后的第四种治疗方式，在肿瘤的综合治疗中逐渐发挥重要作用。2010年，美国FDA批准世界上第一个细胞免疫治疗产品Provenge上市，充分显示出细胞免疫治疗在肿瘤治疗中的价值。淋巴因子激活杀伤细胞(LAK)是在20世纪80年代由Rosenberg等研发的，其实质是IL-2激活的具有杀瘤活性的NK和T细胞。1984年11月Rosenberg研究组经美国FDA批准，首次将LAK细胞用于临床治疗。该疗法对转移性肾细胞癌、黑色素瘤、结肠癌和非霍奇金淋巴瘤患者的疗效较显著。但LAK杀伤力不强，临床应用需要大量输注。而且其扩增能力有限，需要在输注细胞的同时大剂量应用IL-2，从而导致明显的毒副作用，最常见和最严重的毒副作用是毛细血管渗漏综合征，主要表现为全身性水肿和多器官功能失调，可引起胸腹腔积液、肺间质水肿和充血性心力衰竭。目前，LAK细胞要经过体外培养至少3～7天，流程长，费用昂贵，易污染，使临床应用受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方法，在培养基中添加rIL‑2，其特征在于：在培养基中还添加激活剂酶解多肽A。

【技术特征摘要】
1.一种淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方法，在培养基中添加rIL-2，其特征在于：在培养基中还添加激活剂酶解多肽A。2.根据权利要求1所述的快速激活方法，其特征在于，具体步骤为：将脐血单个核细胞用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基(10％FCS-RPMI1640)调制至2×106/mL，根据细胞总数接种于不同容量的培养容器中，同时加入终浓度为40-60μg/mL的酶解多肽A以及500IU/mL的rIL-2，置于37℃、5％CO2条件下培养24h；酶解多肽A的制备方法为：将脱脂的小麦胚芽粉经木瓜蛋白酶+中性蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶处理得到小麦胚芽的酶解液，冷却后，离心，上清冷冻干燥得冻干粉。将冻干粉用超纯水溶解，然后依次用截留分子量为10000u、7000u的超滤膜对所得到的酶解液冻干粉进行分离，将超滤所得10000u～7000u组分冷冻干燥得到酶解多肽A。3.根据权利要求2所述的快速激活方法，其特征在于，酶解条件为：经木瓜蛋白酶(酶活力为80万U/g)+中性蛋白酶(酶活力为20万U/g)在复合配比3:1、pH为6.0、温度55℃、...

【专利技术属性】
技术研发人员：何英广，马思航，
申请(专利权)人：淮安诺康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32