一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法技术

一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‐CIK的方法，本发明专利技术涉及一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‐CIK的方法。本发明专利技术的目的是为了提高诱导DC‑CIK细胞方法的细胞扩增能力及抗原递呈能力，本发明专利技术采用将抗CD3McAb预先包被用于培养DC‑CIK细胞的培养瓶，去除并反复洗涤后，再加入分离获得的单个核细胞，并且使用极少的培养液用于早期培养。这样可以大大提高CTC细胞于单个核细胞的接触几率，提高DC细胞对肿瘤的抗原递呈能力。将已捕获细胞进行原位培养进一步提高了CTC的纯度。解决了由于CTC的数量过少，而降低DC细胞对肿瘤细胞的抗原递呈能力。本发明专利技术应用于细胞培养领域。

A method for efficiently inducing DC-CIK by combining CD3McAb and CTC

The invention relates to a method for efficiently inducing DC CIK by combining anti-CD3McAb with CTC, and relates to a method for efficiently inducing DC CIK by combining anti-CD3McAb with CTC. The purpose of the present invention is to improve the ability of cell expansion and antigen presentation of the method of inducing DC_CIK cells. The method adopts a culture flask in which anti-CD3McAb is pre-packaged for culturing DC_CIK cells. After removal and repeated washing, the separated mononuclear cells are added, and very little culture medium is used for early culture. Raise. This can greatly improve the contact probability of CTC cells with mononuclear cells and enhance the antigen presentation ability of DC cells to tumors. The purity of CTC was further improved by in situ culture of the captured cells. The ability of DC cells to antigen presentation of tumor cells was reduced due to the low number of CTC. The invention is applied to the field of cell culture.

【技术实现步骤摘要】
一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法
本专利技术涉及一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法。
技术介绍
恶性肿瘤之所以成为世界性难治愈的疾病，主要是疾病自身的复杂性和治疗技术的局限性。目前临床中治疗肿瘤的疗法大多是传统的“老三样”：手术治疗、放射治疗、化学疗法。传统疗法对人体危害大，而且无法彻底杀死恶性肿瘤细胞、阻止不了恶性肿瘤细胞扩散；患者自身免疫力低下无法得到提升。从而造成恶性肿瘤无法有效治疗，而且对患者自身带来较大的毒副作用。肿瘤细胞生物免疫治疗技术利用自体外周血中的肿瘤细胞制成抗原并诱导自身外周血单个核细胞经体外诱导培养而制备的杀伤肿瘤的细胞。DC细胞，即树突状细胞，当负载有肿瘤抗原信息的DC细胞输入人体后，将肿瘤信息传递给肿瘤细胞，使其具有识别能力，充分调动，有效杀灭肿瘤细胞而不损伤任何正常组织，特别擅长清除残留、转移微小病灶，防止癌细胞扩散和复发，同时能够提升机体免疫力的一种新型生物细胞疗法。肿瘤细胞生物免疫治疗技术优势：①CIK细胞增殖速度快，细胞数量大，细胞活性强。②CIK细胞具有识别肿瘤的机制，对正常的细胞无毒性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‑CIK的方法，其特征在于该方法为：一、用抗CD3McAb对用于DC‑CIK培养的器皿进行预处理：用无菌生理盐水配制浓度为15‑25μg/ml的抗CD3McAb溶液，然后过滤除菌，保存于‑80℃；取抗CD3McAb溶液涂覆细胞培养瓶内表面，4℃过夜；再用无菌生理盐水洗涤，得到预处理后的培养瓶A和B；二、分离外周血单个核细胞；三、另取外周血，利用试剂盒捕获CTC细胞，然后进行原位培养3‑5d；四、取步骤二分离的单个核细胞(1‑3)×107个加入到预处理后的培养瓶A中，然后用含自体血浆的DC‑CIK培养液补至45‑50mL，放置培养箱中孵育2‑...

【技术特征摘要】
1.一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法，其特征在于该方法为：一、用抗CD3McAb对用于DC-CIK培养的器皿进行预处理：用无菌生理盐水配制浓度为15-25μg/ml的抗CD3McAb溶液，然后过滤除菌，保存于-80℃；取抗CD3McAb溶液涂覆细胞培养瓶内表面，4℃过夜；再用无菌生理盐水洗涤，得到预处理后的培养瓶A和B；二、分离外周血单个核细胞；三、另取外周血，利用试剂盒捕获CTC细胞，然后进行原位培养3-5d；四、取步骤二分离的单个核细胞(1-3)×107个加入到预处理后的培养瓶A中，然后用含自体血浆的DC-CIK培养液补至45-50mL，放置培养箱中孵育2-3d，然后将培养瓶A中的培养液转移至另一预处理后的培养瓶B中，培养11d；再用含自体血浆的DC-CIK培养液补至45-50mL，培养8d，即完成利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法；其中培养瓶A培养第3-5天时，补充IL-4、GM-CSF，培养第6天补充步骤三培养的CTC细胞，培养第7天补充TNF-α；培养瓶B培养第1一天，补充IFN-r，培养第2、3、4、6和10天补充IL-2、IL-1α。2.根据权利要求1所述的一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法，其特征在于步骤一用无菌生理盐水配制浓度为20μg/ml的抗CD3McAb溶液。3.根据权利要求1所述的一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法，其特征在于步骤一中用无菌生理盐水洗涤至洗涤后的生理盐水与考马斯亮蓝G250无颜色反应。4.根据权利要求1所述的一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法，其特征在于步骤二分离外周血单个核细胞的方法为：(1)、将采集的外周血2000rpm离心沉淀8-10分钟，收集上层血浆25mL加入500mLRPMI-1640中备用；将血球沉淀物，加生理盐水混悬至50mL，得到悬液；(2)、将悬液用吸管沿管壁加到已预先加入3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琳娜，张怡，刘煜，李妍，刘艳青，
申请(专利权)人：天晴干细胞股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23