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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂领域,具体涉及一种用于治疗ed的spl复合制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、性健康和勃起质量不仅是个人生活质量的关键组成部分,也是其伴侣的精神、情感和身体健康的关键组成部分。勃起功能障碍(erectile dysfunction,ed)是成年男性最常见的疾病之一。ed的诱因很多,抑郁、焦虑、年龄及其他性障碍均可促使ed的产生。其中,年龄是ed最常见的危险因素,ed的患病率和严重程度随着年龄的增长而增加。年龄相关的性腺功能减退、阴茎组织老化和形态变化可能为主要原因。同时,随着患者年龄的增长,心血管疾病、高血压、糖尿病和代谢综合征也会影响多个器官与系统的功能,进而导致勃起功能加速恶化。
2、阴茎勃起是一系列与海绵体内皮和平滑肌细胞密切相关的血管事件,它们在组织学上形成了窦的基本结构。当平滑肌收缩时,通过海绵体动脉血流减少,海绵体压力下降,静脉开放,大量血液流出,导致阴茎处于松弛状态。性刺激后,非肾上腺素能非胆碱能神经纤维会释放一氧化氮(no),进而激活鸟苷酸环化酶以增加环状鸟苷单磷酸(cgmp)的浓度。此外,副交感胆碱能神经纤维释放的乙酰胆碱可引起腺苷酸环化酶的激活,增加环磷酸腺苷(camp)的浓度。高水平的cgmp和camp降低了细胞内ca2+水平,导致平滑肌细胞舒张,海绵体血管窦扩张,动脉血流量增加,最终实现海绵体充血胀大而勃起。此过程中的任何一个步骤改变,则可能发生ed。目前治疗ed的疗法主要为口服5型磷酸二酯酶抑制剂(pde5i)药物,但此方法只是暂时缓解,无法改变疾病进展,且长期服用
3、富血小板血浆疗法是治疗生殖及泌尿系统疾病的潜在恢复疗法。富血小板血浆疗法中应用的成分主要为富血小板血浆(prp)及其衍生物。prp已被证明可以刺激和加速损伤组织愈合,目前已经应用于骨科/肌肉骨骼损伤、心脏手术、整形外科、皮肤科等领域。prp中血小板激活后可释放多种生长因子,包括血管内皮生长因子(vegf)、血小板源性生长因子(pdgf)、表皮生长因子(egf)、胰岛素样生长因子(igf)和成纤维细胞生长因子(fgf)等。丰富的生长因子和细胞因子可以影响炎症、血管生成和细胞增殖,从而促进愈合。临床前和临床试验结果表明,prp能够改善勃起功能,但其治疗效果并不理想。
技术实现思路
1、本专利技术是要解决现有富血小板血浆治疗ed的效果差的问题,提供一种用于治疗ed的spl复合制剂及其制备方法和应用。
2、本专利技术的spl复合制剂包括spl和脐带间充质干细胞外泌体,所述spl是在超重环境下制备的超活化血小板裂解液,所述脐带间充质干细胞外泌体是由微重力三维环境下培养的脐带间充质干细胞中提取得到的。
3、本专利技术spl复合制剂的制备方法,包括以下步骤:
4、将spl与脐带间充质干细胞外泌体按照体积比1:(1-2)混匀制成spl复合制剂;所述spl是在超重环境下制备的,所述脐带间充质干细胞外泌体是由微重力三维环境下培养的脐带间充质干细胞中提取得到的。
5、进一步的,所述spl的制备方法为:
6、一、对大鼠进行全血采集,利用全血进行血小板的富集;
7、二、向富集的血小板中添加cacl2和ⅲ型胶原,置于-80℃冻存8-12h后,37℃解冻5-8min,如此反复冻融5-10次,将最后一次解冻后的液体于3000×g离心15-20min,获得血小板裂解液(pl);其中富集的血小板中cacl2的浓度为20-30mm,ⅲ型胶原的浓度为15-25μg/ml;
8、三、将步骤二得到的血小板裂解液置于2-3g超重环境下15-20min,获得spl。
9、所述血小板的富集方法为:将采集的全血于4℃条件下转移至分离室,将混匀后的全血以300×g离心15-20min来收集富含血小板的血浆,取出离心后的全部血浆,然后将血浆以1000×g再次离心20-25min,留取下层富集的血小板,保证其体积是全血体积的1/10,利用移液器吹打底部充分悬起贴于离心管底部的血小板沉淀。
10、进一步的,所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为:
11、步骤1:自脐带组织中分离华通氏胶,再分离得到脐带间充质干细胞;
12、步骤2:取p1代脐带间充质干细胞,纯化后接种于完全培养基中,在gravite微重力模拟器中培养,参数设置为10-3g,然后将gravite微重力模拟器置于37℃,95%湿度培养箱中培养;
13、步骤3:脐带间充质干细胞培养至第三代,待细胞贴壁至60%时换为相应的无外泌体培养基继续培养,待细胞生长至90%时,收取上清液,提取外泌体。
14、完全培养基配方:mem基础培养基+5%helios血清替代物+2iu/ml肝素钠+1%青霉素链霉素。
15、所述无外泌体培养基的制备方法为:完全培养基以4℃、100000×g超速离心16-17h后,收集上层2/3体积的培养基,即为无外泌体培养基。
16、本专利技术spl复合制剂在制备治疗勃起功能障碍的药物中的应用。
17、本专利技术的有益效果:
18、本专利技术将prp进行物理化学方法激活后,利用超重环境进一步激活,获得spl。利用微重力环境进行umscs培养,并提取其外泌体。此spl与mscs外泌体联合应用,进行ed修复,提高了vegf、pdgf、egf、bfgf及igf-1等ed修复因子含量。
19、(1)本专利技术中血小板富集采用两步离心法进行,第一步为150-500×g离心15min,利用低转速将血浆和血细胞分开,保证血小板留在血浆内而不沉入血细胞中;收取第一步离心的全部血浆进行第二次离心,离心条件为900-1300×g离心20min,使血小板尽可能沉降于管底及底层血浆中,使上层血小板含量较低,增强血小板浓缩效率。
20、(2)本专利技术中spl由cacl2和iii型胶原激活及反复冻融裂解后,又置于2-3g超重特殊环境下活化15min,进一步激活血小板,促进勃起功能相关生长因子的特异性释放,并增加有效因子的浓度,从而增强ed的修复效果。
21、(3)本专利技术将umscs置于微重力三维环境下培养,使umscs所分泌的外泌体中调节勃起功能相关的vegf和igf-1生长因子含量增多,通过调节内皮细胞功能和血管损伤修复,从而起到特异性改善ed的作用。
22、(4)本专利技术提取微重力三维培养环境中的umscs外泌体,其可下调海绵体中抑制勃起功能的mir-200a表达,上调enos表达,进而通过enos/no/pkg通路调控勃起功能,起到缓解和改善ed的作用。
23、(5)本专利技术spl注射制剂由spl与umscs-exo组合而成。利用超重和微重力特殊环境,进行血小板和细胞特异性处理,获得高浓度ed修复特异性因子。该本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于治疗ED的sPL复合制剂,其特征在于,该sPL复合制剂包括sPL和脐带间充质干细胞外泌体,所述sPL是在超重环境下制备的超活化血小板裂解液,所述脐带间充质干细胞外泌体是由微重力三维环境下培养的脐带间充质干细胞中提取得到的。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗ED的sPL复合制剂,其特征在于,所述sPL与脐带间充质干细胞外泌体的体积比为1:(1-2)。
3.如权利要求1所述的sPL复合制剂的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
4.根据权利要求3所述的sPL复合制剂的制备方法,其特征在于,所述sPL的制备方法为:
5.根据权利要求4所述的sPL复合制剂的制备方法,其特征在于,所述血小板的富集方法为:将采集的全血于4℃条件下转移至分离室,将混匀后的全血以300×g离心15-20min来收集富含血小板的血浆,取出离心后的全部血浆,然后将血浆以1000×g再次离心20-25min,留取下层富集的血小板,保证其体积是全血体积的1/10,利用移液器吹打底部充分悬起贴于离心管底部的血小板沉淀。
6.根据权利要求4所
7.根据权利要求3所述的sPL复合制剂的制备方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为:
8.根据权利要求7所述的sPL复合制剂的制备方法,其特征在于,所述完全培养基配方为:MEM基础培养基+5%Helios血清替代物+2IU/mL肝素钠+1%青霉素链霉素。
9.根据权利要求7所述的sPL复合制剂的制备方法,其特征在于,所述无外泌体培养基的制备方法为:完全培养基以4℃、100000×g超速离心16-17h后,收集上层2/3体积的培养基,即为无外泌体培养基。
10.如权利要求1所述的sPL复合制剂在制备治疗勃起功能障碍的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于治疗ed的spl复合制剂,其特征在于,该spl复合制剂包括spl和脐带间充质干细胞外泌体,所述spl是在超重环境下制备的超活化血小板裂解液,所述脐带间充质干细胞外泌体是由微重力三维环境下培养的脐带间充质干细胞中提取得到的。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗ed的spl复合制剂,其特征在于,所述spl与脐带间充质干细胞外泌体的体积比为1:(1-2)。
3.如权利要求1所述的spl复合制剂的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
4.根据权利要求3所述的spl复合制剂的制备方法,其特征在于,所述spl的制备方法为:
5.根据权利要求4所述的spl复合制剂的制备方法,其特征在于,所述血小板的富集方法为:将采集的全血于4℃条件下转移至分离室,将混匀后的全血以300×g离心15-20min来收集富含血小板的血浆,取出离心后的全部血浆,然后将血浆以1000×g再次离心20-25min,留取下层富集的...
【专利技术属性】
技术研发人员:张天琦,刘春香,张怡,孟令旗,刘艳青,
申请(专利权)人:天晴干细胞股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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