一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法技术

一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法，涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，尤其涉及一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法
。

技术介绍

[0002]肿瘤浸润淋巴细胞
(Tumor infiltrating lymphocytes
，
TILs)
是离开血液循环，迁移到肿瘤附近的淋巴细胞，包括
T
细胞
、B
细胞
、NK
细胞等
。TILs
能够起到杀伤癌细胞的作用，肿瘤中
TILs
的数量是预测癌症患者预后和对免疫疗法反应的重要指标
。
[0003]TILs
疗法是将自身肿瘤内的肿瘤抗原特异性
CD4+
和
CD8+
细胞分离，体外扩增后回输到患者体内的一种免疫治疗肿瘤方法
。
该疗法具有高效性
、
特异性
、
副作用小等优点
。TILs
主要来源于手术切除或活检获取的肿瘤组织
、
恶性胸腹水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤一：取淋巴细胞浸润的肿瘤组织，进行肿瘤细胞的分离和消化；步骤二：将消化的肿瘤细胞接种于
12
孔板，用
TILs
初始培养基培养过夜，收集培养基中悬浮细胞，以速度
1000
～
1400
×
g
离心5～
10min
后收集肿瘤浸润性淋巴细胞
TILs
；步骤三：
TILs
扩增培养将步骤二获得的
TILs
用
TILs
扩增培养基培养
10
～
14
天，每1～2天更换培养基；而后再利用
TILs
诱导培养基培养
TILs 7
天，每1～2天更换培养基，最终收获
TILs
；其中所述
TILs
扩增培养基配方为：以
RPMI1640
培养基作为基础培养基，加入体积分数
10
％的人
AB
血清
、100IU/mL
青霉素
、100
μ
g/mL
链霉素
、50
μ
g/mL
硫酸链霉素
、10
μ
g/mL
硫酸庆大霉素
、15mmol/L HEPES、1000
μ
g/mL IL
‑
6、25
～
50
μ
g/ml
牛垂体提取物
、0.2
～
0.4
μ
g/mL
层粘蛋白
、0.1
～
0.2
μ
g/mL
透明质酸
、50
～
100ng/mL EGF、20
～
40ng/mL FGF
‑
2、2
～
5ng/mL TGF
‑
β1和
25
～
55
μ
g/mL PDGF
；所述
TILs
诱导培养基配方是在
TILs
扩增培养基中加入体积分数为1％的肿瘤抗原溶液
。2.
根据权利要求1所述的一种肿瘤浸润性淋巴细胞的培养方法，其特征在于步骤一中肿瘤细胞的分离和消化方法具体为：
A、
将淋巴细胞浸润的肿瘤组织用质量百分比浓度
75
％的乙醇浸泡，并用
PBS
冲洗肿瘤组织3～5次，剪去血块
、
结缔组织和坏死组织，用
PBS
冲洗3～5次；
B、
将该肿瘤组织剪为
0.5
～
1mm3小碎块，加入消化液，
37℃
震荡消化6～
12h
；
C、
消化完成后用
100
μ
m
网筛过滤，向滤液中加入2倍体积的
RPMI1640
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟令旗，张怡，刘春香，张斐然，张天琦，刘艳青，
申请(专利权)人：天晴干细胞股份有限公司，
类型：发明
国别省市：