包含肉毒杆菌毒素的组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含(a)肉毒杆菌毒素和(b)非交联的透明质酸的组合物及其治疗或预防肌张力障碍、痉挛状态和/或皱纹的用途。此外，本发明专利技术涉及用于在美容上平滑或预防皱纹的方法，其包括施用本发明专利技术组合物的步骤。

Composition comprising botulinum toxin

The present invention relates to a composition comprising (a) botulinum toxin and (b) non-crosslinked hyaluronic acid and its use in the treatment or prevention of dystonia, spasm and/or wrinkles. In addition, the invention relates to a method for smoothing or preventing wrinkles in beauty, including steps for applying the composition of the invention.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含肉毒杆菌毒素的组合物
本专利技术涉及包含(a)肉毒杆菌毒素和(b)非交联的透明质酸的组合物及其用于治疗或预防肌张力障碍、痉挛状态和/或皱纹的用途。此外，本专利技术涉及用于在美容上平滑或预防皱纹的方法，其包括施用本专利技术组合物的步骤。
技术介绍
“肉毒杆菌神经毒素”(BoNT)可被视为一组几种非常相似的神经毒蛋白的总称。天然存在的肉毒杆菌神经毒素由厌氧和产芽孢细菌肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)产生，并且很少由其他梭菌属物种，例如丁酸梭菌(C.butyricum)、巴氏梭菌(C.barati)和阿根廷梭菌(C.argentinense)。目前存在八种不同的毒素血清型，称为A、B、C1、C2、D、E、F和G型。其中一些类型如A、B、E和F型对人类有毒，而C、D和G型更经常导致例如在鸟类、马、牛和灵长类动物中的毒性。肉毒杆菌毒素复合物以包含两种组分的高分子蛋白质复合物的形式存在；即具有麻痹作用的神经毒素组分和相关的无毒细菌蛋白质组分，其可被视为包括血凝素和非血凝素蛋白的外壳蛋白。肉毒杆菌毒素复合物的分子量在不同肉毒杆菌毒素血清型A、B、C1、C2、D、E、F和G型中从约300kDa到约900kDa不等。关于治疗应用，外壳蛋白据报道不具有显著的功能，并且对神经毒性性质没有贡献。神经毒素组分表达为对于所有已知肉毒杆菌毒素血清型具有约150kDa的分子量的无活性单链前体(非裂解多肽)。该单链前体通过溶蛋白性裂解而活化，以生成二硫键连接的双链蛋白质。约50kDa的轻链蛋白质含有催化结构域并且是含锌金属蛋白酶，并且充当锌内肽酶。约100kDa的重链蛋白质包含易位结构域和受体结合结构域。重链介导与突触前胆碱能神经末梢结合，特别是与运动终板或神经肌肉接头的突触前部分结合，以及毒素内化进入细胞内。关于前面提到的，当转运到神经肌肉接头时，重链的受体结合结构域提供胆碱能特异性并且使毒素与突触前受体结合。随后，神经毒素可经由受体介导的内吞作用进入神经元细胞，并且停留在神经元细胞的内吞囊泡内。在囊泡酸化后，轻链易位到细胞质内并分离。轻链蛋白质是充当锌内肽酶，并且能够分裂囊泡融合器的不同蛋白质并预防囊泡的胞吐作用的子区段。特别地，取决于BoNT血清型，轻链毒性部分能够切割形成SNARE蛋白复合物的一种或多种蛋白质，其中所述SNARE复合物由SNAP-25、突触融合蛋白(syntaxin)和VAMP形成。SNARE复合物通常与膜融合，并且因此允许神经递质乙酰胆碱离开细胞。通过释放突触间隙中的神经递质乙酰胆碱，将神经冲动传递到肌肉，这给肌肉发信号以收缩。由于SNARE复合物的形成基本上通过经由例如BoNT/A从所述复合物中切割蛋白质来预防，所以乙酰胆碱释放被终止。因而，神经和肌肉之间的传递受阻，这最终引起瘫痪(肉毒中毒)。然而，尽管其高毒性，但是自20世纪80年代初以来，肉毒杆菌毒素已用作批准的活性药物成分，特别是在特定的运动障碍，如眼睑痉挛(睑痉挛)或斜颈(斜颈痉挛)治疗中。另外，肉毒杆菌毒素用于美容医学领域，例如美容治疗中。另外，眉间皱纹的治疗推测进一步发挥心理作用。特别地，这种治疗据报道减轻与严重抑郁障碍有关的症状。肉毒杆菌神经毒素是固有地不稳定的，特别是在碱性条件下。进一步地，它们据报道是热不稳定的。为此目的，商业肉毒杆菌神经毒素经常作为真空干燥或冻干材料贮存，并且经常另外含有赋形剂，以便保存肉毒杆菌神经毒素在贮存以及潜在的后续重构过程中的完整性和效力。关于上述医学和美容适应症，肉毒杆菌神经毒素通常必须大约每3个月施用一次。为了提供更期望的剂量方案，US2012/014532A1提出了储库制剂，其中肉毒杆菌毒素被认为在皮下位置处具有增加的停留时间。参考实例，用于制剂的透明质酸基本上是由具有较低分子量的非交联的透明质酸和交联剂如1,4-丁二醇二缩水甘油醚制备的交联透明质酸。然而，考虑到其应用，上文建议的缓释制剂似乎看起来仍然是可改进的。特别地，根据US2012/014532的制剂中的填料可能在施用部位长时间保留。因此，本专利技术的目的是克服上述缺点。特别地，本专利技术的目的是提供改善的肉毒杆菌神经毒素制剂，其提供肉毒杆菌的延长的持续效应。特别地，应该提供确保在后续施用时不存在以前施用的残留部分的制剂。此外，应该预防或至少显著降低不期望的副作用。本专利技术的目的已出乎意料地通过特定组合物以及用于所述组合物的特定剂量方案得到解决，所述组合物包含(a)A型肉毒杆菌神经毒素和(b)重量平均分子量为2.5MDa至4.5MDa的非交联的透明质酸。本专利技术人发现本专利技术的组合物允许应用出乎意料的大量肉毒杆菌神经毒素，而在常规肉毒杆菌制剂中，肉毒杆菌毒素的剂量不能简单地增强以增加摄入细胞内的量，使得上述效应得到实现。这是因为大部分的肉毒杆菌毒素推测经由淋巴引流或直接经由静脉系统迅速到达体循环。通过到达体循环，肉毒杆菌可能扩散到相邻组织，并且可能在相应的位置处引起副作用。例如，在眉间皱纹中注射过量的常规肉毒杆菌毒素制剂可能导致睑下垂。根据本专利技术，目前可施用显著更高量的肉毒杆菌神经毒素，而无需使用在施用部位处保持数日、数周或数月的储库制剂。
技术实现思路
本专利技术提供了组合物，其包含(a)肉毒杆菌神经毒素和(b)非交联的透明质酸，优选具有2.5MDa至4.5MDa的平均分子量和/或2.7至3.3m3/kg的固有粘度。进一步地，本专利技术提供了本专利技术组合物用于治疗肌张力障碍，其中施用220至500单位的肉毒杆菌神经毒素，用于治疗痉挛状态，其中施用500至1000单位的肉毒杆菌神经毒素，或用于治疗皱纹，其中施用40至50单位的肉毒杆菌神经毒素。本专利技术另外提供了用于在美容上平滑或预防哺乳动物的皱纹的方法，优选地皱纹是广泛的模仿活动的结果，其中所述方法包括(i)施用本专利技术组合物和(ii)在4至9个月后重复施用。最后，本专利技术的主题是本专利技术组合物的美容用途，优选地，皱纹是模仿活动的结果，其中应用的组合物包含40至50单位的肉毒杆菌神经毒素。具体实施方式本专利技术的组合物包含(a)肉毒杆菌神经毒素作为组分。在一个优选实施例中，组分(a)是B型肉毒杆菌神经毒素(BoNT/B)。B型肉毒杆菌神经毒素显示对于囊泡相关膜蛋白质2(VAMP2)的裂解的催化行为。在一个替代的优选实施例中，组分(a)是E型肉毒杆菌神经毒素(BoNT/E)。E型肉毒杆菌神经毒素还裂解25kD(千道尔顿)突触体相关蛋白质25(SNAP-25)，但与例如A型肉毒杆菌神经毒素相比，它靶向该蛋白质内的不同氨基酸序列。E型肉毒杆菌神经毒素包含8种亚型BoNT/E1至BoNT/E8，并且也可作为重组肉毒杆菌神经毒素存在。E型肉毒杆菌神经毒素的序列和制备例如公开于WO2014/068317中。特别提到Seq.IDNo.1、2和3。在一个特别优选的实施例中，本专利技术的组合物包含A型肉毒杆菌神经毒素作为组分(a)。A型肉毒杆菌神经毒素复合物优选包含约150kDa的神经毒素组分，其可分成上述轻链(约50kDa)和重链(约100kDa)，以及任选的一种或多种外壳蛋白如血凝素或非血凝素。在一个优选实施例中，A型肉毒杆菌神经毒素复合物可具有300kDa至900kDa，尤其是300、600或900kDa的重量分子量。可替代地，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.组合物，其包含：a)肉毒杆菌神经毒素b)平均分子量为2.5MDa至4.5MDa的非交联的透明质酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.02 EP 16158302.61.组合物，其包含：a)肉毒杆菌神经毒素b)平均分子量为2.5MDa至4.5MDa的非交联的透明质酸。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述肉毒杆菌神经毒素是A型肉毒杆菌神经毒素。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述非交联的透明质酸的多分散指数为1.1至4.0。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其包含2至4单位的肉毒杆菌神经毒素或20至40单位的肉毒杆菌神经毒素/毫克非交联的透明质酸。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含c)盐，d)任选的神经毒素稳定剂，e)结晶抑制剂，f)缓冲液，和/或g)自由基清除剂。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物当在25℃和使用1Hz的振荡频率下测定时具有1.5至4Pa·s的动态粘度。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其用于治疗或预防肌张力障碍，其中施用200至500单位的肉毒杆菌神经毒素。8...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·芬克，H·泰勒，H·罗斯，P·博德克，
申请(专利权)人：梅尔兹制药公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE