一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，包括步骤：(1)制作含有木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％的木屑培养基；(2)在木屑培养基上引入菌株，制作接种菌棒；(3)选择幼树，消毒后在近地面10‑30cm处的茎干上削出一个长1‑5cm、深1‑5mm的切口为接种部位，与接种菌棒的一侧剪口匹配，接种部位下端附上湿棉花保湿，用塑料条包裹固定，再在距离接种部位上方约5‑10cm处围绕茎干将厚纸包裹呈伞形以遮盖住接种菌棒；(4)接种侵染1‑2个月，解开包裹接种体的厚纸及塑料条，进行致病性验证。采用本发明专利技术提供的方法，首次在活立木幼树茎干上进行接种，实现引起树木茎腐病和根腐病的病原木腐菌的致病性测定，成功率高且操作简易。

A method for determining pathogenicity of pathogenic wood rot fungi in basidiomycetes by standing stem drying

The invention discloses a method for determining the pathogenicity of pathogenic wood rot fungi in basidiomycetes by using living stem of standing trees, which comprises the following steps: (1) making sawdust culture medium containing sawdust 82%, wheat bran 15%, glucose 2% and gypsum 1%; (2) introducing strains into sawdust culture medium to make inoculated fungus sticks; (3) selecting young trees and sterilizing them in the vicinity A 1.5 cm long and 1.5 mm deep incision was cut from the stem at 10.30 cm above the ground to match the one side of the inoculation rod. Wet cotton was attached to the lower part of the inoculation site for moisturizing. Plastic strips were used to wrap and fix it. Thick paper was wrapped around the stem at about 5.10 cm above the inoculation site to cover the inoculation. Bacterial sticks; (4) inoculate for 1 to 2 months, unlock the thick paper and plastic strips of the inclusion inoculum, and verify the pathogenicity. The method provided by the invention is used for the first time to inoculate the stem of young living trees to realize the pathogenicity determination of the pathogenic wood rot fungi causing stem rot and root rot of trees. The method has high success rate and simple operation.

【技术实现步骤摘要】
一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法
本专利技术涉及植物保护领域，尤其涉及一种利用活立木茎干接种担子菌中病原木腐菌的方法及其致病性验证应用。
技术介绍
木腐菌(Wood-decayingfungi)能够降解腐木和倒木，绝大多数为担子菌门真菌，其中有些种类能够侵染树林活立木的茎干或根系，引起树木的茎腐病或根腐病，影响树木长势，严重时整株死亡，是重要的病原木腐菌。由病原木腐菌引起的树木茎腐病或根腐病，在完成柯赫法则验证其致病性过程中，致病性测定是一大难题。目前大部分都利用离体材料人工接种来完成木腐菌所致树木茎腐或根腐病病菌致病性的测定，如专利CN201610276468公开了一种离体茎测定烟草疫霉致病性的方法，专利CN201610276471公开了一种南瓜片测定烟草疫霉致病性的方法，专利CN201710132452公开了一种测定甘蔗梢腐病病菌致病性的方法，以上均为离体接种方法，实验环境易控制，但与病害实际的致病性验证存在一定差异，而且所报道的病原菌归属于卵菌和半知菌类，而利用活立木的茎干进行人工接种验证担子菌中的病原木腐菌的致病性未见报道。另外也有部分研究利用根块接种进行根腐病病菌致病性的测定，挖根费时费力且成功率低。本专利技术人经过十多年的研究和反复验证，成功摸索出一种利用活树茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的接种方法，并应用于危害树木茎干或根系的病原木腐菌的致病性验证。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，解决了现有接种方法离体操作麻烦、成功率低的问题。本专利技术采用的技术手段如下：一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，包括以下步骤：(1)制作木屑培养基按重量百分比将木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水润湿后混匀并分装到直径3-6cm、高5-10cm的小塑料袋中，封口，在121℃下湿热灭菌1-2h；(2)制作接种菌棒从培养的病原木腐菌菌落上挑取菌丝块，接种到步骤(1)的木屑培养基中，置于26℃-28℃下培养10-40天制作接种体，待接种体内的菌丝长满菌袋后作为接种菌棒备用；(3)接种在适宜病菌侵染的季节，选择生长2-3年生的健康幼树，先对幼树地上30cm内的茎干消毒，后在近地面10-30cm处的茎干上削出一个长1-5cm、深1-5mm的平面切口为接种部位，同时在接种菌棒的一侧剪开一个与茎干伤口相匹配的剪口，将接种菌棒紧贴在茎干伤口上，接种部位下端附上湿棉花保湿，用3-5cm宽的塑料条包裹固定，再在距离接种部位上方约5-10cm处，围绕茎干用胶带将厚纸包裹呈伞形遮盖住接种菌棒；(4)致病性验证接种侵染1-2个月，解开包裹接种体的厚纸及塑料条，若接种菌棒牢固地附着在幼树茎干上，菌棒颜色无变化，接种菌棒附近的茎干上均长满菌丝和菌膜，在】茎干伤口处削去表皮组织，可见内部组织变色并发生白腐，说明接种成功；继续观察幼树是否出现病原木腐菌的发病症状，从而验证病原木腐菌的致病性。优选地，步骤(3)中的接种时间选为5-9月。优选地，步骤(3)中，采用70％的酒精对茎干表面进行消毒。优选地，每棵幼树接种1-3个菌棒。采用本专利技术提供一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，首次在活立木茎干上进行接种，不仅实现引起树木茎腐病的病原木腐菌的致病性测定，完成柯赫法则验证；而且验证了担子菌中的一大类木腐菌所致树木茎腐及根腐病的致病性测定无需根系接种，可直接通过在茎干接种进行验证。另外采用自制的木屑培养基，自制的接菌棒以及保湿遮阳的接种方法，提高接种成功率，缩短侵染时间，且在活立木上进行致病性验证结果可靠。附图说明图1为实施例一的槟榔茎基腐病病菌接种后的发病效果图，A、接种后保湿遮阳；B、接种后发病症状；C、接种点内部组织变褐；图2为实施例一的槟榔茎基腐病病菌接种前后槟榔树冠的症状对照图，其中A、对照槟榔株的正常树冠；B、发病槟榔株树冠叶片失绿发黄,下层叶片人叶柄基部下折倒挂；图3为实施例二的柳树白腐病病菌的致病性测定效果图，A：对照柳树；B:接种垂柳呈现枯枝及生长不良；C：垂柳接种部位长出的白色菌丝；D：接种垂柳后期长出的病菌担子果；图4为实施例三的橡胶树红根病菌接种前后的发病效果图，A：对照橡胶幼树茎干伤口已愈合；B:接种橡胶幼树接种菌棒未变色,上、下方沿胶树茎干长出菌膜；C：接种部位的胶树茎干组织白腐。具体实施方式以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例一：一种利用活立木茎干测定槟榔茎基腐病病菌(GanodermaboninensePat.)致病性的方法，包括以下步骤：1、制作培养基木屑培养基：按重量百分比将木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水润湿后混匀并分装到直径3cm、高约5cm的小塑料袋中，封口，在121℃下湿热灭菌1h。2、制作接种菌棒从纯化培养的槟榔茎基腐病病菌菌落上挑取1cm×1cm大小的菌丝块2块，接种到灭菌好的木屑培养基中，置于26℃下培养10天制作接种体，待接种体内的菌丝长满菌袋后作为接种菌棒备用。3、接种在适宜病菌侵染的季节(5月)，选择生长2年生的健康槟榔，先用70％的酒精对槟榔地上30cm内的茎干喷雾进行表面消毒，待酒精风干后，用消毒好的小刀在近地面约10cm处的茎干上削出一个长1cm、深1mm的平面切口，然后在接种菌棒的一侧剪开一个与切出的平面伤口相匹配的剪口，将接种菌棒紧贴在伤口上，接种部位下端附上湿棉花保湿，用3cm宽的塑料条包裹固定，一方面起到固定，另一方面防止水分挥发，再在距离接种部位上方约5cm处的茎干上，围绕茎干用胶带将厚纸包裹呈伞形遮盖住接种菌棒，起到遮阳作用，营造一个适合木腐菌生长的环境。4、致病性测定接种1个月后，解开包裹接种体的厚纸及塑料条，接种成功的接种菌棒牢固地附着在幼树茎干上，菌棒颜色与接种时无太大变化，接种部位长满菌丝和菌膜，摘下接种菌棒，可见原接种的茎干伤口处粘附有长满菌丝的菌棒碎木屑，削去表皮组织，可见内部组织变色并发生白腐，证明接种成功，继续观察，若幼树出现与田间槟榔茎基腐病自然发病相同的症状，则成功验证了槟榔茎基腐病的致病性，而未接种成功的接种菌棒则变褐，菌丝坏死，幼树茎干上的伤口已长出愈伤组织或愈合。槟榔茎基腐病病菌接种后的效果如图1和图2。实施例二：一种利用活立木茎干测定柳树白腐病病菌[Funaliatrogii(Berk.)Bondartsev&Singer]致病性的方法，包括以下步骤：1、制作培养基木屑培养基：按重量百分比将木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水润湿后混匀并分装到直径6cm、高约10cm的小塑料袋中，封口，在121℃下湿热灭菌2h。2、制作接种菌棒从纯化培养的柳树白腐病病菌用液体5mL，接种到灭菌好的木屑培养基中，置于28℃下培养40天制作接种体，待接种体内的菌丝长满菌袋后作为接种菌棒备用。3、接种在适宜病菌侵染的季节(9月)，选择生长3年生的健康柳树，先用70％的酒精对幼树地上30cm内的茎干喷雾进行表面消毒，待酒精风干后，用消毒好的小刀在近地面约30cm处的茎干上削出一个长5cm、深5mm的平面切口，然后在接种菌棒的一侧剪开一个与切本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制作木屑培养基按重量百分比将木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水润湿后混匀并分装到直径3‑6cm、高5‑10cm的小塑料袋中，封口，在121℃下湿热灭菌1‑2h；(2)制作接种菌棒从培养的病原木腐菌菌落上挑取菌丝块，接种到步骤(1)的木屑培养基中，置于26℃‑28℃下培养10‑40天制作接种体，待接种体内的菌丝长满菌袋后作为接种菌棒备用；(3)接种在适宜病菌侵染的季节，选择生长2‑3年生以上的健康幼树，先对幼树地上30cm内的茎干消毒，然后在近地面10‑30cm处的茎干上削出一个长1‑5cm、深1‑5mm的切口作为接种部位，同时在接种菌棒的一侧剪出与茎干伤口相匹配的剪口，将接种菌棒的剪口处紧贴在茎干伤口上，接种部位下端附上湿棉花保湿，用3‑5cm宽的塑料条包裹固定，再在距离接种部位上方约5‑10cm处围绕茎干将厚纸包裹呈伞形以遮盖住接种菌棒；(4)致病性验证接种侵染1‑2个月，解开包裹接种体的厚纸及塑料条，若接种菌棒牢固地附着在幼树茎干上，菌棒颜色无变化，在接种菌棒处的茎干上下方均长出菌丝和菌膜，且将茎干接种伤口处的表皮组织削去，可见内部组织变色并发生白腐，说明接种成功；继续观察幼树是否出现与田间自然发病的病树相同的发病症状，从而验证病原木腐菌的致病性。...

【技术特征摘要】
1.一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制作木屑培养基按重量百分比将木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水润湿后混匀并分装到直径3-6cm、高5-10cm的小塑料袋中，封口，在121℃下湿热灭菌1-2h；(2)制作接种菌棒从培养的病原木腐菌菌落上挑取菌丝块，接种到步骤(1)的木屑培养基中，置于26℃-28℃下培养10-40天制作接种体，待接种体内的菌丝长满菌袋后作为接种菌棒备用；(3)接种在适宜病菌侵染的季节，选择生长2-3年生以上的健康幼树，先对幼树地上30cm内的茎干消毒，然后在近地面10-30cm处的茎干上削出一个长1-5cm、深1-5mm的切口作为接种部位，同时在接种菌棒的一侧剪出与茎干伤口相匹配的剪口，将接种菌棒的剪口处紧贴在茎干伤口上，接种部位下端附上湿棉花保湿，用3-5cm宽的塑料条包裹固定，再在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李增平，张宇，丁婧钰，吴如慧，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南,46