【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鱼类细胞培养，涉及一种布氏鲳鲹鳍条细胞系及其构建方法和应用。
技术介绍
1、布氏鲳鲹(trachinotus blochii)，俗称金鲳，属鲈形目，鲹科，鲳鲹属，2021年国内养殖产量为24.39万吨，成为海水养殖鱼类前三大品种之一。因其味道鲜美，营养丰富，金鲳作为一种具有重要商业价值和发展前景的海水鱼品种，在水产养殖产业中备受青睐。近年来，金鲳养殖行业随着养殖规模的扩大和养殖密度的增加，导致鱼类病害频发，制约了其养殖业的可持续发展，长期以来病毒性疾病尤其是神经坏死病毒等的流行对金鲳的危害最为普遍和严重。因此对布氏鲳鲹病害防治、良种选育的研究极为迫切。
2、大量研究表明鱼类细胞是研究鱼类病毒良好的载体，主要用于病毒分离和鉴定、病毒敏感性、病毒致病机理等科学研究。鱼类细胞培养研究始于20世纪60年代初期，wolf和quimby建立了虹鳟(oncorhynchus mykiss)性腺细胞系rtg-2，之后鱼类细胞系研究发展迅速。鱼类细胞培养已经广泛应用于基因功能分析、病毒研究、毒理学、内分泌学、种质资源保护以及遗传学等方面的研究，是一种重要的研究手段。
3、鱼类细胞系的建立技术目前相对较为成熟，但是要获得一种适用于实验模型的稳定传代的海水鱼细胞系仍存在较大困难。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种布氏鲳鲹鳍条细胞系及其构建方法和应用，利用组织迁出方法建立了一种布氏鲳鲹鳍条细胞系，该细胞系细胞增殖速度快，可以连续传代并保持稳定，本专利技术
2、为实现上述目的本专利技术采用的技术方案为：
3、本专利技术提供了一种布氏鲳鲹鳍条细胞系，保藏编号为cctcc no：c2023386。
4、本专利技术还提供了一种布氏鲳鲹鳍条细胞系的构建方法，包括：
5、(1)鳍条组织的处理：将布氏鲳鲹幼鱼的鳍条用l-15基础培养基清洗，然后在l-15基础培养基中剪碎，经过细胞筛网清洗，随后接种于细胞培养瓶底部，向细胞培养瓶另一侧缓慢加入l-15完全培养基培养。
6、(2)原代培养：原代培养期间每2-3天更换新鲜l-15完全培养基，原代培养的第7天有细胞从组织块迁出。
7、(3)传代培养：待布氏鲳鲹鳍条细胞汇合度达到90％后，吸出旧培养基，加入pbs清洗一遍，用含edta的0.25％胰酶消化贴壁细胞约2min，倒置显微镜下观察细胞变圆并开始脱落时，加入细胞完全培养基终止消化，轻轻吹打分散悬起细胞，进行细胞分瓶，传代培养。
8、优选地，所述l-15基础培养基中含有400u/ml青链霉素混合液，所述l-15完全培养基含有20％胎牛血清(fbs)，400u/ml青链霉素混合液，0.01％重组人碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。
9、优选地，步骤(1)中，放于28℃培养箱倒置培养，干贴6小时左右将培养瓶缓慢翻转正放于培养箱中。
10、优选地，步骤(3)中，按照1:2进行细胞分瓶，放入28℃培养箱中进行传代培养。
11、本专利技术另提供了上述布氏鲳鲹鳍条细胞系在表达外源基因和病毒刺激物免疫检测中的应用。
12、进一步地，布氏鲳鲹鳍条细胞通过fishtrans高效地转染外源表达质粒。
13、进一步地，布氏鲳鲹鳍条细胞受poly(i:c)刺激12h时，鳍条细胞中的ifn系统相关基因mita、irf3、irf7、ifn、vig1和isg15的表达量明显升高。
14、本专利技术的有益效果在于：
15、本专利技术利用组织迁出方法建立了一种布氏鲳鲹鳍条细胞系，该细胞系细胞增殖速度快，可以连续传代并保持稳定，本专利技术还提供了该布氏鲳鲹鳍条细胞系在表达外源基因和病毒刺激物免疫检测中的应用，为今后开展神经坏死病毒等的致病机理以及诊断和防控技术研究提供重要实验材料，同时丰富了布氏鲳鲹来源的细胞资源。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种布氏鲳鲹鳍条细胞系，保藏编号为CCTCC NO：C2023386。
2.权利要求1所述的一种布氏鲳鲹鳍条细胞系的构建方法，包括：
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述L-15基础培养基中含有400U/mL青链霉素混合液，所述L-15完全培养基含有20％胎牛血清，400U/mL青链霉素混合液，0.01％重组人碱性成纤维细胞生长因子。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，放于28℃培养箱倒置培养，干贴6小时后将培养瓶缓慢翻转正放于培养箱中。
5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，按照1:2进行细胞分瓶，放入28℃培养箱中进行传代培养。
6.权利要求1所述的一种布氏鲳鲹鳍条细胞系在表达外源基因和病毒刺激物免疫检测中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，布氏鲳鲹鳍条细胞通过FishTrans高效地转染外源表达质粒。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，布氏鲳鲹鳍条细胞受poly(I:C)刺激12h时，鳍条细胞中的IFN
...【技术特征摘要】
1.一种布氏鲳鲹鳍条细胞系，保藏编号为cctcc no：c2023386。
2.权利要求1所述的一种布氏鲳鲹鳍条细胞系的构建方法，包括：
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述l-15基础培养基中含有400u/ml青链霉素混合液，所述l-15完全培养基含有20％胎牛血清，400u/ml青链霉素混合液，0.01％重组人碱性成纤维细胞生长因子。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，放于28℃培养箱倒置培养，干贴6小时后将培养瓶缓慢翻转正放于培养箱中。
5.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：佟金凤，骆剑，桂建芳，周莉，甘瑞海，俞浪，文鑫，孙俊龙，宋飞彪，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。