一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及肿瘤标志物检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及酶联免疫技术领域，公开了一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及肿瘤标志物检测试剂盒及其制备方法。本发明专利技术所述组合物包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有胎牛血清、海藻糖、PBS、Tween20、PVA和叠氮钠；所述酶标稀释液含有Tris、酪蛋白、海藻糖、对羟基苯甲酸钠、阿拉伯树胶、PEG和Proclin300。本发明专利技术从酶联免疫试剂盒的封闭液和酶标稀释液入手，通过选择适宜成分，使得酶联免疫试剂盒能够较长时间保持检测的稳定性。同时，以所述组合物制备的肿瘤标志物检测试剂盒在具有较佳稳定性的基础上，还具备较高的灵敏度、准确度和精密度。

Composition for enzyme linked immunosorbent kit and detection kit for tumor marker and preparation method thereof

The invention relates to the field of enzyme-linked immunoassay technology, and discloses a composition for enzyme-linked immunoassay kit, a tumor marker detection kit and a preparation method thereof. The composition comprises a blocking solution and an enzyme-labeled diluent; the blocking solution contains fetal bovine serum, trehalose, PBS, Tween20, PVA and sodium azide; the enzyme-labeled diluent contains Tris, casein, trehalose, sodium p-hydroxybenzoate, Arabic gum, PEG and Proclin300. The method starts with the sealing solution and the enzyme-labeled dilution solution of the enzyme-linked immunoassay kit, and by selecting the suitable components, the enzyme-linked immunoassay kit can keep the detection stability for a long time. At the same time, the tumor marker detection kit prepared by the composition has higher sensitivity, accuracy and precision on the basis of better stability.

【技术实现步骤摘要】
一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及肿瘤标志物检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及酶联免疫
，具体涉及一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及肿瘤标志物检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
肿瘤，尤其是恶性肿瘤(癌症)是一类严重威胁人类健康的多发病和常见病。近年来，癌症的发病率和死亡率一直呈上升的趋势，而且存在发现晚、治疗不及时，导致死亡率较高的难题。虽随着科学和经济的发展，对肿瘤的治疗发展出了一些新的方法和药物，但及早发现和预防仍然是对癌症的有效防治方法。肿瘤标志物是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的，反应肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶、多胺及癌基因等。如甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原19-9(CA19-9)、癌抗原242(CA242)、癌抗原125(CA125)、癌抗原15-3(CA15-3)、癌抗原72-4(CA72-4)、癌抗原50(CA50)、铁蛋白(SF)、生长激素(HGH)、绒毛膜促性腺激素β亚基(β-HCG)、总前列腺特异性抗原(TPSA)、游离前列腺特异性抗原(FPSA)、降钙素(CT)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、神经元烯醇化酶(NSE)、非小细胞肺癌相关抗原(CYFRA21-1)、胃泌素释放肽前体(Pro-GRP)、肿瘤相关物质(TSGF)、胰胚胎抗原(POA)、胃蛋白酶I(PGI)、胃蛋白酶II(PGII)。这些肿瘤标志物的检测对肿瘤早期筛查，疗效观察，追踪复发等都具有重要意义。肿瘤标志物大多无器官特异性，为广谱标志物。例如：正常成人的血液中CEA很难测出，70-90％的结肠腺癌患者CEA高度阳性，在其他恶性肿瘤中的阳性率顺序为胃癌(60-90％)、胰腺癌(70-80％)、小肠腺癌(60-83％)、肺癌(56-80％)、肝癌(62-75％)、乳腺癌(40-68％)、泌尿系癌肿(31-46％)。同时，一种癌症患者往往存在多种肿瘤标志物的异常或是明显升高，因此单项指标检测一般都存在特异性不强、阳性率偏低、特别是对早期肿瘤的检出率不高等难题。同时检测多种肿瘤标志物能显著提高相关肿瘤的检出率，也能更有效的帮助判断肿瘤的类型，以便协助进一步的确诊及诊疗方案的确定。例如：联合测定CEA、PGI、PGII、CA19-9、CA72-4能大大的提高胃癌的检出率；同时检测AFP、SF、CA125有利于肝癌的判断；还有CEA、SCC、ProGRP、CYFRA21-1、NSE、CA125等是肺癌的标志物；等等。鉴于此，对肿瘤标志物多项指标的联合检测逐渐受到多数学者的关注，同时也将受到临床越来越高的重视。多项肿瘤标志物的联合检测尤其适用于健康或亚健康人群的防癌普查，有利于肿瘤的早期发现，为临床诊断、治疗提供检测手段。目前较常用的肿瘤标志物的检测方法主要有：放射免疫分析法，酶联免疫分析法，化学发光免疫分析法，免疫印迹法等，普遍采用的酶联免疫吸附法虽然灵敏度高、特异性也较好，但检测指标单一，无法达到普查的目的；放免法有污染的危险；化学发光免疫分析法存在发光时间短，需要严格掌握测量时间的缺陷；免疫印迹灵敏度低、操作繁琐，且无法定量测定。随着科技手段的发展和成熟，近来也发展出了部分高通量、高灵敏度的肿瘤标志物抗体芯片试剂盒：CN103869068，其虽然具有廉价、灵敏、准确、高通量、标本使用量少、且能在普通实验室推广和规模化等优点，但该试剂盒需要通过配备标准品、并通过将标准品稀释不同倍数然后测定信号值，来制定标准曲线，用于待测样品的定量，仍然较为繁琐。我们知道蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术，是近年来发展起来的一项生物检测技术，这项技术是将蛋白质的分析微缩到小型芯片上，利用荧光或酶显色进行探测，最后用特定的计算机软件加以分析。如专利CN103869068公开了一种高通量、高灵敏度的肿瘤标志物抗体芯片试剂盒，其虽然具有廉价、灵敏、准确、高通量、标本使用量少、且能在普通实验室推广和规模化等优点，但该试剂盒需要通过配备标准品、并通过将标准品稀释不同倍数然后测定信号值，来制定标准曲线，用于待测样品的定量，仍然较为繁琐。更为值得关注的是，目前该类试剂盒的稳定性并不好。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，使得所述组合物用于制备酶联免疫试剂盒时能够显著提高试剂盒在低温和室温下的稳定性，保存时间延长；本专利技术的另外一个目的在于提供上述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用，特别是用于检测肿瘤标志物的相关试剂盒；本专利技术的另外一个目的在于提供一种包含上述组合物的肿瘤标志物检测试剂盒及其制备方法，使得所述试剂盒在低温和室温下具有较长时间的稳定性，同时检测结果具有较高的特异性和敏感性。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有胎牛血清、海藻糖、PBS、Tween20、PVA和叠氮钠；所述酶标稀释液含有Tris、酪蛋白、海藻糖、对羟基苯甲酸钠、阿拉伯树胶、PEG和Proclin300。针对现有酶联免疫试剂盒稳定较差、保存时间较短的缺陷，本专利技术意外发现了从制备试剂盒的封闭液和酶标稀释液(用于稀释酶标记物用)入手，通过选择合适的组分完善两者的组成，能够显著提高酶联免疫试剂盒的稳定性和保存时间。作为优选，所述封闭液含有20％-25％胎牛血清，2％-5％海藻糖，0.01MPBS、0.02％-0.05％Tween20、1％-3％PVA,0.05％叠氮钠，pH值为7.4，余量为水，所述百分比为质量百分比(w/v)；在本专利技术具体实施方式中，20％胎牛血清、4％的海藻糖、0.01MPBS、0.05％Tween20、1％PVA和0.05％叠氮钠，pH值为7.4，余量为超纯水。其中，聚乙烯醇PVA优选为聚乙烯醇2W。作为优选，所述酶标稀释液含有0.1MTris、2.5％-5％酪蛋白、2％-5％海藻糖、0.2％-0.5％对羟基苯甲酸钠、0.01％-0.05％阿拉伯树胶、1％-5％PEG，0.05％proclin300，余量为水。所述百分比中除Proclin300是体积百分比之外，其余都是质量百分比(w/v)；在本专利技术具体实施方式中，所述酶标稀释液含有0.1MTris、2.5％酪蛋白、2％海藻糖、0.2％对羟基苯甲酸钠、0.01％阿拉伯树胶、1％PEG和0.05％Proclin300，余量为水。其中，聚乙二醇优选为聚乙二醇1W。本专利技术利用上述组合物进行肿瘤标志物抗体酶联免疫试剂盒的制备，与采用常规的封闭液和酶标稀释液肿瘤标志物抗体酶联免疫试剂盒相比，在低温(2-8℃)下，本专利技术试剂盒在放置24个月后仍然能够保持较高稳定性，而对照的试剂盒在放置18个月后就已经出现很大程度的不稳定性；在室温(18-28℃)下，本专利技术试剂盒在放置6个月后仍然能够保持制备完成时的稳定性，在放置9个月后仍然能够保持较高的稳定性，而对照的试剂盒在放置6个月后就已经出现很大程度的不稳定性，在放置9个月后已经无法保证检测的稳定性了。基于上述优异的技术效果，本专利技术提出了所述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用，特别是在制备肿瘤标志物酶联免疫检测试剂盒中的应用。同时，本专利技术还提供一种肿瘤标志物检测试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，其特征在于，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有胎牛血清、海藻糖、PBS、Tween20、PVA和叠氮钠；所述酶标稀释液含有Tris、酪蛋白、海藻糖、对羟基苯甲酸钠、阿拉伯树胶、PEG和Proclin300。

【技术特征摘要】
1.一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，其特征在于，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有胎牛血清、海藻糖、PBS、Tween20、PVA和叠氮钠；所述酶标稀释液含有Tris、酪蛋白、海藻糖、对羟基苯甲酸钠、阿拉伯树胶、PEG和Proclin300。2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述封闭液含有20％-25％胎牛血清，2％-5％海藻糖，0.01MPBS、0.02％-0.05％Tween20、1％-3％PVA,0.05％叠氮钠，pH值为7.4，余量为水。3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述酶标稀释液含有0.1MTris、2.5％-5％酪蛋白、2％-5％海藻糖、0.2％-0.5％对羟基苯甲酸钠、0.01％-0.05％阿拉伯树胶、1％-5％PEG，0.05％proclin300，余量为水。4.权利要求1-3任意一项所述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒为肿瘤标志物免疫检测试剂盒。6.一种肿瘤标志物检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被有肿瘤标志物抗体的蛋白芯片、生物素化的肿瘤标志物抗体、用酶标稀释液稀释包含酶标亲和素的酶标记物、样品稀释液、洗涤液和显色液；其中，所述蛋白芯片包被肿瘤标志物后采用封闭液封闭，所述封闭液含有胎牛血清、海藻糖、PBS、Tween20、PVA和叠氮钠，所述酶标稀释液含有Tris、酪蛋白、海藻糖、对羟基苯甲酸钠、阿拉伯树胶、PEG和Proclin300。7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述封闭液含有20％-25％胎牛血清，2％-5％海藻糖，0.01MPBS、0.02％-0.05％Tween20、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大准，张永顶，马伟民，王洪涛，马新民，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44