一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，特别涉及一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置。该检测试剂盒具有高度灵敏和特异性，可以一次检测12种抗体，具有较高的准确性、操作简便、节约抗原、降低成本等优点，同时优化了相关的试剂配方和处理方法，使试剂盒的稳定性更好(2‑8℃冷藏2年，室温可储存6个月)，储存及运输条件更为便利。

Composition, chip and its preparation method and detection device containing the chip

The invention relates to the technical field of biological detection, in particular to a composition, a chip, a preparation method thereof and a detection device comprising the chip. The kit has high sensitivity and specificity. It can detect 12 kinds of antibodies at one time. It has the advantages of high accuracy, simple operation, saving antigen, reducing cost and so on. At the same time, it optimizes the relevant reagent formula and processing methods, so that the stability of the kit is better (refrigerated at 2 8 2 years, stored at room temperature for 6 months). Storage and transportation conditions are more convenient.

【技术实现步骤摘要】
一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置
本专利技术涉及生物检测
，特别涉及一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置。
技术介绍
自身免疫相关性肾炎是由于自身抗原和自身抗体相结合形成免疫复合物沉积在肾脏，导致肾脏损伤的一类疾病。包括狼疮性肾炎(LN)，原发性膜性肾病(PMN)，抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性肾损害等。至今在中国免疫性肾炎的发病率仍然很高。该病为潜在病理改变的持续性或进行性发展，使病情迁延，成为慢性，而不单纯是急性肾炎的慢性阶段。早期诊断有助于自身免疫性疾病的临床控制。研究已发现大部分的自身免疫性肾病患者血清中存在着特异性自身抗体，例如ANCA相关血管炎的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体、抗蛋白酶3抗体(PR3)、抗肾小球基底膜抗体(GBM)、抗内皮细胞抗体、抗乳铁蛋白(LF)抗体、抗人溶酶体相关膜蛋白(LAMP-2)抗体；狼疮性肾炎(LN)的抗C1q抗体、抗核小体(Nucleosome)抗体和抗双链DNA(dsDNA)抗体，原发性膜性肾病(IMN)的抗磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体和1型血小板反应蛋白7A(THSD7A)抗体，还有本公司研究制备的抗磷脂酶A2受体(PLA2R)与1型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)融合的融合蛋白PT蛋白抗体,这些特异性自身抗体是自身免疫性肾病诊断标准中重要的组成部分。目前有很多检测自身免疫相关性肾炎抗体的方法，包括间接免疫荧光分析法、酶联免疫吸附法或免疫印迹法，但还是存在各自的缺点。间接免疫荧光分析法是通过形成的荧光结合物来推断自身抗体的类别，缺乏一个具体客观的诊断，需要利用其他技术进行二次证实，如免疫印迹法、酶联免疫法等。酶联免疫吸附法一次试验只能检测单一抗体，效率低，成本较高，在诊断应用方面存在一定的局限性。免疫印记法所需标本量大、操作繁琐、检测时间过长、成本较高等问题。且试剂盒的稳定期一般都是2-8℃稳定期1年。ELISA-Array技术不但保持着ELISA方法的操作简便、成本低的优点，而且具有蛋白芯片技术高通量的优点；该技术通过点样仪以微阵列的形式将多种标记物固定于微孔板板孔内，可同时检测多种病原体。它可以在一个微孔中实现一份样本的多种检测，大大减少了标本和试剂的量。但目前国内尚无针对自身免疫性肾病的ELISA-Array技术检测的研究。因此，提供一种高度灵敏和特异的、稳定性更好的自身免疫相关性肾炎抗体的检测试剂盒具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置。该试剂盒可以一次检测12种抗体，具有较高的准确性、操作简便、节约抗原、降低成本等优点，同时优化了相关的试剂配方和处理方法，使试剂盒的稳定性更好(2-8℃冷藏2年，室温可储存6个月)，储存及运输条件更为便利。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种组合物，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)。在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述组合物中包括如下组分：在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述组合物还包括BSA、Proclin300、PBS或磷酸氢二钠中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述BSA在所述组合物中的质量体积百分含量为1～2.5％；所述Proclin300在所述组合物中的体积百分含量为0.05％；所述PBS的浓度为0.01M；所述磷酸氢二钠的浓度为0.01M。本专利技术还提供了所述的组合物在制备芯片和/或检测装置中的应用。本专利技术还提供了一种芯片，其包被有所述的组合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述芯片还包被有自身免疫性肾病相关抗原。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述自身免疫性肾病相关抗原包括GBM、PR3、MPO、LF、LAMP-2、PLA2R、THSD7A、PT蛋白、内皮细胞、C1q、dsDNA、核小体中的至少一种。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述芯片还包含质控点和/或参考点；所述质控点包含至少一个阳性质控点(PC)、至少一个阴性质控点(NC)、至少一个样品质控点(SC)和/或至少一个酶标质控点(EC)；所述参考点包含不同浓度的参考曲线点(S1-S3)和/或至少一个芯片位置参考点(Loc)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述阳性质控点包被人IgG或包被BSA-DNP偶联物；所述阴性质控点包被低于反应信号值的微量浓度的人IgG或其他的与自身免疫性肾病无关的蛋白；所述样品质控点为包被抗人IgG；所述酶标质控点包被人IgG、抗兔的抗体或抗羊的抗体；所述参考曲线点包被不同浓度的人IgG；所述芯片位置参考点包被已知浓度的人IgG溶液。本专利技术提供了所述的芯片的制备方法，包括如下步骤：步骤1：将所述自身免疫性肾病相关抗原、所述质控点的蛋白和/或所述参考点的蛋白经包被缓冲液稀释后，以点阵列形式包被于所述芯片的基质；步骤2：经封闭稳定剂对所述芯片进行封闭；所述封闭稳定剂包括所述的组合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂中含有1％～2％BSA(g/v)，优选1％BSA(g/v)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂中还含有1％～1.5％的柠檬酸(v/v)，优选1％的柠檬酸(v/v)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂中还含有0.3％～0.6％的甘露醇(v/v)，优选0.5％的甘露醇(v/v)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂中还含有0.8％～1.5％的PVA2W(v/v)，优选1％的PVA2W(v/v)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂中还含有0.05％(v/v)的Proclin300。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂为含有1％～2％BSA(g/v)，1％～1.5％的柠檬酸(v/v)，0.3％～0.6％的甘露醇(v/v)，0.8％～1.5％的PVA2W(v/v)和0.05％(v/v)的Proclin300的0.01M的磷酸氢二钠溶液。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述封闭稳定剂为含有1％BSA(g/v)，1％的柠檬酸(v/v)，0.5％的甘露醇(v/v)，1％的PVA2W(v/v)和0.05％(v/v)的Proclin300的0.01M的磷酸氢二钠溶液。本专利技术还提供了所述的制备方法制得的芯片。本专利技术还提供了一种检测装置，包括上述的芯片。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述检测装置还包括酶标稀释稳定剂；所述酶标稀释稳定剂包括0.01MPBS。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述检测装置还包括酶标稀释稳定剂；所述酶标稀释稳定剂还包括0.05M的柠檬酸。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述检测装置还包括酶标稀释稳定剂；所述酶标稀释稳定剂还包括1.5％～2.5％(g/v)的BSA，优选2％(g/v)的BSA。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述检测装置还包括酶标稀释稳定剂；所述酶标稀释稳定剂还包括1.5％～2％(v/v)的PEG1W，优选2％(v/v)的PEG1W。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述检测装置还包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其特征在于，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物；所述组合物中所述柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)或所述组合物包括如下组分：

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，包括柠檬酸、甘露醇、PVA2W、PEG1W、阿拉伯树胶、对羟基苯甲酸钠中的一种或两者以上的混合物；所述组合物中所述柠檬酸、甘露醇、PVA2W的体积比为(1～1.5):(0.3～0.6):(0.8～1.5)或所述组合物包括如下组分：2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括BSA、Proclin300、PBS或磷酸氢二钠中的一种或两者以上的混合物。3.根据权利要求1或2所述的组合物在制备芯片和/或检测装置中的应用。4.一种芯片，其特征在于，其包被有如权利要求1至5任一项所述的组合物。5.根据权利要求4所述的芯片，其特征在于，还包被有自身免疫性肾病相关抗原。6.根据权利要求4或5所述的芯片，其特征在于，所述芯片还包含质控点和/或参考点；所述质控点包含至少一个阳性质控点(PC)、至少一个阴性质控点(NC)、至少一个样品质控点(SC)和/或至...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大准，熊祖应，张永顶，马伟民，王洪涛，马新民，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44