The detection of kanamycin based on aptamer structural switch is an analytical chemistry field, which is characterized by the advantages of specific identification of aptamers and the advantages of fluorescence resonance energy transfer technology to detect the residue of kanamycin. The following steps include: assembly of aptamer structural switches; verification of the formation of structural switch principles by temperature variation; observation of the reaction of kanamycin and nucleic acid aptamers by measuring fluorescence spectrograms; the establishment of a structural switch based on nucleic acid aptamers to detect kanamycin; by the determination of fluorescence spectrograms. The selectivity of kanamycin was determined by the established aptamer structure switch, and kanamycin in the actual sample was determined by the structure switch of the nucleic acid aptamer. This method provides a high selectivity, simple, rapid and sensitive detection method for kanamycin, which has good practical value and is easy to popularize.
【技术实现步骤摘要】
基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素
基于核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移(FRET)检测卡那霉素的方法,属于分析化学
技术介绍
卡那霉素是一种提取于链霉菌、小单胞菌培养液或以天然品为原料半合成提取而得到的碱性氨基糖苷类抗生素。卡那霉素溶于水,对革兰氏阴性杆菌具有较强作用,同时价格便宜、可在临床上作为一种重要的抗感染药物。在目前,卡那霉素也是我国农业、畜牧业以及水产业中常用的兽药之一。由于动物源性食品中的卡那霉素可在人体内蓄积,对人体造成一定程度的伤害,因此我国对卡那霉素的残留问题也越来越关注。其中卡那霉素最重要的不良反应是会影响耳蜗神经,从而诱发耳毒症,造成听力损伤。此外,卡那霉素也对肾脏有着一定损伤,导致肾功能衰竭。为保障人类健康,世界各国对牛奶中的卡那霉素残留的最大允许残留量(MRL)作出了规定要要求,其中我国规定牛奶中卡那霉素的MRL值为200μg/kg。目前,国内外关于卡那霉素的检测方法主要有:理化检测法、微生物检测法、免疫检测法等。其中理化检测法主要包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法等,该方法虽灵敏度较高,但检测程序复杂且仪器昂贵,不易推广。微生物检测法操作上简单,经济实用,但专一性差并且只能对有生物活性的物质进行检测,也具有一定的局限性。因此十分有必要进一步研究一种灵敏简便、易于操作、选择性高且适用于实际样品快速检测的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是利用核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移技术的优势从而提供一种检测卡那霉素的方法,达到快速、简单、灵敏的检测卡那霉素的残留量。技术问题:基于核酸适体的特 ...
【技术保护点】
1.基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素,其特征是利用核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移技术的优势来检测卡那霉素的残留量,包括以下步骤:建立基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素;通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性;运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素。
【技术特征摘要】
1.基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素,其特征是利用核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移技术的优势来检测卡那霉素的残留量,包括以下步骤:建立基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素;通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性;运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素。2.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素,其中基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素的步骤如下:向含有0.5μM核酸适配体50μL,1μM互补链50μL,PH8.0Tris-HCl缓冲溶液350μL的混合体系中,分别加入不同浓度的卡那霉素标准溶液,室温条件下反应20min后,测定该体系的荧光强度,其荧光信号值将随着卡那霉素浓度的不同而发生变化,根据F2-F1与卡那霉素的浓度建立标准曲线,卡那霉素的检出限为12.01nM,线性范围为100-700nM。3.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素,其中通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性的步骤如下:选择实际样品中易出现残留的与卡那霉素相似的抗生素进行了选择性实验,分别为链霉素、氯霉素、四环素、土霉素、环丙沙星;首先,分别...
【专利技术属性】
技术研发人员:乔尚娜,张鸣镝,孙春燕,黄楚君,耿永兴,刘秋丽,沈旭,
申请(专利权)人:吉林大学,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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