一种高效低毒的质粒DNA转染方法技术

本发明专利技术公开了一种高效低毒的质粒DNA转染方法，属于生物技术领域。本发明专利技术方法包括如下步骤：(1)以20％‑30％的细胞密度接种细胞，进行培养；(2)当细胞密度生长至40％‑60％时，进行传代培养；(3)待传代培养的细胞处于刚贴壁未伸展状态时，用质粒‑转染剂混合物转染细胞。本发明专利技术提高了细胞转染效率，同时对细胞毒性较小，不需要额外的设备或者试剂，方便操作和掌握，易于推广。

A method of transfection of plasmid DNA with high efficiency and low toxicity

The invention discloses a highly efficient and low toxic plasmid DNA transfection method, which belongs to the biotechnology field. The method comprises the following steps: (1) inoculating cells with 20% cell density of 30% cells for culture; (2) when the cell density grows to 40% 60%, the cells are subcultured, and (3) the cells are transfected with the mixture of plasmid transfection agent when the cells in the subculture are in the non extension state of the rigid adherent wall. The invention improves cell transfection efficiency, and has less cytotoxicity, no additional equipment or reagent, convenient operation and mastery, and easy popularization.

【技术实现步骤摘要】
一种高效低毒的质粒DNA转染方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种转染效率高、细胞毒性低的改良型质粒DNA转染方法。
技术介绍
分子生物学及细胞生物学研究领域中细胞转染是必不可少的一项技术。细胞转染常用的方法主要分为三类：物理转染方法、化学转染方法和生物转染方法。物理转染方法包括电穿孔法、显微注射法等。化学转染方法包括脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法等。生物介导的转染方法包括病毒介导转染等。理想的转染方法应该具有转染效率高、细胞毒性低且方便易操作的特点。物理转染方法技术敏感性高，但需要单独购买设备，而且一般对细胞的活力影响都比较大。病毒转染方法的转染效率较高，但操作步骤复杂，有一定的的生物安全风险，可能对操作人员有影响，尚不是理想的转染方法。目前实验室常用的转染方法为化学转染方法，且以脂质体转染法最为常用。商品化的脂质体转染试剂易于购买和使用。在HeLa、HEK293、NIH/3T3等细胞中，脂质体转染方法的转染效率较高且具有低细胞毒性的特点，但对于难转细胞来说，脂质体转染方法的转染效率并不令人满意，这限制了脂质体转染方法的使用。脂质体转染方法在具体操作中分为两种不同操作方法，一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效低毒的质粒DNA转染方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)以20％‑30％的细胞密度接种细胞，进行培养；(2)当细胞密度生长至40％‑60％时，进行传代培养；(3)待传代培养的细胞处于刚贴壁未伸展状态时，用质粒‑转染剂混合物转染细胞。

【技术特征摘要】
1.一种高效低毒的质粒DNA转染方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)以20％-30％的细胞密度接种细胞，进行培养；(2)当细胞密度生长至40％-60％时，进行传代培养；(3)待传代培养的细胞处于刚贴壁未伸展状态时，用质粒-转染剂混合物转染细胞。2.根据权利要求1所述的高效低毒的质粒DNA转染方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭继华，贾荣，贾俊，郭辰，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42