The invention provides a method for reducing the non-specific adsorption on the solid phase carrier, and selectively and efficiently separating vesicles with lipid bilayer membranes. The separation method of the vesicles with a lipid bilayer is characterized by the inclusion of a complex forming process that contacts the organism sample containing the vesicle with a lipid bilayer and a solid phase carrier combined with a ligand to form a complex of the vesicles and the solid phase carrier, and the ligand is identified in the capsule. The surface antigen of the bubble surface; and cleaning process to clean the complex; at least any process in the process of the complex formation and the cleaning process under the salt concentration of 0.15 ~ 2M.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离方法、检测方法、信号测定方法、疾病的判定方法、药效评价方法、试剂盒、液态组合物以及检体稀释液
本专利技术涉及分离方法、检测方法、信号测定方法、疾病的判定方法、药效评价方法、试剂盒、液态组合物以及检体稀释液。更详细而言,涉及外来体等具有脂质双层膜的囊泡的分离方法、利用了该方法的核酸或蛋白质的检测方法、信号测定方法、疾病的判定方法、疾病治疗药的药效评价方法、疾病判定或药效评价用试剂盒、上述分离方法中使用的液态组合物以及检体稀释液。
技术介绍
囊泡具有被脂质双层膜包围的结构,在这样的囊泡中,作为生物体内的体液中存在的囊泡颗粒,已知有外来体。已知在外来体的表面,与一般的细胞表面同样地存在各种膜蛋白质,另一方面,也可知在外来体的内部,除细胞因子等各种蛋白质以外,也含有microRNA(miRNA)。另外,已知由免疫系统的细胞、各种癌细胞等各种细胞分泌外来体,作为生物体内的细胞间通讯的媒介作用的外来体的功能,外来体与生理现象、癌症等疾病的相关性受到关注,正在对其进行研究。例如,已经报告了使用作为肿瘤标记物的EpCAM的抗体时,从卵巢癌患者的循环血中分离外来体,来自外来体的miRNA表达量与卵巢癌的进行之间具有相关性(非专利文献1)。另外,作为在外来体上表达的四次跨膜型的膜蛋白质,有属于四跨膜蛋白家族的CD9、CD63和CD81,在非专利文献2中报告了黑色素瘤患者的血浆中的外来体量比健康人高,其能够用针对CD63的抗体、针对肿瘤相关标记物的Caveolin-1的抗体进行检测·定量化。另外,通过对离心分离后的血浆样品组合抗CD63抗体、针对各种膜蛋白质的抗体等进行反应 ...
【技术保护点】
1.一种具有脂质双层膜的囊泡的分离方法,其特征在于,包含:复合体形成工序,使含有具有脂质双层膜的囊泡的生物体试样与结合有配体的固相载体进行接触,形成所述囊泡与所述固相载体的复合体,所述配体识别存在于所述囊泡表面的表面抗原,以及清洗工序,清洗所述复合体;在盐浓度0.15~2M的环境下进行所述复合体形成工序和所述清洗工序中的至少任一工序。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.20 JP 2015-102515;2015.07.01 JP 2015-133031.一种具有脂质双层膜的囊泡的分离方法,其特征在于,包含:复合体形成工序,使含有具有脂质双层膜的囊泡的生物体试样与结合有配体的固相载体进行接触,形成所述囊泡与所述固相载体的复合体,所述配体识别存在于所述囊泡表面的表面抗原,以及清洗工序,清洗所述复合体;在盐浓度0.15~2M的环境下进行所述复合体形成工序和所述清洗工序中的至少任一工序。2.根据权利要求1所述的分离方法,其中,在盐浓度0.15~2M的环境下进行所述复合体形成工序。3.根据权利要求1或2所述的分离方法,其中,所述生物体试样为体液或细胞培养上清液。4.根据权利要求1~3中任一项所述的分离方法,其中,所述生物体试样为体液。5.根据权利要求1~4中任一项所述的分离方法,其中,所述复合体形成工序所使用的复合体形成反应液含有无机盐。6.根据权利要求5所述的分离方法,其中,所述无机盐为碱金属卤化物。7.根据权利要求1~6中任一项所述的分离方法,其中,所述复合体形成工序中的复合体形成反应的反应温度为2~42℃的范围内。8.根据权利要求1~7中任一项所述的分离方法,其中,所述配体为识别存在于囊泡表面的表面抗原的抗体。9.根据权利要求1~8中任一项所述的分离方法,其中,所述囊泡为外来体。10.根据权利要求1~9中任一项所述的分离方法,其中,所述固相载体为磁性粒子。11.根据权利要求10所述的分离方法,其中,所述清洗工序包含如下工序:利用磁力集中所述磁性粒子而将磁性粒子与液相分离的集磁工序以及使在该集磁工序中所分离的磁性粒子分散在清洗液中的分散工序。12.一种囊泡中的核酸的检测方法,其特征在于,在权利要求1~11中任一项所述的分离方法之后,进一步包含对囊泡中的核酸进行检测的核酸检测工序。13.一种来自囊泡的蛋白质的检测方法,其特征在于,在权利要求1~11中任一项所述的分离方法之后,进一步包含对存在于囊泡的内侧和表面的至少一方的蛋白质进行检测的蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员:安倍弘喜,藤井宽也,内田公子,
申请(专利权)人:JSR株式会社,JSR生命科学株式会社,
类型:发明
国别省市:日本,JP
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