一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用，属于医学检验领域。本发明专利技术提供的DAS检测试剂盒的制备方法，能通过简单的制备步骤和常见的试剂，快速的制备出检测DAS的检测试剂盒，通过该制备方法制备的检测试剂盒，具有检测灵敏度高、特异性强的特点，DAS的检测试剂盒应用到检测DAS中，可以得到较为精确的结果，可以有效的避免漏检和误检。

【技术实现步骤摘要】
一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术涉及医学检验领域，具体而言，涉及一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
DAS分子式为C14H30N4O2，分子量286.41，是一种多胺的二乙酰基衍生物，在体内由鸟氨酸经鸟氨酸脱羧酶作用生成。是多胺代谢途径中非常重要的一环，在现在生命科学或医学研究过程中，多胺代谢研究是不可缺少的一部分。在生物体内，无论是植物、细菌还是动物，所有细胞的体内的多胺都是十分重要，最普遍也是有重要生理功能的多胺是腐胺，尸胺，亚精胺，精胺等.多胺有促进某些组织生长的作用，对于膜的正常维持也起着重要的作用.关于它们的作用机制还不甚清楚.它们带有正电荷的氨基使它们和带有负电的磷酸基的DNA和RNA结合，促进植物细胞以及动物细胞中DNA的转录和RNA的翻译；它们能和膜上的蛋白质或磷脂结合，使膜保持其稳定性。而近几年的研究过程中发现，二乙酰精胺在动物体内细胞异常增殖时，DAS含量会有一个明显的提升过程。目前国内外基于二乙酰精胺的检测均属于传统常规检测方法，如ELISA、生化法、HPLC、免疫层析等等，无论检测的方便性还是检测的灵敏性，已有的检测方法均存在较大的弊端，无法做到二者兼备。要么是方便性有了，准确性差，要么是准确性有了，操作复杂。高灵敏度检测方法的缺失对二乙酰精胺指标的研究带来了诸多的不便。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种DAS检测试剂盒的制备方法，通过本制备方法能快速的制备出检测结果较好的检测试剂盒。本专利技术的第二目的在于提供一种DAS检测试剂盒，该检测试剂盒能较好的、且精确的检测出DAS，具有较高的精确性和灵敏度。本专利技术的第三目的在于提供上述的DAS检测试剂盒在DAS检测中的应用。为了实现本专利技术的上述目的，采用以下技术方案：一种DAS检测试剂盒的制备方法，DAS检测试剂盒的制备方法包括制备第一检测试剂、第二检测试剂和显色试剂；将3-6mL浓度为1-3mg/mL的DAS抗体溶液与0.8-1.5mL1×的PBS混合缓冲液混合，并加入浓度为0.8-1.1mol/L的乙二胺溶液，经过透析得到浓度为0.8-1.3mg/mL的DAS抗体乙二胺溶液，由DAS抗体乙二胺溶液与NSP-SA-NHS/DMF溶液混合反应加入pH为8.3-8.6的碳酸盐混合缓冲液，制得DAS-Ab-NSP溶液，将DAS-Ab-NSP溶液制成第一检测试剂；将质量分数为2.1％-2.7％的羧基磁性微球液用柠檬酸缓冲液稀释，加入含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合，用pH＝5.5的柠檬酸缓冲液悬浮，制成微球悬浮液，将微球悬浮液与单乙酰精胺溶液混合沉淀并去上清，得到沉淀产物，将沉淀产物加入含有0.1％的BSA的9-14mmol/L的PBS溶液制成第二检测试剂；显色试剂包括第一显色剂和第二显色剂；第一显色剂主要由0.07mol/L-0.12mol/L的HNO3溶液和质量分数为0.08％-0.12％H2O2溶液制得；第二显色剂主要由0.2mol/L-0.29mol/L的NaOH溶液、体积分数0.8％-1.2％TWEEN20溶液和体积分数为0.8％-1.2％TritonX-100溶液。一种DAS检测试剂盒，DAS检测试剂盒由上述的DAS检测试剂盒的制备方法制得。上述的DAS检测试剂盒在DAS检测中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的DAS检测试剂盒的制备方法，能通过简单的制备步骤和常见的试剂，快速的制备出检测DAS的检测试剂盒，通过该制备方法制备的检测试剂盒，具有检测灵敏度高、特异性强的特点，DAS的检测试剂盒应用到检测DAS中，可以得到较为精确的结果，可以有效的避免漏检和误检。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实验例1提供的试剂盒灵敏性试验结果图；图2为本专利技术实验例2提供的稀释线性结果图；图3为本专利技术实验例3提供的信号强度对比实验结果图；图4为本专利技术实验例3提供的稀释线性对比实验结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种DAS检测试剂盒及其制备方法和应用进行具体说明。一种DAS检测试剂盒的制备方法，DAS检测试剂盒的制备方法包括制备第一检测试剂、第二检测试剂和显色试剂；将3-6mL浓度为1-3mg/mL的DAS抗体溶液与0.8-1.5mL1×PBS混合缓冲液混合，并加入浓度为0.8-1.1mol/L的乙二胺溶液，经过透析得到浓度为0.8-1.3mg/mL的DAS抗体乙二胺溶液，由DAS抗体乙二胺溶液与NSP-SA-NHS/DMF溶液混合反应加入pH为8.3-8.6的碳酸盐混合缓冲液，制得DAS-Ab-NSP溶液，将DAS-Ab-NSP溶液制成第一检测试剂；将质量分数为2.1％-2.7％的羧基磁性微球液用柠檬酸缓冲液稀释，加入含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合，用pH＝5.5的柠檬酸缓冲液悬浮，制成微球悬浮液，将微球悬浮液与单乙酰精胺溶液混合沉淀并去上清，得到沉淀产物，将沉淀产物加入含有0.1％的BSA的9-14mmol/L的PBS溶液制成第二检测试剂；显色试剂包括第一显色剂和第二显色剂；第一显色剂主要由0.07mol/L-0.12mol/L的HNO3溶液和质量分数为0.08％-0.12％H2O2溶液制得；第二显色剂主要由0.2mol/L-0.29mol/L的NaOH溶液、体积分数0.8％-1.2％TWEEN20溶液和体积分数为0.8％-1.2％TritonX-100溶液。进一步地，本专利技术的较佳实施例中，1×PBS混合缓冲液主要由17mg-20mg的EDC和2.7mg-4.1mg的NHS溶解于1mL的1×PBS溶液制得。进一步地，本专利技术的较佳实施例中，乙二胺溶液由1mL的1×PBS溶液稀释乙二胺得到。进一步地，本专利技术的较佳实施例中，NSP-SA-NHS/DMF溶液由二甲基甲酰胺稀释NSP-SA-NHS得到，NSP-SA-NHS/DMF溶液的浓度为1.7mg/mL-2.1mg/mL。进一步地，本专利技术的较佳实施例中，将DAS-Ab-NSP溶液制成第一检测试剂前还包括透析DAS-Ab-NSP溶液，透析液为0.1mol/L，pH＝6.3的PBS缓冲液，PBS缓冲液含有体积分数为0.1‰-0.5‰的proclin300；碳酸盐混合缓冲液含有体积分数为10％的赖氨酸和体积分数为5％的BSA溶液。进一步地，本专利技术的较佳实施例中，加入含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合前还包括加入质量分数为8％-11％的EDC溶液，避光保存12-19min；再加入EDC溶液室温保存8-15min；EDC溶液由EDC溶解于pH＝5.5的柠檬酸缓冲液制得。进一步地，本专利技术的较佳实施例中，单乙酰精胺溶液由单乙酰精胺溶解于pH＝5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述DAS检测试剂盒的制备方法包括制备第一检测试剂、第二检测试剂和显色试剂；将3‑6mL浓度为1‑3mg/mL的DAS抗体溶液与0.8‑1.5mL1×PBS混合缓冲液混合，并加入浓度为0.8‑1.1mol/L的乙二胺溶液，经过透析得到浓度为0.8‑1.3mg/mL的DAS抗体乙二胺溶液，由所述DAS抗体乙二胺溶液与NSP‑SA‑NHS/DMF溶液混合反应加入pH为8.3‑8.6的碳酸盐混合缓冲液，制得DAS‑Ab‑NSP溶液，将所述DAS‑Ab‑NSP溶液制成所述第一检测试剂；将质量分数为2.1％‑2.7％的羧基磁性微球液用柠檬酸缓冲液稀释，加入含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合，用pH＝5.5的柠檬酸缓冲液悬浮，制成微球悬浮液，将所述微球悬浮液与单乙酰精胺溶液混合沉淀并去上清，得到沉淀产物，将所述沉淀产物加入含有0.1％的BSA的9‑14mmol/L的PBS溶液制成所述第二检测试剂；所述显色试剂包括第一显色剂和第二显色剂；所述第一显色剂主要由0.07mol/L‑0.12mol/L的HNO3溶液和质量分数为0.08％‑0.12％H2O2溶液制得；所述第二显色剂主要由0.2mol/L‑0.29mol/L的NaOH溶液、体积分数0.8％‑1.2％TWEEN20溶液和体积分数为0.8％‑1.2％Triton X‑100溶液制得。...

【技术特征摘要】
1.一种DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述DAS检测试剂盒的制备方法包括制备第一检测试剂、第二检测试剂和显色试剂；将3-6mL浓度为1-3mg/mL的DAS抗体溶液与0.8-1.5mL1×PBS混合缓冲液混合，并加入浓度为0.8-1.1mol/L的乙二胺溶液，经过透析得到浓度为0.8-1.3mg/mL的DAS抗体乙二胺溶液，由所述DAS抗体乙二胺溶液与NSP-SA-NHS/DMF溶液混合反应加入pH为8.3-8.6的碳酸盐混合缓冲液，制得DAS-Ab-NSP溶液，将所述DAS-Ab-NSP溶液制成所述第一检测试剂；将质量分数为2.1％-2.7％的羧基磁性微球液用柠檬酸缓冲液稀释，加入含甘氨酸的柠檬酸溶液和乙醇胺混合，用pH＝5.5的柠檬酸缓冲液悬浮，制成微球悬浮液，将所述微球悬浮液与单乙酰精胺溶液混合沉淀并去上清，得到沉淀产物，将所述沉淀产物加入含有0.1％的BSA的9-14mmol/L的PBS溶液制成所述第二检测试剂；所述显色试剂包括第一显色剂和第二显色剂；所述第一显色剂主要由0.07mol/L-0.12mol/L的HNO3溶液和质量分数为0.08％-0.12％H2O2溶液制得；所述第二显色剂主要由0.2mol/L-0.29mol/L的NaOH溶液、体积分数0.8％-1.2％TWEEN20溶液和体积分数为0.8％-1.2％TritonX-100溶液制得。2.根据权利要求1所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述1×PBS混合缓冲液主要由17mg-20mg的EDC和2.7mg-4.1mg的NHS溶解于1mL的1×PBS溶液制得。3.根据权利要求1所述DAS检测试剂盒的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文欣，刘峰，
申请(专利权)人：辽宁迈迪生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21