L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法技术

本发明专利技术提供了一种L‑脯氨酰胺的液相色谱分析方法，包括以下步骤：分别精密量取L‑脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到L‑脯氨酰胺衍生物溶液；将所述L‑脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。本发明专利技术的液相色谱分析方法能够准确灵敏地检测L‑脯氨酰胺和D‑脯氨酰胺。

【技术实现步骤摘要】
L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法。
技术介绍
L-脯氨酰胺是合成维格列汀(Vildagliptin)的重要手性中间体，其对映异构体D-脯氨酰胺通常存在于市售的L-脯氨酰胺产品中，两者的结构式分别如下：L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的紫外吸收均较弱，常规的带紫外检测器的高效液相色谱仪(HPLC)无法灵敏地检测L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量，存在样品不易被检测的问题。因此，有必要研究能够准确灵敏地检测L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量的分析方法，以便能够在后续的维格列汀合成工艺中有效控制手性异构体的含量。
技术实现思路
为克服上述问题，本专利技术提供了一种灵敏、高效的L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法，所述方法包括以下步骤：1)分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，即得L-脯氨酰胺衍生物溶液；2)将L-脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。在一个实施方案中，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备L-脯氨酰胺溶液；将衍生试剂溶解于乙腈中以制备衍生试剂溶液；将三乙胺溶解于乙醇中以制备三乙胺乙醇溶液；将二乙胺溶解于乙醇中以制备二乙胺乙醇溶液；将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备三氟乙酸乙醇溶液。在一个实施方案中，进行上述色谱分析的色谱仪器及条件为：检测仪器：高效液相色谱仪，配备紫外检测器；色谱条件：色谱柱：DAICELCHIRALPAKIC4.6×250mm,5um；流动相：正己烷-乙醇(40/60(v/v))；检测波长：262nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样体积：10μL；样品盘温控：15℃；运行时间：30min；稀释液：0.1％的三氟醋酸/乙醇混合液。在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)，其结构式如下：进一步地，所述衍生试剂FMOC-Cl与L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺反应制备其对应的衍生物的原理如下：另一方面，本专利技术还提供了衍生试剂用于L-脯氨酰胺的液相色谱分析的用途。在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。另一方面，本专利技术还提供了L-脯氨酰胺衍生物，其具有如下结构：又一方面，本专利技术还提供了化合物的制备方法，包括以下步骤：分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到所述化合物。在一个实施方案中，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备所述L-脯氨酰胺溶液；将衍生试剂溶解于乙腈中以制备所述衍生试剂溶液；将三乙胺溶解于乙醇中以制备所述三乙胺乙醇溶液；将二乙胺溶解于乙醇中以制备所述二乙胺乙醇溶液；将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备所述三氟乙酸乙醇溶液。在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。本专利技术的有益效果在于：衍生试剂FMOC-Cl能将待测L-脯氨酰胺样品及其中含有的对映异构体D-脯氨酰胺在温和条件下在短时间内完全转化为其衍生物，所述衍生物紫外吸收较大，最大吸收波长达到262nm，而且所述衍生物在手性色谱中分离度较高，符合样品衍生化要求。附图说明图1为供试品衍生物溶液的HPLC谱图。具体实施方案检测仪器：高效液相色谱仪，配备紫外检测器色谱条件：色谱柱：DAICELCHIRALPAKIC4.6×250mm,5um流动相：正己烷-乙醇(40/60(v/v))检测波长：262nm流速：1.0ml/min柱温：30℃进样体积：10μL样品盘温控：15℃运行时间：30min溶液制备：稀释液：准确移取1.0ml三氟醋酸于1000ml乙醇中，混匀。供试品溶液：准确称取50mgL-脯氨酰胺样品于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。FMOC-Cl溶液：准确称取15mgFMOC-Cl样品溶于5ml乙腈中，混匀。(密封，4℃条件下保存，现用现配)。1％三乙胺乙醇溶液：准确移取1.0ml三乙胺于100ml乙醇中，混匀。1％二乙胺乙醇溶液：准确移取1.0ml二乙胺于100ml乙醇中，混匀。1％三氟醋酸乙醇溶液：准确移取1.0ml三氟醋酸于100ml乙醇中，混匀。空白溶液：分别用移液枪精密量取50μl稀释液、50μl1％三乙胺乙醇溶液、200μlFMOC-Cl溶液置于衍生反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应5min；再用移液枪精密量取250μl1％二乙胺乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应1min；再分别精密量取300μl1％三氟醋酸乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，即得。供试品衍生物溶液：分别用移液枪精密量取50μl供试品溶液、50μl1％三乙胺乙醇溶液、200μlFMOC-Cl溶液置衍生反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应5min；再用移液枪精密量取250μl1％二乙胺乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应1min；再分别精密量取300μl1％三氟醋酸乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，即得。分别注入空白溶液和供试品衍生物溶液于高效液相色谱仪中，分别记录色谱图。供试品衍生物溶液的HPLC谱图见图1，其中D-脯氨酰胺衍生物(杂质)的含量按照峰面积归一化计算。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种L‑脯氨酰胺的液相色谱分析方法，包括以下步骤：1)分别精密量取L‑脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到L‑脯氨酰胺衍生物溶液；2)将所述L‑脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。

【技术特征摘要】
1.一种L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法，包括以下步骤：1)分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到L-脯氨酰胺衍生物溶液；2)将所述L-脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备所述L-脯氨酰胺溶液；将衍生试剂溶解于乙腈中以制备所述衍生试剂溶液；将三乙胺溶解于乙醇中以制备所述三乙胺乙醇溶液；将二乙胺溶解于乙醇中以制备所述二乙胺乙醇溶液；将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备所述三氟乙酸乙醇溶液。3.根据权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：包策，应燕飞，王臻，朱国荣，屠勇军，
申请(专利权)人：浙江天宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33