The method of establishing the animal model of chronic glaucoma included: (1) taking the conjunctival tissue of GFP SD rats, sterilizing, digesting, separating the conjunctival epithelial layer, obtaining the conjunctival matrix tissue block; (2) the digestion of the conjunctival matrix tissue block pancreatin, the termination of digestion with cell culture fluid and the single cell suspension. After cell sieving, centrifugation and discarding the supernatant, the conjunctival stroma cells were precipitated; (3) a proper amount of cell culture fluid was added to a single cell to count, and a large number of conjunctival stromal cells were cultured in vitro; (4) the conjunctival stromal cells were digested with trypsin and were treated with steps (2). The conjunctival stromal cells were precipitated, and a proper amount of cell culture fluid was added to obtain the cell suspension. (5) the 10 UL cell suspension was injected into the right anterior chamber of the rat with a micro syringe and mixed well. The animal model of glaucoma obtained by this method has the advantages of long term stability, convenience, repeatability and low cost.
【技术实现步骤摘要】
慢性青光眼动物模型建立方法及其应用
本专利技术涉及一种慢性青光眼动物模型建立方法及其应用。
技术介绍
青光眼是以视神经萎缩、视野缺损及视力下降为共同特征的一组疾病,病理性眼压增高、视神经供血不足是其发病的原发危险因素,视神经对压力损害的耐受性也与青光眼的发生和发展有关。截至2010年,全球约有3千万青光眼患者,40岁以上人群患病率为3.5%([1]Glaucoma(2017).TheLancet.2017;390:2183-2193)。青光眼是全球三大致盲疾病之一,严重影响人民的生活质量。青光眼动物模型对于更好的理解青光眼性视神经病变的损伤机制及治疗措施有着重要的作用。目前慢性青光眼的动物模型主要有眼巩膜表面房水静脉注射高渗盐水法、激光诱导法、巩膜上静脉烧灼法、前方注射聚苯乙烯微球等方法([2]Rodentmodelsofglaucoma(2010).BrainResearchBulletin.2010;81:349-358)。虽然这些方法在建模初期均能使得实验动物眼内压的增高,但这些慢性青光眼动物模型的建立大多需要较高的技术条件,甚至维持动物高眼内压的时间相对比较短暂。有鉴于此,本专利技术人深入青光眼模型的研究工作,提出一种持续时间长、成本更低的慢性青光眼模型的建立方法,本案由此产生。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种长期稳定、简便易行、重复性好、成本低的慢性青光眼动物模型建立方法。为了实现上述目的,本专利技术的技术方案如下:慢性青光眼动物模型建立方法,包括以下步骤:(1)取GFP-SD大鼠的结膜组织,灭菌;将结膜组织放入分散酶或IV型胶原酶消 ...
【技术保护点】
1.慢性青光眼动物模型建立方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取GFP‑SD大鼠的结膜组织,灭菌;将结膜组织放入分散酶或IV型胶原酶消化液中,并置于细胞培养箱消化,分离弃掉结膜上皮层,得到结膜基质组织块;(2)将前述结膜基质组织块放入胰酶中消化,用细胞培养液终止消化,并吹打成单细胞悬浊液;单细胞悬浊液经70um孔径大小的细胞筛,后于离心机中离心处理,弃掉上清液,得到结膜基质细胞沉淀;(3)在前述结膜基质细胞沉淀中加入适量的细胞培养液,吹打成单细胞后进行计数,将单细胞以一定密度种植于培养皿中进行体外培养,得到数量可观的结膜基质细胞;(4)经体外培养得到的结膜基质细胞用胰酶消化后,用步骤(2)的方法处理得到结膜基质细胞沉淀,加入适量的细胞培养液得到细胞悬浊液,细胞计数,使得最终细胞密度为1 × 107 个/ml;(5)在麻醉下将10 ul 步骤(4)得到的细胞悬浊液用微量注射器注入大鼠右眼前房内并充分混匀,使其均匀分布于前房,左眼不处理作为正常对照眼球。
【技术特征摘要】
1.慢性青光眼动物模型建立方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取GFP-SD大鼠的结膜组织,灭菌;将结膜组织放入分散酶或IV型胶原酶消化液中,并置于细胞培养箱消化,分离弃掉结膜上皮层,得到结膜基质组织块;(2)将前述结膜基质组织块放入胰酶中消化,用细胞培养液终止消化,并吹打成单细胞悬浊液;单细胞悬浊液经70um孔径大小的细胞筛,后于离心机中离心处理,弃掉上清液,得到结膜基质细胞沉淀;(3)在前述结膜基质细胞沉淀中加入适量的细胞培养液,吹打成单细胞后进行计数,将单细胞以一定密度种植于培养皿中进行体外培养,得到数量可观的结膜基质细胞;(4)经体外培养得到的结膜基质细胞用胰酶消化后,用步骤(2)的方法处理得到结膜基质细胞沉淀,加入适量的细胞培养液得到细胞悬浊液,细胞计数,使得最终细胞密度为1×107个/ml;(5)在麻醉下将10ul步骤(4)得到的细胞悬浊液用微量注射器注入大鼠右眼前房内并充分混匀,使其均匀分布于前房,左眼不处理作为正常对照眼球。2.如权利要求1所述的慢性青光眼动物模型建立方法,其特...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴仁毅,黄昌泉,汪耀,吕洁璇,李晓红,
申请(专利权)人:厦门大学附属厦门眼科中心有限公司,
类型:发明
国别省市:福建,35
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