一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法技术

本发明专利技术公开了一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，包括如下步骤：术前准备、细胞移植和术后处理，本发明专利技术的NPC不仅来源广泛,获取方便；增殖能力强，具有较强的细胞活性；具有良好的分化调控性；具备多向分化潜能；可作为基因治疗的良好载体，同时通过本方法进行试验，可以看出在治疗4周后脑瘫患儿的粗大运动功能中卧位与翻身、坐位、行走与主动抓握及手眼协调能力均得到明显改善，所以本发明专利技术可以直接阻止脑损伤进程或促进损伤神经的再生。

A method for the treatment of cerebral palsy in children by a kind of neural precursor cells

The invention discloses a method of neural precursor cells in the treatment of children with cerebral palsy, which comprises the following steps: preoperative preparation, cell transplantation and postprocessing technique, the invention of the NPC are not only convenient access; strong proliferation ability, with strong activity with cell differentiation; good control; have the potential of multi-directional differentiation can be used as a good carrier; gene therapy at the same time, through the experiment of this method can be seen were improved significantly in the treatment of decubitus of gross motor function in children with cerebral palsy after 4 weeks and turning over, sitting, walking and driving grip and hand eye coordination, so the invention can directly prevent brain damage or promote the injured nerve regeneration process the.

【技术实现步骤摘要】
一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法
本专利技术涉及医疗
，具体为一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法。
技术介绍
目前已经发现有多种因素能够造成新生儿脑损伤，其中最主要的原因就是围生期窒息及由此引发的新生儿缺氧–缺血性脑病(hypoxia-ischemicencephalopathy,HIE)。据统计大约4‰的足月新生儿会发生围生期窒息，而早产儿发病率会更高，其中有20％-50％患儿因此病导致脑损伤而在新生儿期死亡，而存活患儿中也有25％-60％会遗留持久性神经发育障碍，如脑性瘫痪、癫痫、智力低下等后遗症。我国每年出生的新生儿中，有30万左右的窒息儿因为缺氧–缺血性脑病遗留永久性脑损害，如脑瘫、癫痫、智力低下、视听障碍等临床后遗症，导致不同程度的残疾，给家庭和社会造成了极大的危害，新生儿缺氧–缺血性脑病的防治研究已成为一项直接关系国民素质和生活质量的重要课题。近年来，在HIE的病因和发病机制、药物治疗和干预措施方面均取得了较大进展，已经延伸到基因和分子水平，然而目前的治疗仅局限于支持疗法，而没有直接阻止脑损伤进程或促进损伤神经再生的措施。
技术实现思路
本专利技术提供一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，NPC不仅来源广泛,获取方便；增殖能力强，具有较强的细胞活性；具有良好的分化调控性；具备多向分化潜能；可作为基因治疗的良好载体；同时通过本方法进行试验，可以看出在治疗4周后患儿的粗大运动功能中卧位与翻身、坐位、行走与主动抓握及手眼协调能力均得到明显改善，所以本专利技术可以直接阻止脑损伤进程或促进损伤神经的再生，可以有效解决上述
技术介绍
中的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，包括如下步骤：1)术前准备：(一)患儿的准备一、术前检查(1)血液学检查：免疫四项，凝血三项，乙肝六项，肝肾功能，血常规，血型；(2)脑电图：无发作及可疑发作患儿进行常规脑电图检查；对有可疑发作，既往有明显惊厥发作的患儿进行视频脑电图检查或24小时动态脑电图监测；(3)影像资料：半年内头颅MRI检查；(4)术前进行智力运动评估，采用残疾儿童综合功能评估，GMFM88量表；二、知情同意患儿家长或法定监护人自愿接受细胞移植治疗，并已充分了解神经前体细胞移植的风险及可能出现的并发症；(二)细胞制备取孕10-l4周水囊引产人胚胎脑组织，经医院伦理管理委员会通过，在妊娠妇女知情同意情况下，留取胚胎组织，每例胚胎供体均需行家族史，遗传病，传染病，流行病，先天性疾病排查；遗传代谢病筛查；染色体分析及基因病筛查；常见传染病筛查；根据检验结果，排除以上异常供体，留取胚胎脑组织；NPC培养基重悬细胞，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的孵箱内静止培养并传代，将神经球分离成细胞悬液，交付使用，与此同时进行NPC活性鉴定，活性>95％；内毒素检测，低于2EU/ml；细胞表面标志分析，CDl33阳性率不低于40％，nestin阳性不低于90％；2)神经前体细胞移植：(一)神经前体细胞脑室内移植(1)时间：第l周；(2)路径：脑室；(3)剂量：(4-6)×106cells/次；(4)体表定位侧脑室，穿刺针进入脑实质，每向前刺入0.5cm，即将针芯取出一次，看有无脑脊液流出，直至脑室为止。留取2-3ml脑脊液之后，将置于lml注射器内的NPC缓慢推入侧脑室内，回抽顺利，缓慢冲洗2次，确定注射器内无残留NPC，缓慢拔出穿刺针，按压穿刺点l分钟，缝合穿刺口，无菌敷贴保护伤口；穿刺过程，注意观察患者意识，瞳孔，脉搏，呼吸的改变；若病情突变，应立即停止操作，并进行抢救；(二)神经前体细胞腰椎穿刺移植(1)时间：第2周，第3周；(2)路径：蛛网膜下腔；(3)剂量：(6-8)×106cells/次；(三)麻醉及术中支持(1)麻醉采用丙泊酚、氯胺酮、咪达唑仑、利多卡因基础麻醉，术中常规吸氧并监测生命体征，出现紧急情况参照应急预案处理；(2)预防出血每例患儿术前予白眉蛇毒凝血酶0.5-2U，预防出血；3)术后处理：(1)侧脑室内细胞移植术后头低足高位6小时，后去枕平卧48小时；(2)术后心电监护6小时，同时观察瞳孔及神志恢复情况，一旦出现异常立即进行头颅CT检查，除外穿刺出血；(3)加强护理，由护士进行喂养及护理示范；(4)2天内预防感染，术后开始神经营养药物静脉点滴共28天；(5)功能训练：术后48小时后在相关科室附设的康复中心接受相应的综合康复训练。根据上述技术方案，所述免疫四项为：HBV、HCV、HIV和梅毒标志物。根据上述技术方案，所述遗传代谢病筛查包括氨基酸、有机酸、脂肪酸代谢筛查和酶学筛查；所述染色体分析及基因病筛查包括染色体分析和G显带分析；所述常见传染病筛查包括乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒标志物、CMV病毒和EB病毒。根据上述技术方案，所述神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法的适应证包括：(1)符合l989年全国脑性瘫痪会议制定的小儿脑性瘫痪的诊断条件及分型标准的CP患儿；(2)根据GMFCS分级系统，Ⅲ-Ⅴ级的患儿；(3)痉挛型脑瘫，不随意运动型脑瘫，混合型脑瘫及共济失调型脑瘫；(4)康复治疗6个月无效或康复治疗有禁忌证的脑瘫患儿；(5)排除进展性遗传代谢病。根据上述技术方案，所述神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法的禁忌证包括：(1)严重先天性心脏病，心功能不全；(2)严重肺部疾患，呼吸衰竭；(3)全身合并其他急、慢性感染；(4)术前6个月内有较频繁癫痫发作；(5)脊髓疾病；(6)脑部肿瘤及其他恶性肿瘤；(7)出凝血功能障碍伴有出血倾向；(8)合并免疫缺陷疾病或自身免疫性疾病；(9)合并其他严重儿科疾患。根据上述技术方案，所述神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法还包括术后安全性评价：(1)感染的评估：术后l周内每天监测发热，如果出现发热，先排除常见呼吸道、肠道感染，予对症治疗；不明原因发热超过3天，伴有精神、反应差，或出现中枢神经系统感染症状，进行头颅MRI检查，必要时行腰椎穿刺，除外中枢神经系统感染；(2)出血的评估：术后6小时内注意神志、瞳孔、生命体征的观察，出现异常，要警惕急性术后出血，立即头颅CT检查，必要时立即行手术治疗；术后l周内观察患儿精神反应、食欲，观察有无新的中枢神经系统症状出现，怀疑有小出血者，行头颅CT检查，发现有少量出血者，一般不用手术处理，予对症治疗；(3)惊厥的评估：对术前脑电图有棘尖波或曾有惊厥发作患儿选择相应的神经营养药物，并注意惊厥发作的可能；发现可疑发作，及时行脑电图检查，予对症治疗。根据上述技术方案，所述神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法还包括术后有效性评价：(1)临床症状的评估：术后l个月由家长、医师共同观察认可的临床症状、体征改善，并做详细记录，共同签字；术后6、l2个月使用父母随访问卷、电话电邮咨询或返院复诊的形式进行临床症状的观察记录；(2)残疾儿童综合功能评估：移植患儿进行残疾儿童综合功能评估：设定术前6个月、术时、术后6个月，通过父母随访问卷进行评估测试一次，包括认知功能、语言功能、粗大运动功能、自理动作和社会适应五个方面，每个方面分10个小项，共50项；通过治疗前后自身对照，比较移植前后6个月时间段内总分提高幅度，反映患儿生活综合能力进步情况；(3)GMFM88：于术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)术前准备：(一)患儿的准备一、术前检查(1)血液学检查：免疫四项、凝血三项、乙肝六项、肝肾功能、血常规、血型；(2)脑电图：无发作及可疑发作患儿进行常规脑电图检查；对有可疑发作，既往有明显惊厥发作的患儿进行视频脑电图检查或24小时动态脑电图监测；(3)影像资料：半年内头颅MRI检查；(4)术前进行智力运动评估，采用残疾儿童综合功能评估，GMFM88量表；二、知情同意患儿家长或法定监护人自愿接受细胞移植治疗，并已充分了解神经前体细胞移植的风险及可能出现的并发症；(二)细胞制备取孕10‑14周水囊引产人胚胎脑组织，经医院伦理管理委员会通过，在妊娠妇女知情同意情况下，留取胚胎组织，每例胚胎供体均需行家族史、遗传病、传染病、流行病、先天性疾病排查；遗传代谢病筛查；染色体分析及基因病筛查；常见传染病筛查；根据检验结果，排除以上异常供体，留取胚胎脑组织；神经前体细胞(Neural Progenitor Cells,NPC)培养基重悬细胞，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的孵箱内静止培养并传代，将神经球分离成细胞悬液，交付使用，与此同时进行NPC活性鉴定，活性>95％，内毒素检测，低于2EU/ml，细胞表面标志分析：CDl33阳性率不低于40％，nestin阳性不低于90％；2)神经前体细胞移植：(一)神经前体细胞脑室内移植(1)时间：第l周；(2)路径：脑室；(3)剂量：(4‑6)×10...

【技术特征摘要】
1.一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)术前准备：(一)患儿的准备一、术前检查(1)血液学检查：免疫四项、凝血三项、乙肝六项、肝肾功能、血常规、血型；(2)脑电图：无发作及可疑发作患儿进行常规脑电图检查；对有可疑发作，既往有明显惊厥发作的患儿进行视频脑电图检查或24小时动态脑电图监测；(3)影像资料：半年内头颅MRI检查；(4)术前进行智力运动评估，采用残疾儿童综合功能评估，GMFM88量表；二、知情同意患儿家长或法定监护人自愿接受细胞移植治疗，并已充分了解神经前体细胞移植的风险及可能出现的并发症；(二)细胞制备取孕10-14周水囊引产人胚胎脑组织，经医院伦理管理委员会通过，在妊娠妇女知情同意情况下，留取胚胎组织，每例胚胎供体均需行家族史、遗传病、传染病、流行病、先天性疾病排查；遗传代谢病筛查；染色体分析及基因病筛查；常见传染病筛查；根据检验结果，排除以上异常供体，留取胚胎脑组织；神经前体细胞(NeuralProgenitorCells,NPC)培养基重悬细胞，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的孵箱内静止培养并传代，将神经球分离成细胞悬液，交付使用，与此同时进行NPC活性鉴定，活性>95％，内毒素检测，低于2EU/ml，细胞表面标志分析：CDl33阳性率不低于40％，nestin阳性不低于90％；2)神经前体细胞移植：(一)神经前体细胞脑室内移植(1)时间：第l周；(2)路径：脑室；(3)剂量：(4-6)×106cells/次；(4)体表定位侧脑室，穿刺针进入脑实质，每向前刺入0.5cm，即将针芯取出一次，看有无脑脊液流出，直至脑室为止，留取2-3ml脑脊液之后，将置于lml注射器内的NPC缓慢推入侧脑室内；回抽顺利，缓慢冲洗2次，确定注射器内无残留NPC，缓慢拔出穿刺针，按压穿刺点l分钟，缝合穿刺口，无菌敷贴保护伤口；穿刺过程，注意观察患者意识、瞳孔、脉搏、呼吸的改变，若病情突变，应立即停止操作，并进行抢救；(二)神经前体细胞腰椎穿刺移植(1)时间：第2周，第3周；(2)路径：蛛网膜下腔；(3)剂量：(6-8)×106cells/次；(三)麻醉及术中支持(1)麻醉采用丙泊酚、氯胺酮、咪达唑仑、利多卡因基础麻醉，术中常规吸氧并监测生命体征，出现紧急情况参照应急预案处理；(2)预防出血每例患儿术前予白眉蛇毒凝血酶0.5-2U，预防出血。3)术后处理：(1)侧脑室内细胞移植术后头低足高位6小时，后去枕平卧48小时；(2)术后心电监护6小时，同时观察瞳孔及神志恢复情况，一旦出现异常立即进行头颅CT检查，除外穿刺出血；(3)加强护理，由护士进行喂养及护理示范；(4)2天内预防感染，术后开始神经营养药物静脉点滴共28天；(5)功能训练：术后48小时后在相关科室附设的康复中心接受相应的综合康复训练。2.根据权利要求1所述的一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，其特征在于：所述免疫四项为：乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、艾滋病病毒(HIV)和梅毒标志物。3.根据权利要求1所述的一种神经前体细胞治疗小儿脑瘫的方法，其特征在于：所述遗传代谢病筛查包括氨基酸、有机酸、脂肪酸代谢筛查和酶学筛查；所述染色体分析及基因病筛查包括染色体分析和G显带分析；所述常见传染病筛查包...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨涛，隋昳，
申请(专利权)人：杨涛，
类型：发明
国别省市：上海,31